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枯草芽孢杆菌抗菌蛋白X98Ⅲ的纯化与性质 被引量：92
1
作者 谢栋 彭憬 +2 位作者 王津红 胡剑 王岳五 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期13-19,共7页
枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）BS－98是一株能强烈抑制苹果轮纹病菌（Physalosporapiricola）等植物病原真菌的拮抗菌株。BS－98菌株培养液经硫酸铵分级盐析、SephadexG－100柱层析和DEAE－纤维素（DE32）柱层析后分离纯化出一种抗... 枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）BS－98是一株能强烈抑制苹果轮纹病菌（Physalosporapiricola）等植物病原真菌的拮抗菌株。BS－98菌株培养液经硫酸铵分级盐析、SephadexG－100柱层析和DEAE－纤维素（DE32）柱层析后分离纯化出一种抗菌蛋白，命名为X98Ⅲ。蛋白电泳分析结果表明，此蛋白分子量为59000，等电点为4．50．醋酸纤维膜电泳后经特异染色证明X98Ⅲ含糖及胀。用DNS法测其含糖量为6％。此蛋白对热稳定，对蛋白酶部分敏感。氨基酸组分分析表明，该蛋白含11种不同氨基酸，尤富含谷氨酸和半胱氨酸等，而缺少天冬氨酸等。纯化后的X98Ⅲ对苹果轮纹病菌、芦笋茎枯病菌等有很强的抑制作用。X98Ⅲ的抑菌机理主要是溶解细胞壁，造成菌丝畸形、孢子不发芽或发芽异常。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 抗菌蛋白 苹果轮纹病
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内生菌BS-2菌株的抗菌蛋白及其防病作用 被引量：70
2
作者 何红 蔡学清 +2 位作者 关雄 胡方平 谢联辉 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期373-378,共6页
BS 2菌株为一株能在多种植物体内定殖 ,对多种植物炭疽病具有良好防治效果 ,并对植物生长具有良好促进作用的枯草芽孢杆菌 ,其BPY培养液经 30 %～ 70 %硫酸铵盐析、高温 (10 0℃ )处理后 ,以SDS PAGE、MALDI TOF检测 ,该菌株分泌的抗菌... BS 2菌株为一株能在多种植物体内定殖 ,对多种植物炭疽病具有良好防治效果 ,并对植物生长具有良好促进作用的枯草芽孢杆菌 ,其BPY培养液经 30 %～ 70 %硫酸铵盐析、高温 (10 0℃ )处理后 ,以SDS PAGE、MALDI TOF检测 ,该菌株分泌的抗菌蛋白为分子量≤ 2 884 .39D的多肽 ;该抗菌多肽对热稳定并抗紫外线照射 ,对植物炭疽病菌和番茄青枯病菌等多种植物病原真菌和细菌有强烈的抑制作用 ,并对辣椒果炭疽病具有 6 9.79% (9d后 )的防病效果 ;抑制病菌生长 ,引起菌丝 (或芽管 )细胞消融 ,导致菌丝畸形以及抑制病菌分生孢子的产生和萌发等可能是该抗菌多肽主要的防病机制。 展开更多
关键词 内生菌 BS-2菌株 抗菌蛋白 防病作用 定殖 防治效果 植物病害 枯草芽孢杆菌 BPY培养液
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水稻生防菌株多粘类芽孢杆菌WY110抗菌蛋白的纯化及其基因克隆 被引量：62
3
作者 姚乌兰 王云山 +2 位作者 韩继刚 李潞滨 宋未 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第9期878-887,共10页
