西马特罗多克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立 被引量：7

1

作者 司艳芳 李鹏 +3 位作者 郭东光 孙国鹏 岳锋 王选年 《河南农业科学》 北大核心 2020年第6期157-164,共8页

为建立一种特异、敏感、快速、准确的西马特罗(Cimaterol,CIM)残留检测方法,成功合成其完全抗原并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立其免疫学检测方法。应用重氮化法偶联西马特罗与载体蛋白BSA、OVA,合成免疫抗原CIM-BSA和检测抗原CI... 为建立一种特异、敏感、快速、准确的西马特罗(Cimaterol,CIM)残留检测方法,成功合成其完全抗原并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立其免疫学检测方法。应用重氮化法偶联西马特罗与载体蛋白BSA、OVA,合成免疫抗原CIM-BSA和检测抗原CIM-OVA,并采用UV、SDS-PAGE、质谱3种方法进行完全抗原的鉴定。用CIM-BSA免疫新西兰大白兔制备抗西马特罗多克隆抗体并建立间接竞争ELISA检测方法。结果表明,成功合成了西马特罗完全抗原,具有合成抗原的分子特征;免疫新西兰大白兔后,成功制备了抗西马特罗多克隆抗体,其效价为1∶64000,对西马特罗的半数抑制质量浓度为4.26μg/L,与特布他林、莱克多巴胺、沙丁胺醇、齐帕特罗等β2型受体激动剂药物无交叉反应。经过条件优化,建立了西马特罗间接竞争性ELISA检测方法,其最低检测限为0.04μg/L,在0.1~12.8μg/L检测范围内,线性关系拟合度为R2=0.9771,拟合曲线方程为y=-0.2469x+0.6623。检测猪尿和饲料样品,回收率分别为96.3%~103.9%和67.0%~105.0%。综上,成功建立了具有良好应用前景的西马特罗间接竞争ELISA免疫学检测方法。 展开更多

关键词 西马特罗 重氮化法 完全抗原 间接竞争ELISA 多克隆抗体 残留检测

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抗恩诺沙星抗血清的制备及其ELISA检测 被引量：2

2

作者 刘兵 曾华金 +2 位作者 杨冉 雷利芳 屈凌波 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1283-1287,共5页

目的:建立快速、灵敏的恩诺沙星残留酶联免疫检测方法(ELISA)。方法:采用混合酸酐法,将恩诺沙星与牛血清白蛋白和卵清蛋白分别合成免疫抗原(Enrofloxac in-BSA)和包被抗原(Enrofloxac in-OVA)。通过背部多点免疫法免疫日本大白耳兔,制... 目的:建立快速、灵敏的恩诺沙星残留酶联免疫检测方法(ELISA)。方法:采用混合酸酐法,将恩诺沙星与牛血清白蛋白和卵清蛋白分别合成免疫抗原(Enrofloxac in-BSA)和包被抗原(Enrofloxac in-OVA)。通过背部多点免疫法免疫日本大白耳兔,制备抗恩诺沙星的特异性抗血清。结果:利用所获得的特异性抗血清,建立的恩诺沙星ELISA检测方法,其线性范围为5 ng.mL-1～2.5μg.mL-1(R2=0.9935),且与HPLC方法具有良好的相关性(R2=0.9892,n=9)。牛奶、大鼠血浆和尿液中的加样回收率分别为98.4%～105.8%,91.7%～101.2%,97.0%～110.3%。运用所建立的方法,对大鼠体内血浆及药品中恩诺沙星的含量进行了测定。结论:本研究所建立的检测恩诺沙星的ELISA方法具有样品前处理简单,灵敏度高及分析速度快等优点,适合用于恩诺沙星的体内分析及动物性食品中恩诺沙星的残留分析。 展开更多

关键词 恩诺沙星 乙基环丙沙星 抗血清 酶联免疫检测法 牛血清白蛋白 免疫抗原 卵清蛋白 包被抗原 食品 药物残留 快速分析

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特异性水解α_(s1)-酪蛋白过敏原IgE作用表位aa 83~105的蛋白酶筛选

