大鲵皮肤分泌液中抗菌肽的鉴定及生物活性研究 被引量：28

1

作者 王利锋 李学英 王大忠 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期269-272,共4页

目的鉴定大鲵皮肤分泌液中抗菌肽,研究其部分生物活性。方法 5%醋酸浸提和Sephadex G-50、G-25凝胶过滤色谱等方法分离纯化抗菌肽;采用抑菌圈法检测抗菌活性,Tricine-SDS-PAGE电泳和等电聚焦电泳鉴定其抗菌活性成份。结果大鲵皮肤分泌... 目的鉴定大鲵皮肤分泌液中抗菌肽,研究其部分生物活性。方法 5%醋酸浸提和Sephadex G-50、G-25凝胶过滤色谱等方法分离纯化抗菌肽;采用抑菌圈法检测抗菌活性,Tricine-SDS-PAGE电泳和等电聚焦电泳鉴定其抗菌活性成份。结果大鲵皮肤分泌液中含有抗菌活性物质。对革兰阴性菌、革兰阳性菌和真菌均具有较强的抗菌活性;电泳检测显示该小分子多肽相对分子质量约为4 300,具有较强的碱性。结论首次从大鲵皮肤分泌液中分离纯化到一种抗菌肽,此抗菌肽可能是一个具有较强阳离子特征的碱性肽。 展开更多

关键词 大鲵 皮肤 抗菌肽 分离纯化

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从吉林林蛙干皮中提取抗菌肽 被引量：11

2

作者 邱芳萍 周杰 《吉林工学院学报（自然科学版）》 CAS 2002年第2期4-6,共3页

从吉林林蛙干皮中分离提取了具有广谱抗菌作用的多肽 ,制备得到抗菌肽样品。在实验中摸索出提取抗菌肽的最佳工艺路线 ,建立了抗菌肽的纯化方法 。

关键词 吉林林蛙 抗菌肽 纯化 氨基酸 组成分析 抗菌机理 多肽 制备

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九香虫抗菌肽CcAMP1的分离纯化和抗菌活性检测 被引量：21

3

作者 李尚伟 赵柏松 杜娟 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期610-616,共7页

【目的】从药用昆虫九香虫Coridius chinensis中分离纯化抗菌肽,为进一步开发九香虫抗菌肽资源及深入挖掘九香虫的药用功能奠定基础。【方法】用大肠杆菌Escherichia coli和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus混合物作诱导源刺激九香... 【目的】从药用昆虫九香虫Coridius chinensis中分离纯化抗菌肽,为进一步开发九香虫抗菌肽资源及深入挖掘九香虫的药用功能奠定基础。【方法】用大肠杆菌Escherichia coli和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus混合物作诱导源刺激九香虫产生抗菌肽,对血淋巴进行提取、凝胶过滤层析、固相萃取及反相色谱纯化,活性组分经质谱测定。对分离得到的这种抗菌肽进行人工合成,并进行抗菌活性检测。【结果】本研究获得一种九香虫抗菌肽Cc AMP1,由17个氨基酸残基组成,分子量为1 997.37 u,带1个正电荷,表面有5个疏水氨基酸。对人工合成的Cc AMP1进行抗菌活性检测表明,该抗菌肽与九香虫血淋巴一样对金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌和大肠杆菌等革兰氏阴性菌都有较好的抗菌活性,且对革兰氏阴性菌的抗菌活性更强。【结论】从九香虫中分离得到具有较强抗菌活性的阳离子抗菌肽Cc AMP1,有较大的开发利用价值。 展开更多

关键词 九香虫 抗菌肽 抗菌活性 分离 纯化

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华重楼内生菌抗菌肽的分离纯化及其特性 被引量：19

4

作者 程媛媛 雍彬 +3 位作者 张超 刘强 严伟 王一丁 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期498-503,共6页