通过DEAE SephadexA 5 0离子交换层析和SephacrylS 2 0 0分子筛层析并采用抑菌活性和SDS PAGE跟踪检测 ,从多粘类芽孢杆菌 (Paenibacilluspolymyxa)WY110菌株中分离纯化到一种对稻瘟病菌具有拮抗活性的抗菌蛋白P2 (分子量约 2 6kD)。平... 通过DEAE SephadexA 5 0离子交换层析和SephacrylS 2 0 0分子筛层析并采用抑菌活性和SDS PAGE跟踪检测 ,从多粘类芽孢杆菌 (Paenibacilluspolymyxa)WY110菌株中分离纯化到一种对稻瘟病菌具有拮抗活性的抗菌蛋白P2 (分子量约 2 6kD)。平板抑菌试验表明 ,在PDA培养基上 1 5 μg纯化的P2 蛋白即可有效地抑制稻瘟病菌菌丝生长 ,并对所测试的稻瘟病菌不同菌株均表现出抑菌活性。对P2 蛋白的N 端测序结果表明 ,N 末端 2 4个氨基酸序列为H2 N Ala Asn Val Phe Trp Glu Pro Leu Ser Tyr Tyr Asn Pro Ser Thr Trp Gln Lys Ala Asp Gly Tyr Ser Asn 。以此为靶序列在网上用BlastP程序对蛋白质序列数据库进行了类似性检索 ,发现其与来源于芽孢杆菌的β 1,3 1,4 葡聚糖酶前体具有很高的同源性。进一步用此酶的特异底物地衣多糖进行了定性检测 ,验证了P2 蛋白具有 β 1,3 1,4 葡聚糖酶的活性。在此基础上 ,根据P2 蛋白N 末端氨基酸序列及此酶C 端保守性序列设计合成了两端引物 ,以WY110基因组DNA为模板 ,通过PCR高保真扩增获得了P2 蛋白编码基因的全序列 ,并克隆到pMD18 T载体上。核苷酸序列分析表明 ,其 5′端 72个核苷酸序列与蛋白N 端已知的 2 4个氨基酸序列完全吻合 ,序列全长为 6 36bp (GenBank登录号 :AF2 展开更多
关键词 多粘类芽孢杆菌 稻瘟病菌 抗菌蛋白 基因 克隆 纯化
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杜仲皮中抗真菌蛋白的分离和特性研究 被引量：34
4
作者 刘小烛 胡忠 +2 位作者 李英 杨俊波 李炳钧 《云南植物研究》 CSCD 1994年第4期385-391,共7页
从杜仲（ＥｕｃｏｍｍｉａｕｌｍｏｉｄｅｓＯｌｉｖ）皮中分离纯化到一种新的抗真菌蛋白（ＥｕｃｏｍｍｉａＡｎｔｉｆｕｎｇａｌＰｒｏｔｅｉｎ），简称ＥＡＦＰ。将切碎的杜仲树皮用ＮａＣｌ溶液在组织捣碎器中高速匀浆提取，经硫酸... 从杜仲（ＥｕｃｏｍｍｉａｕｌｍｏｉｄｅｓＯｌｉｖ）皮中分离纯化到一种新的抗真菌蛋白（ＥｕｃｏｍｍｉａＡｎｔｉｆｕｎｇａｌＰｒｏｔｅｉｎ），简称ＥＡＦＰ。将切碎的杜仲树皮用ＮａＣｌ溶液在组织捣碎器中高速匀浆提取，经硫酸铁沉淀、ＣＭ一ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ离子交换层析和Ｂｉｏ一ｇｅｌ一ｐ一１０凝胶层析纯化。如此纯化而得的ＥＡＦＰ在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ胶片上显示一条分子量为５．０ｋＤ的单一带。反相ＨＰＬＣ显示４样品是纯的。等电聚焦电泳测得其ｐＩ值大于１１．０。经还原和氨酰羧甲基化处理，用ＨＰＬＣ层析证明ＥＡＦＰ为单链。用酚一硫酸法未测出其含糖。ＥＡＦＰ是简单单链蛋白。氨基酸组成分析结果表明它宫含Ａｒｇ、Ｃｙｓ和Ｇｌｙ，不含Ｍｅｔ，Ｌｙｓ，Ｔｒｐ，Ｈｉｓ和Ｐｈｅ。未经热变性或ＳＤＳ处理的ＥＡＦＰ与考马氏亮蓝试剂不发生显色反应。手工Ｅｄｍａｎ降解法测得Ｎ一端３个氨基酸残基的顺序为Ｇｌｙ一Ａｓｐ一Ａｌａ。用羧肽酶Ａ和Ｂ酶解ＥＡＦＰ测得其Ｃ一末端为Ｖａｌ．０．３ｍｇ／ｍＬ蛋白明显抑制木霉、小麦赤霉菌、烟草黑茎病菌和棉花枯萎病菌菌丝的生长。蛋白在沸水中保温３０ｍｉｎ活性不变。 展开更多
关键词 杜仲 抗真菌蛋白 分离
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地衣芽孢杆菌W10抗菌蛋白的分离纯化及其理化性质研究 被引量：44
5
作者 纪兆林 唐丽娟 +3 位作者 张清霞 徐敬友 陈夕军 童蕴慧 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期260-264,共5页