3

作者 刘迪 吕晓哲 +5 位作者 丛艳君 张倩倩 李邻峰 梁萌 高吉安 邱学宇 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第2期126-133,共8页

探索特异性水解α_(s1)-酪蛋白作用表位的蛋白酶筛选方法。首先通过固相合成法合成α_(s1)-酪蛋白作用表位aa 83~105,纯化鉴定后,偶联牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)制备完全抗原,然后免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,进而建立... 探索特异性水解α_(s1)-酪蛋白作用表位的蛋白酶筛选方法。首先通过固相合成法合成α_(s1)-酪蛋白作用表位aa 83~105,纯化鉴定后,偶联牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)制备完全抗原,然后免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,进而建立间接竞争酶联免疫吸附测定方法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),以α_(s1)-酪蛋白制备的单克隆抗体及建立的方法为对照。结果表明:合成作用表位的纯度在90%以上,与BSA偶联比为6.31。单克隆抗体的亚型为IgG_(1),效价可达到1∶320 000,可以与α_(s1)-酪蛋白发生特异性免疫反应,与大豆蛋白无交叉反应。建立的间接竞争ELISA,竞争抑制曲线回归方程为y=-9.22x+100.78(R^(2)=0.989 1),方法重复性、精确性均较好,检出限低于α_(s1)-酪蛋白单克隆抗体建立的方法,初步筛选到木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶水解液的抗原残留量较小,需要进一步通过体内实验验证结果。α_(s1)-酪蛋白作用表位aa 83~105 G_(1)型单克隆抗体制备成功,为新型α_(s1)-酪蛋白作用表位aa 83~105低致敏配方粉的开发,提供了ELISA检测高灵敏专用单克隆工具抗体。 展开更多

关键词 α_(s1)-酪蛋白 作用表位 单克隆抗体 抗原残留量 蛋白酶

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小分子药物人工抗原的合成与鉴定研究进展 被引量：11

4

作者 张煜超 王芳芳 +2 位作者 李周敏 姚开安 方惠群 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期947-951,共5页

近年来,免疫分析技术不断发展,因其高效、快速的优点而被广泛应用于各类残留药物的检测。免疫分析法是以抗原、抗体的特异性识别和可逆性结合反应为基础,以抗体作为生物检测器而建立的一种灵敏、简便、快速的超微量分析方法。在小分子... 近年来,免疫分析技术不断发展,因其高效、快速的优点而被广泛应用于各类残留药物的检测。免疫分析法是以抗原、抗体的特异性识别和可逆性结合反应为基础,以抗体作为生物检测器而建立的一种灵敏、简便、快速的超微量分析方法。在小分子药物残留的分析中,人工抗原的合成是建立免疫分析方法的关键。本文主要介绍小分子半抗原与载体蛋白的偶联方法及合成抗原的鉴定方法,并对偶联比的测定方法进行概述。 展开更多

关键词 小分子药物 合成抗原 鉴定分析 偶联比 药物残留检测 免疫分析技术 抗体生物检测器 超微量分析

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马波沙星人工抗原的合成及其免疫原性的鉴定 被引量：7

5

作者 汝晓飞 张伟 +6 位作者 王兴 秦海艳 周小钰 侯珂 刘若璇 蔡云虹 王捍东 《畜牧与兽医》 北大核心 2018年第4期66-71,共6页

合成、鉴定了马波沙星（MBF）人工抗原,为马波沙星单克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立奠定基础。以牛血清白蛋白（BSA）、鸡卵清蛋白（OVA）为载体蛋白,采用碳二亚胺法分别合成马波沙星免疫抗原（MBF-BSA）和包被抗原（MBF-OVA）... 合成、鉴定了马波沙星（MBF）人工抗原,为马波沙星单克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立奠定基础。以牛血清白蛋白（BSA）、鸡卵清蛋白（OVA）为载体蛋白,采用碳二亚胺法分别合成马波沙星免疫抗原（MBF-BSA）和包被抗原（MBF-OVA）,并使用紫外分光光度法、SDS-PAGE、ELISA方法鉴定人工抗原合成效果。初步鉴定结果显示,MBF-BSA与MBF-OVA均偶联成功;用免疫抗原MBF-BSA免疫小鼠,经ELISA方法检测,五免后血清中抗体效价可达1∶5.12×105,半数抑制率为90.20 ng/m L。研究表明,马波沙星人工抗原合成成功,其免疫抗原具有良好的免疫原性,免疫小鼠可获得高效价、高特异性多克隆抗体。 展开更多