【目的】华重楼内生菌PCE45具有较强的抗菌活性,本文将对PCE45产生的抗菌物质进行分离纯化和性质分析报道。【方法】PCE45发酵液经硫酸铵盐析、丙酮沉淀、SephadexG75柱、DE52纤维素柱和SephadexG25凝胶柱纯化分离得到抗菌肽PCP-1。【... 【目的】华重楼内生菌PCE45具有较强的抗菌活性,本文将对PCE45产生的抗菌物质进行分离纯化和性质分析报道。【方法】PCE45发酵液经硫酸铵盐析、丙酮沉淀、SephadexG75柱、DE52纤维素柱和SephadexG25凝胶柱纯化分离得到抗菌肽PCP-1。【结果】稳定性测试表明该抗菌肽对蛋白酶不敏感,对高温、强酸、强碱有较好的耐受性,可造成稻瘟病菌菌丝畸形并抑制孢子萌发。抑菌谱表明该抗菌肽对玉米弯孢病菌等真菌和大肠杆菌等细菌有较强的抑菌效果。质谱测得其分子量为1058.3。氨基酸组成分析表明该小肽主要由7种氨基酸组成。茚三铜反应呈阴性,酸水解后,茚三酮反应和双缩尿反应呈阳性。【结论】根据茚三酮反应和双缩尿反应结果推测PCP-1可能为低分子量的环状小肽。这是首次关于华重楼内生菌抗菌肽的研究报道。 展开更多

关键词 华重楼 内生菌 抗菌肽 纯化

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枯草芽孢杆菌菌株B_3抗菌肽的分离纯化与鉴定 被引量：13

5

作者 白杰 贠建民 +3 位作者 祝发明 严海娇 张紊玮 艾对元 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期78-85,共8页

针对1株分离自甘肃河西盐碱土壤的具有产抗菌肽潜质的枯草芽孢杆菌B_3菌株(Bacillus subtilis B_3),拟构建一种有效的抗菌肽分离纯化方法,旨在为获得该抗菌肽纯品及其结构信息,并为抗菌肽制备及其制品检测提供方法参考。采用由阳离子交... 针对1株分离自甘肃河西盐碱土壤的具有产抗菌肽潜质的枯草芽孢杆菌B_3菌株(Bacillus subtilis B_3),拟构建一种有效的抗菌肽分离纯化方法,旨在为获得该抗菌肽纯品及其结构信息,并为抗菌肽制备及其制品检测提供方法参考。采用由阳离子交换层析、疏水层析和尺寸排阻层析单元组成的串联柱层析系统对B_3菌株液态发酵产物进行初步分离,对不同时段的收集液做抑菌实验,比较评价分步层析效果;再通过反相HPLC进一步分离纯化后用质谱分析检测,以获得具有抑菌活性多肽的分子质量及结构信息。经串联层析法分离的具有抑菌活物质是一种小分子富脯氨酸抗菌肽,其氨基酸序列Pro-Tyr-Ile-Pro-Gln-Pro-Arg-Pro-Pro-His-Pro-Arg-Leu,分子质量为1 567.86 Da,等电点为10.84。经美国国立生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)数据库比对,发现其为一种未报道的多肽。经抑菌活性检测表明,该抗菌肽对大肠杆菌(Escherichia coli)和沙门氏杆菌(Salmonella enterica subsp.enterica)均有抑菌作用,其最小抑菌质量浓度均为0.020 312μg/mL。同时,该抗菌肽表现出较强的耐热性、耐酸碱性和光照稳定性,是一种对供试靶标菌具有抑菌活性的新抗菌肽。 展开更多