地衣芽孢杆菌W10是一株对多种植物病原菌有拮抗作用的生防细菌,其产生的抗菌物质主要是抗菌蛋白。细菌培养滤液用30%硫酸铵盐析,透析后再经SephadexG-75层析柱纯化得到一种具有抑菌活性的蛋白。该抗菌蛋白的分子量为46049.2Da;等电点为6... 地衣芽孢杆菌W10是一株对多种植物病原菌有拮抗作用的生防细菌,其产生的抗菌物质主要是抗菌蛋白。细菌培养滤液用30%硫酸铵盐析,透析后再经SephadexG-75层析柱纯化得到一种具有抑菌活性的蛋白。该抗菌蛋白的分子量为46049.2Da;等电点为6.71;含有糖基,含糖量为6.83%;含有脯氨酸或羟脯氨酸;不含脂基。这种蛋白在pH6～12范围内均具有抑菌作用,pH6时活性最大;对热稳定,100℃以下水浴20min,抑菌活性与对照相比均在对照的80%以上,121℃蒸汽处理20min,活性虽有所下降,但仍达对照的65.7%;对胰蛋白酶和蛋白酶K不敏感,酶处理后蛋白的抑菌活性分别为对照的98.7%和98.3%;对氯仿和紫外线也不敏感,处理后活性仍达对照的91.0%和98.6%。 展开更多
关键词 地衣芽孢杆菌 抗菌蛋白 分离纯化 理化性质
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枯草芽孢杆菌B9601-Y_2抑菌蛋白活性及产生条件的研究 被引量：33
6
作者 汪澈 何月秋 张永庆 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期30-36,共7页
枯草芽孢杆菌B9601 -Y2 抑菌蛋白可以使棉花红腐病原菌菌丝畸形,呈念珠状,胞壁穿孔,不规则消解,内含物外泄,失活。B9601- Y2 菌株产抑菌蛋白的最适培养条件为:pH 7 0, 37℃培养 48h。菌株的马铃薯蔗糖培养液经 (NH4 )2SO4 至80%饱和度... 枯草芽孢杆菌B9601 -Y2 抑菌蛋白可以使棉花红腐病原菌菌丝畸形,呈念珠状,胞壁穿孔,不规则消解,内含物外泄,失活。B9601- Y2 菌株产抑菌蛋白的最适培养条件为:pH 7 0, 37℃培养 48h。菌株的马铃薯蔗糖培养液经 (NH4 )2SO4 至80%饱和度盐析能得到 0 1mg/mL以上的粗蛋白,粗蛋白的产量与培养过程中供氧条件、产菌量呈正相关。粗蛋白能耐80℃高温和pH9 0的碱性,在 4℃下,抑菌活性 60d内基本不变。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 抑菌蛋白 活性 产生条件
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地衣芽孢杆菌对苹果轮纹病菌和炭疽病菌的抑制及其对贮藏期苹果轮纹病的防治作用 被引量：41
7
作者 纪兆林 凌筝 +3 位作者 张清霞 徐敬友 陈夕军 童蕴慧 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期209-214,共6页
为了明确地衣芽孢杆菌W10及其抗菌蛋白对苹果贮藏期重要病害的防治作用,进行了对苹果轮纹病菌、炭疽病菌的抑制以及对轮纹病的防治试验。结果表明,W10菌液、培养滤液、抗菌蛋白对2种病菌的形态、菌丝生长、产孢和分生孢子萌发都有明显... 为了明确地衣芽孢杆菌W10及其抗菌蛋白对苹果贮藏期重要病害的防治作用,进行了对苹果轮纹病菌、炭疽病菌的抑制以及对轮纹病的防治试验。结果表明,W10菌液、培养滤液、抗菌蛋白对2种病菌的形态、菌丝生长、产孢和分生孢子萌发都有明显的破坏或抑制作用,其中抗菌蛋白的作用最强,5倍稀释液可以完全抑制病菌菌丝生长,20倍液对病菌产孢或分生孢子萌发的抑制率均达100%。菌液、培养滤液与抗菌蛋白对病菌菌丝形态的破坏作用相似,都可以使菌丝细胞原生质收缩、肿大呈泡囊状、细胞壁破损导致原生质外泄,甚至菌丝断裂。W10细菌液或抗菌蛋白能够明显抑制果实病斑的扩展,用其浸果后接种病菌,贮藏90 d时,抗菌蛋白对轮纹病的防效仍达到50.0%,与多菌灵效果相当。 展开更多
关键词 苹果 地衣芽孢杆菌 生物防治 抗菌蛋白 苹果轮纹病菌 苹果炭疽病菌
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枯草芽孢杆菌B-916胞外抗菌蛋白质的性质 被引量：28
8
作者 刘永峰 陈志谊 +2 位作者 张杰 刘邮洲 周明国 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期288-293,共6页
