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间充质干细胞来源凋亡囊泡缓解牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导下巨噬细胞促炎状态的研究 被引量：5
1
作者 叶庆元 李子涵 +4 位作者 王垭铮 刘世宇 周峻 刘思颖 王勤涛 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期791-798,共8页
目的探索骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMMSC)来源凋亡囊泡对小鼠巨噬细胞系RAW264.7极化状态的影响及对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)诱导的促炎状态巨噬细胞的调控,为牙周炎治疗提供依据。方... 目的探索骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMMSC)来源凋亡囊泡对小鼠巨噬细胞系RAW264.7极化状态的影响及对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)诱导的促炎状态巨噬细胞的调控,为牙周炎治疗提供依据。方法使用Operetta CLS高内涵分析系统动态观察星形孢菌素(staurosporine,STS)诱导的BMMSC的凋亡过程;使用场发射扫描电镜、动态光散射技术、流动电势法测量凋亡囊泡相关表征;使用Operetta CLS高内涵分析系统动态观察小鼠巨噬细胞系RAW264.7对5-羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯(5-carboxy-tetramethylrhodamine,succinimidyl ester,5-TAMRA-SE)标记的凋亡囊泡的吞噬作用;采用实时荧光定量PCR检测精氨酸合酶-1(arginase-1,Arg-1)mRNA相对表达量;采用细胞免疫荧光、蛋白质印迹法检测凋亡囊泡对Pg来源的脂多糖(lipopolysaccharide from Pg,Pg-LPS)诱导的RAW264.7中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达的影响;采用酶联免疫吸附测定法检测Pg-LPS诱导的促炎状态RAW264.7培养上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factro-α,TNF-α)的分泌情况。结果0.5μmol/L STS处理12 h后小鼠BMMSC形态皱缩,周围有明显的凋亡囊泡产生;凋亡囊泡的粒径为100~1000 nm,平均Zeta电势为-16.6 mV;RAW264.7可以通过伪足吞噬小鼠BMMSC来源的凋亡囊泡;小鼠BMMSC来源的凋亡囊泡联合白介素-4(interleukin4,IL-4)刺激的RAW 264.7 Arg-1 mRNA表达量(261.97±15.91)较单独IL-4刺激的mRNA表达量(115.29±15.42)显著升高(P<0.01);凋亡囊泡与Pg-LPS共同作用下,RAW 264.7 iNOS阳性细胞数量[(39.33±4.70)个]显著低于Pg-LPS单独诱导的RAW 264.7 iNOS阳性细胞数量[(95.33±4.70)个](P=0.007),RAW264.7 iNOS蛋白相对表达量(5.84±1.05)显著低于Pg-LPS单独诱导的RAW 264.7 iNOS蛋白相对表达量(14.91±3.87)(P<0.01),RAW264.7细胞培养上清液中TNF-α含量[(21899.71±409.73)ng/L]显著低于Pg-LPS单独诱导下RAW264.7细胞� 展开更多
关键词 牙周炎 间质干细胞 巨噬细胞 凋亡囊泡 极化状态
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巨噬细胞来源的凋亡外囊泡对成骨细胞增殖的影响 被引量：1
2
作者 冀吉昀 张曦戈 +5 位作者 叶庆元 王垭铮 王晓雨 葛晓彤 李蕊 王勤涛 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期291-295,共5页