关键词 枯草芽孢杆菌B3 抗菌肽 分离纯化 抑菌活性

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地衣芽孢杆菌抗菌肽的纯化及抗菌特性分析 被引量：12

6

作者 樊陈 高兆建 +4 位作者 张桂英 鞠民友 孙会刚 杜永凯 王东星 《中国农学通报》 CSCD 2013年第33期313-318,共6页

以研究地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)LY12所产抗菌肽特性,从发酵液中分离纯化该抗菌肽。通过超滤、离子交换层析、分子筛凝胶过滤层析、反向高效液相色谱等方法纯化该抗菌肽。结果显示:LC-ESI-MS质谱测得抗菌肽分子量为2750.785... 以研究地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)LY12所产抗菌肽特性,从发酵液中分离纯化该抗菌肽。通过超滤、离子交换层析、分子筛凝胶过滤层析、反向高效液相色谱等方法纯化该抗菌肽。结果显示:LC-ESI-MS质谱测得抗菌肽分子量为2750.785 Da,同Tricine SDS-PAGE分析结果基本一致。体外抗菌试验结果显示,抗菌肽LYF12能够抑制丝状真菌、细菌的生长。对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Escherichia coli)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、藤黄微球菌(Micrococcus aureus)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、副溶血性弧菌(Vibrio parachaemolyticus)的最低抑菌浓度分别为9.8、19.8、20.7、7.2、9.6、10.2、15.7μg/mL。从地衣芽孢杆菌LY12分离的抗菌肽显示出对革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌及真菌具有较好的抗菌效果,故在食品防腐中具有潜在的应用价值。 展开更多

关键词 抗菌肽 地衣芽孢杆菌 纯化 抑菌特性

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无指盘臭蛙皮肤抗菌肽的分离纯化与氨基酸序列测定 被引量：7

7

作者 刘炯宇 江建平 +2 位作者 何开泽 谢锋 郑中华 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期834-839,共6页

在抗菌活性跟踪下对四川冕宁产无指盘臭蛙(Odorrana grahami)皮肤分泌物进行一系列层析分离,最终纯化得到4种抗菌肽,分别命名为Odorgrin A、Odorgrin B、Odorgrin C和Odorgrin D.质谱测得单一同位素分子量Mr分别为3364.8、3817.9、4859.... 在抗菌活性跟踪下对四川冕宁产无指盘臭蛙(Odorrana grahami)皮肤分泌物进行一系列层析分离,最终纯化得到4种抗菌肽,分别命名为Odorgrin A、Odorgrin B、Odorgrin C和Odorgrin D.质谱测得单一同位素分子量Mr分别为3364.8、3817.9、4859.4和3287.9.Edman降解法测得OdorgrinA的氨基酸序列为GLLDTFKNLALNAAKSAGVSV-LNSLSCKLSKTC.将以上结果与国内外对该物种抗菌肽研究的已有结果进行了比较分析,证明本研究分离到的4种抗菌肽与前人分离到的部分抗菌肽间具有一致性. 展开更多

关键词 无指盘臭蛙 皮肤分泌物 抗菌肽 分离纯化 氨基酸序列

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牛蛙皮肤抗菌肽的分离纯化与活性测定 被引量：7

8

作者 赵瑞利 韩文瑜 +6 位作者 韩俊友 雷连成 孙长江 冯新 乔红伟 江丽娜 刘延麟 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第8期694-697,共4页

目的分离纯化牛蛙皮肤抗菌肽,并检测其活性。方法通过刺激与浸提的方法,得到牛蛙皮肤抗菌肽粗提物,测定其抑菌活性及最低抑菌浓度。利用SephadexG-50凝胶过滤和反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化粗提物,用质谱仪测定多肽的相对分子质... 目的分离纯化牛蛙皮肤抗菌肽,并检测其活性。方法通过刺激与浸提的方法,得到牛蛙皮肤抗菌肽粗提物,测定其抑菌活性及最低抑菌浓度。利用SephadexG-50凝胶过滤和反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化粗提物,用质谱仪测定多肽的相对分子质量及氨基酸序列,并进行活性检测。结果两种方法提取的牛蛙皮肤抗菌肽粗提物均具有较强的抑菌活性,纯化后的多肽相对分子质量约为4370,N-端含22个氨基酸,与其他两栖类来源的抗菌肽同源性较低。活性试验表明均无胰蛋白酶水解活性,存在一定的胰蛋白酶抑制剂活性,有轻微的溶血活性,不具有局部出血活性,具有抗凝和溶栓作用。结论已成功分离并纯化了1种新的牛蛙皮肤抗菌肽。 展开更多