用硫酸铵分级沉淀枯草芽孢杆菌B-916胞外抗菌蛋白质,共获得8个蛋白质粗提物,其中硫酸铵饱和度为40%～50%和50%～60%提取的粗蛋白质具有较强的抑菌活性,研究结果表明:硫酸铵饱和度40%～50%和50%～60%提取的粗蛋白质浓度分别为17.261 μg... 用硫酸铵分级沉淀枯草芽孢杆菌B-916胞外抗菌蛋白质,共获得8个蛋白质粗提物,其中硫酸铵饱和度为40%～50%和50%～60%提取的粗蛋白质具有较强的抑菌活性,研究结果表明:硫酸铵饱和度40%～50%和50%～60%提取的粗蛋白质浓度分别为17.261 μg/ml和18.899 μg/ml,上述两者对水稻纹枯病菌和水稻恶苗病菌有较强的抑菌活性,对马铃薯晚疫病菌则没有抑菌活性;当温度高于40 ℃时抑菌活性均降低,但在120 ℃时仍有部分抑菌活性;对pH值适应范围较宽,但在pH值为13.6时抑菌活性均丧失;经蛋白酶K、蛋白酶E、胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶处理后,抑菌活性均下降.SDS-PAGE电泳结果表明枯草芽孢杆菌B-916能分泌多种蛋白质,其中硫酸铵饱和度40%～50%和50%～60%提取的粗蛋白质中相对分子质量为 48 000的蛋白质可能为抗菌蛋白质.硫酸铵饱和度40%～50%和50%～60%提取的粗蛋白质经Sephadex G-100层析后检测到4个蛋白质吸收峰. 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 B-916 抗菌蛋白质
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枯草杆菌BS-98分泌的抗真菌蛋白的分离纯化及其部分性质的研究 被引量：16
9
作者 胡剑 赵永歧 王岳五 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期3-7,共5页
拮抗菌（Bacillussubtilis）BS-98菌株在BPY液体培养基中产生的蛋白质经硫酸铵分级盐析、SephsdexG-100柱层析、DEAE-纤维素柱层析和SephadexG－100柱再层析后，分离纯化得到的抗菌蛋白在电泳中显现出三条带。经初步纯化的抗菌蛋白对热... 拮抗菌（Bacillussubtilis）BS-98菌株在BPY液体培养基中产生的蛋白质经硫酸铵分级盐析、SephsdexG-100柱层析、DEAE-纤维素柱层析和SephadexG－100柱再层析后，分离纯化得到的抗菌蛋白在电泳中显现出三条带。经初步纯化的抗菌蛋白对热稳定，对蛋白酶部分敏感。抑菌谱测定表明，抗菌蛋白对芦笋茎枯病菌、小麦赤霉病菌、棉花枯萎病菌、棉花黄萎病菌、灰霉菌、立枯丝核菌等病原真菌及黄瓜角斑病菌都具有强烈的抑制作用。 展开更多
关键词 枯草杆菌 抗真菌蛋白 纯化 分离 性质
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枯草芽孢杆菌G8抗菌蛋白的理化性质和抑菌作用 被引量：30
10
作者 翟茹环 尚玉珂 +2 位作者 刘峰 张修国 慕卫 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期592-596,共5页
分离得到一株对黄瓜菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum（Lib．）de Bary有拮抗作用的枯草芽孢杆菌G8，其无菌发酵液经硫酸铵沉淀得广谱抗菌粗蛋白。为明确枯草芽孢杆菌G8的理化性质，研究了温度、pH变化、UV照射、有机溶剂、蛋白酶和保... 分离得到一株对黄瓜菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum（Lib．）de Bary有拮抗作用的枯草芽孢杆菌G8，其无菌发酵液经硫酸铵沉淀得广谱抗菌粗蛋白。为明确枯草芽孢杆菌G8的理化性质，研究了温度、pH变化、UV照射、有机溶剂、蛋白酶和保存时间对抗菌蛋白稳定性的影响。结果表明：此粗蛋白耐酸，在pH值1-10范围内均有抑菌活性，将其pH值调为1．0作用16h后保持原有活性的69．2％；对温度有较高的稳定性，抗菌蛋白经100℃处理60min保持原有活性的80．8％；对蛋白酶K和有机溶剂不敏感；抗菌粗蛋白抑菌活性持久，在常温下120天保持原有活性的71．54％。初步研究了抗菌粗蛋白对黄瓜菌核病菌的抑制作用。结果显示，病菌菌丝消融、原生质渗漏、菌丝细胞泡囊化，并抑制病菌菌核萌发。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 拮抗细菌 抗菌蛋白 抑菌作用 黄瓜菌核病菌