关键词 马波沙星 人工抗原 免疫原性 兽药残留

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基于二聚人工抗原ELISA检测多残留β_(2)-受体激动剂 被引量：3

6

作者 刘淼苗 刘啊敏 +2 位作者 陈尔净 马骉 张明洲 《中国计量大学学报》 2022年第1期27-35,共9页

目的:基于二聚人工抗原研制具备多识别特性的广谱抗体,结合酶联免疫吸附技术,为β_(2)-受体激动剂快速检测提供技术支持。方法:克伦特罗和莱克多巴胺与载体蛋白经重氮化反应形成二聚人工抗原,优化实验条件,制备单克隆抗体,运用酶联免疫... 目的:基于二聚人工抗原研制具备多识别特性的广谱抗体,结合酶联免疫吸附技术,为β_(2)-受体激动剂快速检测提供技术支持。方法:克伦特罗和莱克多巴胺与载体蛋白经重氮化反应形成二聚人工抗原,优化实验条件,制备单克隆抗体,运用酶联免疫吸附技术同时检测苯酚型和苯胺型β_(2)-受体激动剂。结果:在最佳条件下,克伦特罗、莱克多巴胺、克伦特罗和莱克多巴胺的IC_(50)值分别为0.75 ng/mL、0.77 ng/mL和0.77 ng/mL。该方法检测的回收率为78.00%~117.88%。检测结果与LC-MS/MS具有良好的一致性(R^(2)>95%)。结论:本研究建立的一种简单、快速、高灵敏的测定方法,可用于快速检测猪尿中β_(2)-受体激动剂药物残留。 展开更多

关键词 β_(2)-受体激动剂 二聚人工抗原 单克隆抗体 酶联免疫吸附法 多残留检测

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氨基酸残基配型策略在高致敏尿毒症患者肾移植中的应用研究 被引量：3

7

作者 孙煦勇 肖露露 +10 位作者 文宁 秦科 赖彦华 聂峰 董建辉 李壮江 文海涛 郭海鸽 赵东海 农江 曲海燕 《广西医科大学学报》 CAS 2010年第3期394-396,共3页

目的:探讨人类白细胞抗原(HLA)氨基酸残基配型(Res M)标准在高致敏尿毒症患者肾移植中的应用。方法:在动态监测群体反应性抗体(PRA)水平、特异性及淋巴毒交叉配合试验的基础上,采用ResM标准选取与供者最匹配的供体。结果:56例尿毒症患... 目的:探讨人类白细胞抗原(HLA)氨基酸残基配型(Res M)标准在高致敏尿毒症患者肾移植中的应用。方法:在动态监测群体反应性抗体(PRA)水平、特异性及淋巴毒交叉配合试验的基础上,采用ResM标准选取与供者最匹配的供体。结果:56例尿毒症患者术前PRA均大于20%,采用Terasaki提出的ResM标准,供受者0抗原错配(MM)为6例(10.7%),1MM为13例(23.2%),2MM为19例(33.9%),3MM为13例(23.2%),4MM为5例(9.1%),5MM和6MM为0例。术后56例受者均未发生超急性排斥反应,17例(30.4%)发生急性排斥,经甲基强的松龙冲击治疗后3例(5.4%)切除移植肾,另14例(25%)排斥反应逆转,肾功能恢复。5例(8.9%)发生移植物功能延迟恢复(Delay Graft Function,DGF),经血液透析过渡治疗后均在5周内恢复。结论:Res M标准可提高PRA阳性受者与供者之间HLA相配程度,缩短患者等肾时间,降低排斥反应的发生率,是一种有效的、具有临床实用价值的配型策略。 展开更多