关键词 牛蛙 皮肤 抗菌肽 分离 纯化 活性

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中国对虾PC-Ⅲ系列抗菌肽的分离纯化及活性 被引量：6

9

作者 安贤惠 吕毅 +5 位作者 李卫国 梁建国 徐春花 张崇星 董靖 赖仞 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期410-415,共6页

以我国主要经济海产品中国对虾(Penuschinensis)为研究对象,通过SephadexG50、RPHPLC等技术分离纯化到PCⅢ系列中国对虾天然抗菌肽。经初步鉴定,该系列抗菌肽对革兰氏阴性和革兰氏阳性菌都表现出程度不一的抑菌活性,且不同程度地影响小... 以我国主要经济海产品中国对虾(Penuschinensis)为研究对象,通过SephadexG50、RPHPLC等技术分离纯化到PCⅢ系列中国对虾天然抗菌肽。经初步鉴定,该系列抗菌肽对革兰氏阴性和革兰氏阳性菌都表现出程度不一的抑菌活性,且不同程度地影响小白鼠离体回肠肌收缩,但无丝氨酸蛋白酶抑制剂活性。用MALDITOF质谱对样品进行分析,检测到分子量分别为1071Da和1311Da的两种抗菌肽。这些抗菌肽对对虾抵御微生物的侵袭具有重要的作用。 展开更多

关键词 中国对虾 抗菌肽 分离纯化

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Cu2+胁迫对黑水虻幼虫抗菌肽组分及抑菌活性的影响 被引量：6

10

作者 王龙 廖业 +3 位作者 孙虹霞 高嘉敏 冯群 夏嫱 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2019年第6期1348-1354,共7页

研究不同浓度Cu^2+胁迫对黑水虻5龄幼虫抗菌肽分离纯化组分及抑菌活性影响,为黑水虻无害化处理粪便技术的有效实施提供有力的理论依据,为其副产品在饲料、食品及医药研发中的应用提供有价值的实验数据。本文在人工饲料中添加不同浓度Cu^... 研究不同浓度Cu^2+胁迫对黑水虻5龄幼虫抗菌肽分离纯化组分及抑菌活性影响,为黑水虻无害化处理粪便技术的有效实施提供有力的理论依据,为其副产品在饲料、食品及医药研发中的应用提供有价值的实验数据。本文在人工饲料中添加不同浓度Cu^2+(0、150、1200 mg/kg)以饲喂黑水虻幼虫,采用金黄色葡萄球菌针刺法诱导5龄幼虫,断头收集血淋巴,高速冷冻离心结合超滤离心制备抗菌肽粗提物;利用RP-HPLC对三组抗菌肽粗提物进行分离纯化,收集各纯化峰对应组分,采用纸片琼脂扩散法测定各纯化峰对应组分的抑菌效果,以阐述Cu^2+胁迫对黑水虻抗菌肽的影响。结果表明,经Cu^2+胁迫,抗菌肽粗提物分离纯化后各组分的出峰时间及峰面积所占比例均不同,不同处理浓度下各分离组分第2峰面积均大于第1峰面积,其中150-2峰面积最大,为73.31%;分离纯化后所得6个组分对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及白色念珠菌均有抑菌活性,对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌的抑菌活性显著高于对大肠杆菌抑菌活性,但其对金黄色葡萄球菌及白色念珠菌的抑菌活性未见显著差异;与其他5个组分相比,组分150-2对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌及大肠杆菌抑菌活性最强,抑菌直径分别为27.85±0.74 mm、28.34±0.76 mm、21.97±0.54 mm。由此可见,不同浓度的Cu^2+胁迫对黑水虻幼虫抗菌肽组分及抑菌活性均产生显著影响,其中组分150-2抑菌活性最强,具有很好的开发潜能。 展开更多