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棉花黄萎病拮抗细菌LC-04菌株的抗菌蛋白产生条件研究 被引量：26
11
作者 李术娜 杜红方 +2 位作者 袁洪水 张元亮 朱宝成 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2006年第4期233-237,共5页
LC-04菌株是从棉花叶部组织中分离出的一株类芽孢杆菌,其发酵液上清液的硫酸铵沉淀物对大丽轮枝菌V-190菌株的生长具有明显的拮抗作用,实验证明发酵液中含有蛋白质类抗菌物质。LC-04菌株的适宜发酵条件为:在pH7的LBG培养基中于30℃,180 ... LC-04菌株是从棉花叶部组织中分离出的一株类芽孢杆菌,其发酵液上清液的硫酸铵沉淀物对大丽轮枝菌V-190菌株的生长具有明显的拮抗作用,实验证明发酵液中含有蛋白质类抗菌物质。LC-04菌株的适宜发酵条件为:在pH7的LBG培养基中于30℃,180 r.min-1摇床振荡培养48 h,用70%硫酸铵对LC-04菌株发酵液上清液进行盐析,可以沉淀最多的抗菌蛋白。 展开更多
关键词 棉花黄萎病 大丽轮枝菌 拮抗细菌 发酵 抗菌蛋白
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多粘类芽孢杆菌BRF-1抗菌蛋白的分离纯化 被引量：24
12
作者 陈雪丽 郝再彬 +2 位作者 王光华 金剑 刘居东 《中国生物防治》 CSCD 北大核心 2007年第2期156-159,共4页
通过硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-50柱层析并采用抑菌活性和SDS-PAGE跟踪检测,从多粘类芽孢杆菌BRF-1菌株代谢产物中分离纯化到一种对大豆立枯丝核菌具有拮抗活性的抗菌蛋白,分子量约35.4kD。
关键词 多粘类芽孢杆菌 立枯丝核菌 抗菌蛋白 分离纯化
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棉花黄萎病拮抗蛋白的分离与纯化 被引量：24
13
作者 周艳芬 杜红方 +2 位作者 袁洪水 张元亮 朱宝成 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2007年第2期98-101,共4页
从棉花叶组织中分离到的类芽孢杆菌(Paenibacillus)LC105菌株对棉花黄萎病病原菌大丽轮枝菌具有明显的拮抗作用。该菌株发酵液分别用过滤、高压灭菌及有机溶剂处理,初步证明对大丽轮枝菌产生拮抗作用的物质为蛋白质。LC105菌株发酵液经... 从棉花叶组织中分离到的类芽孢杆菌(Paenibacillus)LC105菌株对棉花黄萎病病原菌大丽轮枝菌具有明显的拮抗作用。该菌株发酵液分别用过滤、高压灭菌及有机溶剂处理,初步证明对大丽轮枝菌产生拮抗作用的物质为蛋白质。LC105菌株发酵液经硫酸铵沉淀、DEAE-Sephadex A-50离子交换层析及Sephacryl S-100凝胶层析分离纯化,得到了分子量为27 kDa的抗菌蛋白。 展开更多
关键词 棉花黄萎病 大丽轮枝菌 类芽孢杆菌 抗菌蛋白 分离纯化
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拮抗菌BS—98分泌抗菌蛋白的条件及其发酵液特性 被引量：13
14
作者 胡剑 林心怡 +2 位作者 张九一 王树荣 王岳五 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第6期323-326,共4页