关键词 肾移植 群体反应性抗体 人类白细胞抗原 氨基酸残基

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免疫测定用前列腺特异性抗原国家标准品的定值研究 被引量：2

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作者 刘艳 孙楠 +3 位作者 黄颖 高尚先 王玉梅 张春涛 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期519-523,共5页

目的:制备并标定免疫测定用前列腺特异性抗原国家标准品。方法:使用英国国家生物标准与检定所(NIBSC)来源的前列腺特异性抗原(PSA)国际标准品进行量值传递,使用化学发光法、酶联免疫法、时间分辨免疫荧光法3种反应原理的8种试剂盒进行... 目的:制备并标定免疫测定用前列腺特异性抗原国家标准品。方法:使用英国国家生物标准与检定所(NIBSC)来源的前列腺特异性抗原(PSA)国际标准品进行量值传递,使用化学发光法、酶联免疫法、时间分辨免疫荧光法3种反应原理的8种试剂盒进行联合标定,同时进行了均匀性和稳定性评价,对定值的不确定度做了分析和估计。结果:本次换批制备PSA国家标准品定值为190 ng·mL^(-1);不确定度为±27ng·mL^(-1);瓶间精密度为0.98%;4℃保存11周,经t检验直线斜率<t_(0.95,6)*S(b_1),样品稳定;37℃保存11周,经t检验直线斜率>t_(0.95,6)*S(b_1),样品中总前列腺特异性抗原(tPSA)显著降解,游离前列腺特异性抗原(f PSA)浓度显著升高。结论:本次换批制备的PSA国家标准品定值过程合理,具有较好的均匀性和稳定性,适用于tPSA免疫检测相关试剂盒的产品研究及质量评价,该标准品高温条件保存不稳定,运输过程应保持冷链。 展开更多

关键词 前列腺特异性抗原(PSA) 丝氨酸蛋白酶 丝氨酸残基 体外诊断试剂 免疫检测 国家标准品 定值

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高度致敏肾移植受者致敏氨基酸残基的研究 被引量：1

9

作者 徐建华 袁小鹏 +1 位作者 谢晓琴 张建华 《现代医院》 2005年第11期18-19,共2页

目的探讨高度致敏肾移植受者的致敏氨基酸残基。方法采用ELISA法连续测定85例高敏肾移植受者的HLA-Ⅰ类抗体特异性,并指定可能的抗体公共表位(氨基酸残基)。结果89.4%的高敏受者具有可指定的抗体公共表位;最常见的公共表位是:163E,142-1... 目的探讨高度致敏肾移植受者的致敏氨基酸残基。方法采用ELISA法连续测定85例高敏肾移植受者的HLA-Ⅰ类抗体特异性,并指定可能的抗体公共表位(氨基酸残基)。结果89.4%的高敏受者具有可指定的抗体公共表位;最常见的公共表位是:163E,142-145TTKH,127K,83R,71-74AQTD,163R,163L和41T。在连续监测过程中,抗体公共表位分析结果稳定,比抗体特异性鉴定能更准确地反映抗体谱。结论高敏受者的HLA抗体产生有明显的规律,对少数高频率高免疫原性氨基酸残基的致敏是高敏受者致敏的主要原因。对高敏受者进行抗体表位分析能够准确地预测可接受的供体抗原错配。 展开更多

关键词 肾移植 群体反应性抗体 人类白细胞抗原 氨基酸残基 氨基酸残基 肾移植受者 致敏 抗体特异性鉴定 HLA-Ⅰ类 表位分析 高敏受者 ELISA法 连续测定

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应用CREG,残基匹配和HLA三维结构选择不完全相合造血干细胞移植的供体 被引量：1

10

作者 韩红星 孔繁华 +4 位作者 奚永志 孙玉英 金荔 刘楠 郭斯启 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第6期553-556,共4页