关键词 黑水虻 抗菌肽 铜离子 分离纯化 抑菌活性

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澳洲坚果抗菌肽分离纯化及其肽段鉴定与分析

11

作者 郭刚军 胡小静 +5 位作者 马尚玄 付镓榕 缪福俊 肖县田 黄克昌 贺熙勇 《食品研究与开发》 CAS 2024年第8期159-166,共8页

以液压压榨澳洲坚果粕为原料,采用碱性蛋白酶水解制备澳洲坚果多肽(macadamia nut peptide⁃0,MNP⁃0),以对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌的抑菌活性为跟踪指标,通过超滤、DA201⁃C型大孔吸附树脂、交联葡聚糖凝胶Sephadex G⁃25对其进行逐级... 以液压压榨澳洲坚果粕为原料,采用碱性蛋白酶水解制备澳洲坚果多肽(macadamia nut peptide⁃0,MNP⁃0),以对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌的抑菌活性为跟踪指标,通过超滤、DA201⁃C型大孔吸附树脂、交联葡聚糖凝胶Sephadex G⁃25对其进行逐级分离纯化,获得抑菌活性较强的抗菌肽,并运用液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC⁃MS/MS)技术对其进行肽段组成与氨基酸序列分析。结果表明:超滤分离的不同分子量澳洲坚果多肽在所有多肽中所占质量分数不同,抑菌活性也有所差异。其中,澳洲坚果多肽组分MNP⁃4占比最高,为29.55%;抑菌活性也最强,对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌的抑菌圈直径分别为10.01 mm与9.41 mm。大孔吸附树脂纯化多肽组分MNP⁃4的技术条件为75%乙醇溶液为解吸剂,静态吸附3 h,动态洗脱体积60 mL。经大孔吸附树脂与交联葡聚糖凝胶Sephadex G⁃25分离纯化,获得3个澳洲坚果纯化多肽(macadamia nut purified peptide,MPP)组分,其中组分MPP⁃2的抑菌活性最强,对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌的抑菌圈直径分别为18.67 mm与16.83 mm,优于多肽MNP⁃0与超滤分离多肽组分。分离纯化的澳洲坚果抗菌活性多肽MPP⁃2含有DDLTDPAPA、VLL、WDY、VPV、WDL、LLW、LWL、FDW 8个肽段,经预测分析,属于抗菌肽的肽段为WDL与FDW,其概率得分a(1.00≥a≥0.50)均为1.00,疏水率均为66.67%,均带有1个负电荷,等电点分别为0.69与0.67,并具有较好的溶解性。研究结果表明澳洲坚果可通过酶法制备具有抗菌活性的肽类成分。 展开更多

关键词 澳洲坚果 抗菌肽 分离纯化 肽段 鉴定 氨基酸序列 分析

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光滑鳖甲抗菌肽的原核表达条件优化及其抗菌活性 被引量：6

12

作者 海力且木·艾力 徐鑫 刘忠渊 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期8-15,共8页

【目的】本研究旨在探索光滑鳖甲Anatolica polita borealis抗菌肽Ap AMP1015的最佳原核表达条件及其抗菌活性。【方法】利用生物信息学方法对得到的Ap AMP1015基因序列和蛋白结构进行分析,运用原核表达技术表达Trx A-Ap AMP1015融合蛋... 【目的】本研究旨在探索光滑鳖甲Anatolica polita borealis抗菌肽Ap AMP1015的最佳原核表达条件及其抗菌活性。【方法】利用生物信息学方法对得到的Ap AMP1015基因序列和蛋白结构进行分析,运用原核表达技术表达Trx A-Ap AMP1015融合蛋白,通过Western blot方法鉴定蛋白,并利用亲和层析的方法获得纯化的Trx A-Ap AMP1015融合蛋白,抑菌圈实验验证蛋白抗菌活性。【结果】克隆得到光滑鳖甲抗菌肽基因Ap AMP1015,其开放阅读框长387 bp,编码128个氨基酸,其中包含由19个氨基酸组成的信号肽和75个氨基酸组成的成熟肽。NCBI数据库同源序列比对结果显示该蛋白属Coleoptericin抗菌肽家族。确定了蛋白表达的最佳条件:0.1 mmol/L IPTG 150 r/min 25℃诱导4 h。肠激酶切割后的Ap AMP1015能够有效抑制大肠杆菌Escherichia coli的生长。【结论】克隆得到光滑鳖甲抗菌肽基因Ap AMP1015,获得了其编码蛋白的最优表达条件,研究发现Ap AMP1015能够有效抑制大肠杆菌的生长。本研究为光滑鳖甲抗菌肽Ap AMP1015的应用和进一步研究奠定了基础。 展开更多