由本室分离得到一株强烈抑制芦笋茎枯病等植物病原真菌的拮抗菌ＢＳ—９８菌株（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）。用环柱法检测该菌株的抗菌活性表明，该菌株除抑制芦笋茎枯病菌ＰｈｏｍａａｓｐａｒａｇｉＳａｃｃ外，对小麦赤霉... 由本室分离得到一株强烈抑制芦笋茎枯病等植物病原真菌的拮抗菌ＢＳ—９８菌株（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）。用环柱法检测该菌株的抗菌活性表明，该菌株除抑制芦笋茎枯病菌ＰｈｏｍａａｓｐａｒａｇｉＳａｃｃ外，对小麦赤霉病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ），棉花枯萎病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍｆｓｐ．ｖａｓｉｎｆｅｃｔｕｍ）、棉花黄萎病菌（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｕｍａｌｂｏ—ａｔｒｕｍ）、黄瓜灰霉病菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａ）、立枯丝核菌（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ）等植物病原真菌以及黄瓜角斑病菌（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｙｒｉｎｇａｅＰＶ．ｌａｃｈｒｙｍａｎｓ）等植物病原细菌均表现出很强的拮抗作用。选用ＢＰＹ液体培养基（起始ｐＨ８．０），３０℃振荡培养４８ｈ后，可用（ＮＨ４）２ＳＯ４沉淀法从发酵液中分离出较多抑制病原真菌生长的蛋白。该发酵液中所含抗菌物在常温下对碱稳定，在酸性环境中具有良好的热稳定性。 展开更多
关键词 拮抗菌 热菌蛋白 芦笋茎枯病菌 植物病原
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生防细菌LM-3的鉴定及其抗菌蛋白的研究 被引量：21
15
作者 宋永燕 李平 +2 位作者 郑爱萍 李姝晋 谭芙蓉 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期1110-1115,共6页
LM-3是一株来自土壤的广谱拮抗细菌.经革兰氏染色、形态特征、培养特征和生理生化特征等分析,LM-3菌株被鉴定为多粘类芽孢杆菌.采用盐析法提取获得了该菌株的抗菌粗蛋白,抑菌活性测定表明抗菌蛋白对辣椒炭疽病菌等多种植物病原真菌有强... LM-3是一株来自土壤的广谱拮抗细菌.经革兰氏染色、形态特征、培养特征和生理生化特征等分析,LM-3菌株被鉴定为多粘类芽孢杆菌.采用盐析法提取获得了该菌株的抗菌粗蛋白,抑菌活性测定表明抗菌蛋白对辣椒炭疽病菌等多种植物病原真菌有强烈的抑制作用.抗菌蛋白对链霉蛋白酶E和胰蛋白酶不敏感,对蛋白酶K部分敏感;高温(120℃)处理20min后抗菌蛋白仍保留84.71%的活性;酸碱处理发现抗菌蛋白在pH 8.5时最为稳定,而在pH 2.5时80℃处理1h完全失活;25W紫外灯(2400lx)照射8h对其活性没有影响.发酵上清液经硫酸铵盐析、高温(100℃)处理和SDS-PAGE分析,该抗菌蛋白的分子量介于6kDa和14.2kDa之间. 展开更多
关键词 多粘类芽孢杆菌 生防细菌 抗菌蛋白 植物真菌病害
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天麻中一种抗真菌蛋白基因的克隆 被引量：16
16
作者 王晓晨 WillsonArdilesDIAZ +4 位作者 GuyBAUW 徐庆 MarcVanMONTAGU 陈章良 WillyDILLEN 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1999年第10期1041-1045,共5页
依据天麻(GastrodiaelataBl.f.flavidaS.Chow)抗真菌蛋白GAFP_1的N端部分氨基酸序列设计简并引物,通过RACE(快速分离cDNA末端)的方法扩增得到GAFP_1全长cDNA。该cDNA包含一个编码171个氨基酸的ORF,推导的多肽序列与测得的蛋白质部分序... 依据天麻(GastrodiaelataBl.f.flavidaS.Chow)抗真菌蛋白GAFP_1的N端部分氨基酸序列设计简并引物,通过RACE(快速分离cDNA末端)的方法扩增得到GAFP_1全长cDNA。该cDNA包含一个编码171个氨基酸的ORF,推导的多肽序列与测得的蛋白质部分序列相同;在5′端有一个长为55bp的5′非编码区;终止密码子下游有一个141bp长的3′非编码区,其中含有两个加poly(A)信号及长度为26个腺苷酸的poly(A)。经检索发现该推导蛋白序列与火烧兰(Epipactishelloborine)和二叶兰(Listeraovata)的甘露糖结合蛋白以及雪花莲(Galanthusnivalis)中的甘露糖结合凝集素具有很高同源性。 展开更多
