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Annexin B1:一种新的细胞凋亡检测用蛋白 被引量：8
1
作者 张毅 郭瀛军 +3 位作者 王芳 高远舰 颜宏利 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期333-334,共2页
目的 :为细胞凋亡研究提供一种新的检测用蛋白。 方法 :在大肠杆菌中表达AnnexinB1蛋白 ,经离子交换层析后得纯品 ,异硫氰酸荧光黄 (fluoresceinisothiocyanate,FITC)标记AnnexinB1;选用Jarkat细胞 ,羟基喜树碱诱导该细胞凋亡 ;以FITC... 目的 :为细胞凋亡研究提供一种新的检测用蛋白。 方法 :在大肠杆菌中表达AnnexinB1蛋白 ,经离子交换层析后得纯品 ,异硫氰酸荧光黄 (fluoresceinisothiocyanate,FITC)标记AnnexinB1;选用Jarkat细胞 ,羟基喜树碱诱导该细胞凋亡 ;以FITC标记的AnnexinB1检测凋亡细胞。 结果 :FITC标记的AnnexinB1与凋亡细胞膜表面磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)结合 ,使凋亡细胞呈阳性着色 ,能有效检测细胞凋亡。 结论 :开发得到了一种新的细胞凋亡检测用蛋白AnnexinB1,为推广高效快捷的凋亡检测技术提供国产试剂奠定了基础。 展开更多
关键词 annexinb1 细胞凋亡 检测用蛋白
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Annexin B1与磷脂酰丝氨酸的结合活性 被引量：6
2
作者 王芳 张毅 +4 位作者 颜宏利 高远舰 刘凡 贺艳 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期44-46,共3页
目的 :研究 annexin B1与磷脂酰丝氨酸的结合活性。方法 :在大肠杆菌中表达 annexin B1蛋白 ,经离子交换层析得纯品 ;选用 U937细胞 ,以过氧化氢诱导凋亡 ,制备小鼠洗涤血小板 ,凝血酶激活 ;以异硫氰酸荧光黄 (FITC)标记的 annexin B1... 目的 :研究 annexin B1与磷脂酰丝氨酸的结合活性。方法 :在大肠杆菌中表达 annexin B1蛋白 ,经离子交换层析得纯品 ;选用 U937细胞 ,以过氧化氢诱导凋亡 ,制备小鼠洗涤血小板 ,凝血酶激活 ;以异硫氰酸荧光黄 (FITC)标记的 annexin B1检测凋亡细胞和活化血小板。结果 :FITC标记的 annexin B1既能与凋亡细胞特异性结合 ,又能与活化血小板特异性结合 ,结合活性接近 annexin 。结论 :研究表明 annexin B1可结合于凋亡细胞和活化血小板膜上的磷脂酰丝氨酸 (PS) ,而非其他膜成分 ,也进一步阐明 annexin 展开更多
关键词 annexin b1 磷脂酰丝氨酸 结合活性 血小板活化 细胞凋亡
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^(99m)Tc-Annexin B1的制备及其探测细胞凋亡的实验研究 被引量：4
3
作者 罗全勇 张志勇 +4 位作者 王芳 张毅 陆汉魁 孙树汉 朱瑞森 《中国医学影像技术》 CSCD 北大核心 2008年第8期1177-1181,共5页
目的制备99mTc-Annexin B1并对其体外、体内生物分布以及探测体内细胞凋亡的潜力进行评价。方法应用99mTc直接标记蛋白质的方法制备99mTc-Annexin B1。采用与活化人血小板结合实验检测99mTc-Annexin B1的体外生物活性。在正常小鼠体内... 目的制备99mTc-Annexin B1并对其体外、体内生物分布以及探测体内细胞凋亡的潜力进行评价。方法应用99mTc直接标记蛋白质的方法制备99mTc-Annexin B1。采用与活化人血小板结合实验检测99mTc-Annexin B1的体外生物活性。在正常小鼠体内进行生物分布研究。