关键词 光滑鳖甲 抗菌肽 原核表达 蛋白纯化 抗菌活性

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侧孢芽孢杆菌2-Q-9菌株外泌抗菌肽的纯化与鉴定 被引量：6

13

作者 陈武 彭曙光 +2 位作者 周清明 黎定军 罗宽 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期26-30,共5页

采用75%乙醇沉淀、阴离子交换色谱层析和阳离子交换色谱层析等方法,分离并纯化侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterospours)2-Q-9菌株外泌抗菌肽BL2Q9。结果表明,BL2Q9的相对分子质量为7 800,等电点为10.2。Edman降解测序发现其N末端封闭,串联... 采用75%乙醇沉淀、阴离子交换色谱层析和阳离子交换色谱层析等方法,分离并纯化侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterospours)2-Q-9菌株外泌抗菌肽BL2Q9。结果表明,BL2Q9的相对分子质量为7 800,等电点为10.2。Edman降解测序发现其N末端封闭,串联质谱测序结果表明其与细菌第Ⅳ类鞭毛合成蛋白pilQ的前体蛋白以及转录抑制子CodY蛋白的部分序列相似,但与已知抗菌肽的序列相似性较低。 展开更多

关键词 侧孢芽孢杆菌 外泌抗菌肽 纯化与鉴定 质谱测序

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拟穴青蟹抗菌肽CrusSp基因克隆表达及抑菌活性分析 被引量：5

14

作者 徐栋梁 李洁颖 +2 位作者 彭永鹤 夏立新 刘志刚 《华南师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2011年第1期93-97,共5页

从拟穴青蟹血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增编码CrusSp成熟肽的cDNA序列,克隆至pET-32a(+)表达载体中,转化至E.coli OrigamiTM(DE3)中表达CrusSp蛋白,通过Ni2+亲和层析柱纯化获得CrusSp蛋白,表达出的CrusSp蛋白相对分子量约10.27 ku,... 从拟穴青蟹血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增编码CrusSp成熟肽的cDNA序列,克隆至pET-32a(+)表达载体中,转化至E.coli OrigamiTM(DE3)中表达CrusSp蛋白,通过Ni2+亲和层析柱纯化获得CrusSp蛋白,表达出的CrusSp蛋白相对分子量约10.27 ku,等电点为8.54,滤纸片扩散法结果显示CrusSp蛋白抑制绿色木霉. 展开更多

关键词 拟穴青蟹 抗菌肽 克隆 纯化 抑菌活性

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细菌诱导家蝇蛹抗菌物质的分离纯化 被引量：5

15

作者 党向利 柴一秋 +1 位作者 翁宏飚 张文庆 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2011年第2期166-172,共7页

家蝇生境中充满病原菌,其有效的防防机制成为研究的热点。通过三氟乙酸缓冲液浸提、热处理、固相萃取以及两次RP-HPLC等方法,从混合细菌液诱导的家蝇蛹中分离纯化出4种具有抗菌活性的物质。结果表明,提取的家蝇蛹粗提液抗菌谱较广,对多... 家蝇生境中充满病原菌,其有效的防防机制成为研究的热点。通过三氟乙酸缓冲液浸提、热处理、固相萃取以及两次RP-HPLC等方法,从混合细菌液诱导的家蝇蛹中分离纯化出4种具有抗菌活性的物质。结果表明,提取的家蝇蛹粗提液抗菌谱较广,对多种微生物具有不同程度的抗菌作用,且抗菌效果好于天然肽类防腐剂和一些化学防腐保鲜剂。4种抗菌物质中包括3个抗菌肽和1个抗菌化合物。Tricine-SDS-PAGE结果显示3个抗菌肽的分子量分别约为12kDa、8kDa和4kDa。本研究表明细菌诱导家蝇蛹中具有丰富的抗菌物质。 展开更多