关键词 天麻 抗真菌蛋白 快速分离 CDNA末端
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枯草芽孢杆菌菌株A抗菌蛋白的分离纯化及抗真菌机理 被引量：26
17
作者 彭兵 张树斌 +1 位作者 贾宇 王立安 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期67-74,共8页
【目的】揭示生防菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株A产生的抗真菌蛋白的性质及作用机理。【方法】采用硫酸铵沉淀菌株A发酵液获粗蛋白;采用DE52离子交换层析技术对粗蛋白进行分离纯化;对具抗真菌活性的纯化组分采用MALDI-TOF-MS... 【目的】揭示生防菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株A产生的抗真菌蛋白的性质及作用机理。【方法】采用硫酸铵沉淀菌株A发酵液获粗蛋白;采用DE52离子交换层析技术对粗蛋白进行分离纯化;对具抗真菌活性的纯化组分采用MALDI-TOF-MS进行结构分析;以玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)为材料,对纯化活性蛋白的抗真菌机理进行研究。【结果】从粗蛋白中分离到一种抗真菌活性蛋白(FV),与RNA结合蛋白Hfq Bacillus subtilis subsp.subtilis gi|16078797的匹配率为86.484%,相对分子质量为8 508.5 Da,等电点为8.04。FV对玉米小斑病菌孢子萌发的半数抑制浓度(IC50)为138.32μg.mL-1,附着胞形成的IC50为22.23μg.mL-1。经FV处理后,玉米小斑病菌菌丝顶端、中部出现膨大泡囊,呈"念珠状";扫描电镜观察发现泡囊状菌丝表面凹凸不平,并残留有碎片;透射电镜观察发现在部分菌丝细胞原生质出现"空泡"的菌丝里有"子菌丝"。【结论】枯草芽孢杆菌菌株A产生的抗真菌蛋白与RNA结合蛋白Hfq高度同源,可抑制致病真菌孢子萌发、附着胞形成,并影响菌丝细胞的形态和结构。 展开更多
关键词 抗真菌蛋白 RNA结合蛋白Hfq 孢子萌发 附着胞形成 菌丝形态结构
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枯草芽孢杆菌NCD-2菌株抗菌蛋白初步分析 被引量：23
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作者 孟立花 李社增 +2 位作者 郭庆港 马平 刘大群 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第1期189-193,共5页
枯草芽孢杆菌NCD-2菌株对棉花黄萎病病原菌大丽轮枝菌具有较强的抗生作用。通过对NCD-2菌株培养条件的研究,结果表明在30℃、培养液初始pH为7.0和培养时间为2 d条件下,利用NB培养基培养该菌株所得培养液抑菌活性优于其他培养基,其培养... 枯草芽孢杆菌NCD-2菌株对棉花黄萎病病原菌大丽轮枝菌具有较强的抗生作用。通过对NCD-2菌株培养条件的研究,结果表明在30℃、培养液初始pH为7.0和培养时间为2 d条件下,利用NB培养基培养该菌株所得培养液抑菌活性优于其他培养基,其培养液经硫酸铵沉淀所得的蛋白粗提液经RNA酶处理后的抑菌活性与对照相比差异不显著,经蛋白酶K和胰蛋白酶处理后的抑菌活性与对照相比差异显著;蛋白粗提液经60℃处理后的抑菌活性与对照相比差异不显著,经80,100,120℃处理后抑菌活性与对照相比差异显著,但经120℃处理30 min后仍有一部分抑菌活性,研究结果说明该菌株产生的抗菌物质存在性质上的差异。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 抗菌蛋白 大丽轮枝菌 棉花黄萎病