应用造血干细胞库进行检索后 ,往往有多个供体满足一定的检索条件 ,为了确定最适合的供体 ,选择了待进行移植的临床病例 ,分别从交叉反应组 (CREG)抗原、残基匹配理论和HLA抗原模拟三维结构比较等角度对各个供体进行了分析。结果表明 ,... 应用造血干细胞库进行检索后 ,往往有多个供体满足一定的检索条件 ,为了确定最适合的供体 ,选择了待进行移植的临床病例 ,分别从交叉反应组 (CREG)抗原、残基匹配理论和HLA抗原模拟三维结构比较等角度对各个供体进行了分析。结果表明 ,3种筛选方法的结果并不完全一致 ,但至少可以排除某些不适合的供体 ,进一步缩小选择范围。结论 :综合应用CREG、残基配型和三维结构比较方法 。 展开更多

关键词 造血干细胞移植 交叉反应组抗原 残基匹配 HLA三维结构 供体选择

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人类白细胞抗原HLA氨基酸残基配型在角膜移植供受体选择中的应用 被引量：1

11

作者 陈梅珠 惠延年 《国际眼科杂志》 CAS 2007年第3期727-729,共3页

目的:探讨人类白细胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)氨基酸残基配型在角膜移植排斥反应中的作用程度,以及术前进行HLA配型的临床意义。方法:角膜移植患者91例92眼,其中高危角膜50例50眼,非高危角膜41例42眼。HLA-Ⅰ,Ⅱ类抗原分别由... 目的:探讨人类白细胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)氨基酸残基配型在角膜移植排斥反应中的作用程度,以及术前进行HLA配型的临床意义。方法:角膜移植患者91例92眼,其中高危角膜50例50眼,非高危角膜41例42眼。HLA-Ⅰ,Ⅱ类抗原分别由一步单抗法和DNA法检测。根据HLA氨基酸残基的相配数分为HLA的低错配组(2错配、3错配)和高错配组(4错配、5错配)。结果:高危组的排斥反应率74.0%明显高于非高危组31.0%(P=0.001)。在高危组中,HLA高错配的排斥反应率高达84.8%,明显高于低错配的52.9%(P=0.021),而且高错配组发生排斥反应的危险性是低错配组的1.6倍(RR=1.6)。在非高危组中:HLA高错配的排斥反应率30.4%与低错配的31.6%比较无统计学意义(P=0.936)。结论:高危角膜患者HLA高错配组的排斥反应率高于低错配组,术前进行HLA配型有临床指导意义,而对非高危角膜配型无意义。 展开更多

关键词 人类白细胞抗原HLA 氨基酸残基配型 角膜移植

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利用MODDE软件全因子分析优化乙脑灭活疫苗的纯化工艺

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作者 李庆岸 于海 +1 位作者 曹鹏 康文哲 《生物化工》 2022年第6期78-80,共3页

目的:通过MODDE软件全因子分析实验方法建立一种乙脑灭活疫苗纯化新工艺,进一步去除乙脑灭活疫苗中细胞残留DNA。方法:将传统的Sepharose 6 Fast Flow层析所获得的初步纯化液作为样品,进行Sartobind Q膜层析,选取上样量、盐浓度、pH、流... 目的:通过MODDE软件全因子分析实验方法建立一种乙脑灭活疫苗纯化新工艺,进一步去除乙脑灭活疫苗中细胞残留DNA。方法:将传统的Sepharose 6 Fast Flow层析所获得的初步纯化液作为样品,进行Sartobind Q膜层析,选取上样量、盐浓度、pH、流速4个因子为输入变量,以乙脑疫苗抗原回收率、细胞残留DNA去除率为输出响应值,使用全因子DOE模型进行实验。结果:在实验参数范围内[上样量(40~100 mL)、盐浓度(0.3~0.7 mol/L)、pH(6.0~8.0)、流速(1~20 mL/min)],增加Sartobind Q膜层析的样品细胞残留DNA低于每剂50 pg,去除率在90%以上。结论:通过应用DOE实验设计,找到Sartobind Q膜合适的工艺设计空间,有效去除乙脑灭活疫苗中的细胞残留DNA,提高疫苗临床应用的安全性。 展开更多

关键词 DOE 乙脑灭活疫苗 抗原回收率 细胞DNA残留量

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