目的:探索巨噬细胞来源的凋亡外囊泡(apoEVs)对成骨细胞增殖活性的影响。方法:使用星孢菌素诱导RAW264.7细胞凋亡,差速离心法提取上清液内的细胞外囊泡,BCA蛋白定量对细胞外囊泡进行定量后,使用不同浓度(0.05~10mg/L)的apoEVs与MC3T3-E... 目的:探索巨噬细胞来源的凋亡外囊泡(apoEVs)对成骨细胞增殖活性的影响。方法:使用星孢菌素诱导RAW264.7细胞凋亡,差速离心法提取上清液内的细胞外囊泡,BCA蛋白定量对细胞外囊泡进行定量后,使用不同浓度(0.05~10mg/L)的apoEVs与MC3T3-E1细胞进行共培养,通过激光共聚焦观察apoEVs是否被MC3T3-E1细胞吞噬。随后分别在24、48、72h使用MTT法测定MC3T3-E1的增殖活性。使用RNA酶对apoEVs进行处理,与MC3T3-E1细胞进行共培养一段时间后,再次使用MTT法测定MC3T3-E1细胞活性。结果:成功提取出apoEVs,5mg/L以下浓度的apoEVs使得MC3T3-E1细胞增殖活性增强,而浓度10mg/L的apoEVs使得MC3T3-E1细胞增殖活性降低;各浓度的无RNA的apoEVs均使得细胞增殖活性降低。结论:巨噬细胞来源的apoEVs在低浓度时对MC3T3-E1有促增殖能力,而高浓度时有抑制增殖能力。其中apoEVs内的RNA可能在促进增殖中发挥主要作用。 展开更多
关键词 巨噬细胞 凋亡外囊泡 成骨细胞 增殖 RNA
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脐带间充质干细胞凋亡囊泡在2型糖尿病小鼠拔牙创愈合中的作用研究
3
作者 王一名 马振 +6 位作者 张武阳 李元 郭祥 邓天阁 李蓓 胡开进 薛洋 《中国实用口腔科杂志》 CAS CSCD 2023年第3期312-319,共8页
目的研究脐带间充质干细胞凋亡囊泡(apoptotic extracellular vesicles of umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSC-ApoEVs)能否促进2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)小鼠拔牙创愈合并探讨其机制。方法通过星胞菌素诱导U... 目的研究脐带间充质干细胞凋亡囊泡(apoptotic extracellular vesicles of umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSC-ApoEVs)能否促进2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)小鼠拔牙创愈合并探讨其机制。方法通过星胞菌素诱导UCMSCs凋亡,将提取的UCMSC-ApoEVs(PBS悬液)用于T2DM小鼠拔牙创(T2DM+ApoEVs组,db/db小鼠28只);另设置正常组(db/m小鼠28只)和T2DM组(db/db小鼠28只),拔牙创注入等量PBS。应用体视显微镜、Micro CT、HE染色等方法评估拔牙创愈合情况,通过免疫荧光染色、实时荧光定量PCR检测拔牙创愈合过程中炎症小体核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-1、Gasdermin家族蛋白D(GSDMD)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-18等巨噬细胞焦亡相关指标。结果T2DM组小鼠拔牙创黏膜愈合和新骨形成速率均显著低于正常组小鼠,最终愈合的骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.th)、骨小梁数目(Tb.N)显著下降,黏膜下层炎细胞浸润明显(P<0.05);T2DM+ApoEVs组小鼠拔牙创黏膜愈合和新骨形成均较T2DM组显著加速,BV/TV、Tb.th、Tb.N显著上调,炎细胞浸润减轻,差异均具有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光结果显示,3组小鼠拔牙创新生骨周围均存在明显的NLRP3、激活态Cleaved Caspase-1、GSDMD与巨噬细胞标志物F4/80共定位;T2DM组焦亡蛋白相对荧光强度高于正常组,而T2DM+ApoEVs组较T2DM组明显下调(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,T2DM组拔牙创内的NLRP3、GSDMD以及IL-1β、IL-18的mRNA表达水平较正常组明显增高,而T2DM+ApoEVs组较T2DM组明显下调(P<0.05)。结论UCMSC-ApoEVs可通过抑制巨噬细胞焦亡减轻炎症,最终促进T2DM小鼠拔牙创黏膜及骨愈合。 展开更多
关键词 2型糖尿病 牙拔除术 脐带间充质干细胞 凋亡囊泡 焦亡
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