关键词 家蝇 抗菌肽 化合物 抗菌活性 纯化

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黑虎虾Crustin的克隆表达纯化及抑菌活性测定 被引量：4

16

作者 徐栋梁 朱超亚 +2 位作者 彭永鹤 夏立新 刘志刚 《南昌大学学报（理科版）》 CAS 北大核心 2010年第6期598-602,共5页

从黑虎虾血淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR扩增编码Crustin成熟肽的cDNA序列,将其克隆至pMD18-T载体进行扩增,然后克隆到pET-32a(+)表达载体中,转化至E.coliOrigamiTM(DE3)中表达Crustin抗菌蛋白,后通过Ni2+亲和层析柱纯化获得Crustin蛋... 从黑虎虾血淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR扩增编码Crustin成熟肽的cDNA序列,将其克隆至pMD18-T载体进行扩增,然后克隆到pET-32a(+)表达载体中,转化至E.coliOrigamiTM(DE3)中表达Crustin抗菌蛋白,后通过Ni2+亲和层析柱纯化获得Crustin蛋白,采用滤纸片扩散法检测该蛋白的抑菌活性。表达出的Crus-tin蛋白分子量约14.7 kDa,滤纸片扩散法显示Crustin蛋白对绿色木霉具有抑制活性。 展开更多

关键词 黑虎虾 抗菌肽 克隆 纯化 抑菌活性

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短小芽孢杆菌HN-10抗菌肽的分离纯化及其抗粉红单端孢活性 被引量：4

17

作者 严海娇 贠建民 +3 位作者 白杰 郭娟 邓展瑞 李多佳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第22期123-128,共6页

长期大量使用杀菌剂不但会导致病原微生物产生耐药性,同时也存在着严重的环境和健康风险,因此开发不易产生耐药性的新型抗菌物质非常重要。本实验采用硫酸铵沉淀、AB-8大孔吸附树脂、Sephadex G-100凝胶和半制备型反相高效液相色谱对短... 长期大量使用杀菌剂不但会导致病原微生物产生耐药性,同时也存在着严重的环境和健康风险,因此开发不易产生耐药性的新型抗菌物质非常重要。本实验采用硫酸铵沉淀、AB-8大孔吸附树脂、Sephadex G-100凝胶和半制备型反相高效液相色谱对短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)HN-10发酵液进行逐级分离纯化,以粉红单端孢(Trichothecium roseum)为指示菌,测其抑菌活性,并通过基质辅助激光解析串联飞行时间串联质谱对纯化后的活性物质进行氨基酸序列分析。结果表明,经纯化后得到一种抗真菌肽P-1,其氨基酸序列为G-G-S-G-G-G-S-S-G-G-S-I-G-G-R,分子质量为1 149.14 Da。经抑菌实验可知,抗真菌肽P-1在最小抑菌浓度为1μg/mL时可抑制粉红单端孢生长。经ProtParam软件分析得到P-1理论等电点为9.75,带有1个正电荷数。在NCBI数据库和APD数据库检索,与之序列相似性最高的仅为45%,因此判断这是一种新型抗真菌肽。抗真菌肽P-1抑菌效果良好,可为开发新型生防制剂提供理论依据。 展开更多

关键词 抗菌肽 短小芽孢杆菌HN-10 分离纯化 粉红单端孢

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东亚飞蝗抗菌活性物质的萃取及抗菌效应研究 被引量：4

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作者 骆雪 张春勇 +1 位作者 陈克嶙 郭荣富 《家畜生态学报》 北大核心 2013年第2期53-57,共5页