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水稻内生枯草芽孢杆菌G87抗菌蛋白的分离纯化及理化特性 被引量：25
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作者 陈夕军 李娟 +2 位作者 孙启利 童蕴慧 徐敬友 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1353-1357,共5页
【目的】为得到枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)G87的抗菌蛋白,明确其蛋白理化特性。【方法】采用硫酸铵沉淀和柱层析法进行分离纯化。【结果】获得单一抗菌活性蛋白(峰6-2-1),此抗菌蛋白分子量为50.8 kDa,等电点为5.90。经初步分析,... 【目的】为得到枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)G87的抗菌蛋白,明确其蛋白理化特性。【方法】采用硫酸铵沉淀和柱层析法进行分离纯化。【结果】获得单一抗菌活性蛋白(峰6-2-1),此抗菌蛋白分子量为50.8 kDa,等电点为5.90。经初步分析,抗菌蛋白不含脂,而含有少量(0.62%)糖;其蛋白部分具有脯氨酸或羟脯氨酸,但不含芳香族氨基酸。抗菌蛋白在高温(≥60℃)和较碱(pH>8)环境下活性明显下降,但较抗紫外线、氯仿和胰蛋白酶、蛋白酶K、胃蛋白酶。【结论】枯草芽孢杆菌G87的抗菌蛋白为不含芳烃的糖蛋白,对高温和碱性条件敏感,而对蛋白酶类和紫外线等不敏感。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 抗菌蛋白 分离纯化 理化特性 水稻内生细菌
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枯草芽孢杆菌CAB-1抑菌蛋白对黄瓜白粉病的防治作用 被引量：25
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作者 张晓云 李宝庆 +3 位作者 郭庆港 鹿秀云 李社增 马平 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2012年第3期375-380,共6页
采用子叶喷雾法分别测定了枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis CAB-1所产抑菌蛋白粗提物对黄瓜白粉病的保护和治疗生物活性。结果表明该抑菌蛋白粗提物能显著降低黄瓜白粉病的病情指数,其保护和治疗作用的效果分别为73.33%和76.85%;EC50分别... 采用子叶喷雾法分别测定了枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis CAB-1所产抑菌蛋白粗提物对黄瓜白粉病的保护和治疗生物活性。结果表明该抑菌蛋白粗提物能显著降低黄瓜白粉病的病情指数,其保护和治疗作用的效果分别为73.33%和76.85%;EC50分别为175μg.mL-1和125μg.mL-1。利用曲利苯兰染色法检测抑菌蛋白粗提物对黄瓜白粉菌Sphacrotheca fuliginea生长的影响,结果表明该抑菌蛋白粗提物能有效降低白粉菌分生孢子的萌发率及萌发的芽管个数,造成菌丝顶端畸形膨大呈球状并减少新生分生孢子的个数。接菌3 d后,对照的孢子萌发率为36.98%,而经抑菌蛋白粗提物处理后的孢子萌发率仅为4.8%;接菌7 d后对照每个分生孢子梗上串生孢子个数最多为7个,多数5～6个;而抑菌蛋白粗提物处理后每个分生孢子梗上串生孢子个数最多为2个,大部分为1个。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 抑菌蛋白 白粉病菌 抑制作用
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