试验研究东亚飞蝗成虫抗菌活性物质的萃取参数与抑菌效应。采用针刺蘸大肠杆菌菌悬液方法,以抗菌活性为指标,用杯碟法测定临床多重耐药菌的抑菌活性,确定最佳诱导时间,初步研究抗菌谱。结果表明,东亚飞蝗抗菌活性物质粗提液对革兰氏阳性... 试验研究东亚飞蝗成虫抗菌活性物质的萃取参数与抑菌效应。采用针刺蘸大肠杆菌菌悬液方法,以抗菌活性为指标,用杯碟法测定临床多重耐药菌的抑菌活性,确定最佳诱导时间,初步研究抗菌谱。结果表明,东亚飞蝗抗菌活性物质粗提液对革兰氏阳性菌(如金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌)或革兰氏阴性菌(如大肠杆菌、水稻白叶枯病原菌)均有一定的抑制作用。其抗菌谱为:金黄色葡萄球>水稻白叶枯病原菌>枯草芽孢杆菌>大肠杆菌,其中以对金黄色葡萄球菌的抑菌效果最明显。抗菌活性物质浓度为11.782mg/mL,蝗虫抗菌活性物质收率为8.623%。经纯化后的抗菌活性物质增强对革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌的抑制作用。采用针刺蘸大肠杆菌方式可成功诱导东亚飞蝗抗菌物质的表达,尤其以针刺蘸大肠杆菌诱导后饲养24h得到的抗菌活性物质抑菌活性最强。结果表明东亚飞蝗虫体内含有抗菌活性物质可被诱导表达,其抗菌作用机理有进一步研究。 展开更多

关键词 东亚飞蝗 抗菌肽类物质 分离纯化 抑菌效应

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大头金蝇幼虫抗菌肽提取纯化及抑菌活性研究 被引量：3

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作者 冉琳 何钢 +4 位作者 刘嵬 梁立 邱露 颜军 苟小军 《食品科技》 CAS 北大核心 2017年第10期248-253,共6页

目的:从大头金蝇幼虫中分离纯化天然抗菌肽,并检测抗菌肽的抑菌活性。方法:提取大头金蝇幼虫抗菌肽,粗提物经凝胶过滤色谱、阳离子交换树脂、反相色谱纯化,纯化产物检测其抑菌活性并利用GFC-HPLC测定其分子量。结果:最终纯化出一个活性... 目的:从大头金蝇幼虫中分离纯化天然抗菌肽,并检测抗菌肽的抑菌活性。方法:提取大头金蝇幼虫抗菌肽,粗提物经凝胶过滤色谱、阳离子交换树脂、反相色谱纯化,纯化产物检测其抑菌活性并利用GFC-HPLC测定其分子量。结果:最终纯化出一个活性组分,该组分对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度为20.40μg/m L,对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为2.04 mg/m L,对大肠杆菌的最小抑菌浓度为0.17 mg/m L;该活性组分分子量大小为2570 u。结论:该抗菌肽组分对铜绿假单胞菌有较强抑菌活性,有较好的开发利用价值。 展开更多

关键词 大头金蝇幼虫 抗菌肽 分离纯化 抑菌活性

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β-防御素130在大肠杆菌中的串联表达、纯化及生物活性分析 被引量：3

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作者 蔺艳君 董彬 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1088-1096,共9页

为了研究抗菌肽β-防御素130的生物学活性和实现大规模制备,通过改良其分子结构,构建表达载体pET28a-3×β-defensin130,利用大肠杆菌BL21 (DE3)作为宿主细胞诱导表达后为水溶性蛋白。对纯化后抗菌肽进行抑菌实验、稳定性实验、MTT... 为了研究抗菌肽β-防御素130的生物学活性和实现大规模制备,通过改良其分子结构,构建表达载体pET28a-3×β-defensin130,利用大肠杆菌BL21 (DE3)作为宿主细胞诱导表达后为水溶性蛋白。对纯化后抗菌肽进行抑菌实验、稳定性实验、MTT实验和溶血性实验确定其生物活性。最终成功制备出25 kDa的重组蛋白,对金黄色葡萄球菌(ATCC25923)(45μg/mL)和单增李斯特菌(ATCC221633)(80μg/mL)等革兰氏阴性和阳性菌都表现出极强的抗菌活性,且其抗菌活性不受温度、pH值和蛋白酶消化等影响,MTT细胞毒性实验显示其对HEK293细胞无毒性且对兔源红细胞具有极低的溶血性。这将为新型抗菌肽的开发提供理论基础并推动抗生素替代产业快速发展。 展开更多

关键词 防御素 抗菌肽 原核表达 蛋白纯化 抗菌活性

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