采用地塞米松诱导小鼠胸腺凋亡的动物模型和anti-Fas单抗诱导小鼠肝脏凋亡的动物模型检测99mTc-Annexin B1探测体内细胞凋亡的潜力,并用TUNEL染色证实细胞凋亡。结果直接标记法制备的99mTc-Annexin B1具有很高的放射化学纯度和很好体外稳定性。与活化人血小板的结合实验表明,99mTc-Annexin B1具有与PS结合的体外生物活性。99mTc-Annexin B1在体内具有较快的清除特性,主要聚集于肾脏。地塞米松诱导18h后,小鼠胸腺对99mTc-Annexin B1的摄取显著高于对照小鼠胸腺的摄取。Anti-Fas诱导后2h时后,小鼠肝脏对99mTc-AnnexinB1的摄取显著高于为对照动物的肝脏摄取。结论99mTc-Annexin B1具有与PS结合的体外生物活性和探测体内细胞凋亡的潜力,是一种新的细胞凋亡显像剂。 展开更多
关键词 细胞凋亡 膜联蛋白b1 生物分布 放射性核素显像
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^18F-SFB—Annexin B1探测细胞凋亡实验研究 被引量：5
4
作者 赵庆 章英剑 +7 位作者 王芳 张勇平 徐俊彦 杨忠毅 程竞仪 王明伟 王越 孙树汉 《中华核医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期112-116,共5页
目的 在体外及体内评价自动化合成模块合成的18F-N-琥珀酰亚胺-4-氟苯甲酸酯（SFB）-膜联蛋白（Annexin）B1探测细胞凋亡.方法 使用anti-Fas抗体诱导Jurkat细胞发生凋亡,用流式细胞仪检测细胞凋亡存在.通过暂时性阻断家兔肾动脉（45 mi... 目的 在体外及体内评价自动化合成模块合成的18F-N-琥珀酰亚胺-4-氟苯甲酸酯（SFB）-膜联蛋白（Annexin）B1探测细胞凋亡.方法 使用anti-Fas抗体诱导Jurkat细胞发生凋亡,用流式细胞仪检测细胞凋亡存在.通过暂时性阻断家兔肾动脉（45 min）使单侧肾经缺血再灌注发生细胞凋亡,24 h后静脉注射18F-SFB-Annexin B1,分别于注射后10,30,60,90,120和240 min行PET/CT显像.采用原位末端标记法（TUNEL）和HE染色法证实肾存在细胞凋亡.结果 用antiFas抗体诱导后细胞调亡率实验组为25.98%（120 min）,对照组仅为1.81%;实验组细胞对18F-SFBAnnexin B1的摄取高于对照组,在注射18F-SFB-Annexin B1后240 min PET/CT图像上,处理侧肾的放射性摄取高于正常对照肾.TUNEL和HE染色法证实处理侧肾存在大量细胞凋亡.结论 18F-SFB-Annexin B1保留了同磷脂酰丝氨酸（PS）结合的生物活性,在体外及体内探测细胞凋亡方面具有应用潜力. 展开更多
关键词 膜联蛋白b1 氟放射性同位素 凋亡 SFb 放射性核素显像 兔
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^99Tc^m-联肼尼克酰胺-膜联蛋白B1的制备及其探测细胞凋亡的生物学评价 被引量：4
5
作者 罗全勇 王芳 +6 位作者 张志勇 刘兴峰 罗琼 张毅 陆汉魁 孙树汉 朱瑞森 《中华核医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期217-222,共6页
目的制备^99Tc^m联肼尼克酰胺（HYNIC）-膜联蛋白（Annexin）B1并对其探测细胞凋亡的潜力进行生物学评价。方法应用^99Tc^m间接标记蛋白质的方法，以HYNIC作为双功能螯合剂制备^99Tc^mHYNIC—Annexin B1。采用与活化人血小板结合实验检... 目的制备^99Tc^m联肼尼克酰胺（HYNIC）-膜联蛋白（Annexin）B1并对其探测细胞凋亡的潜力进行生物学评价。方法应用^99Tc^m间接标记蛋白质的方法，以HYNIC作为双功能螯合剂制备^99Tc^mHYNIC—Annexin B1。采用与活化人血小板结合实验检测^99Tc^m HYNIC—Annexin B1的体外生物活性。采用地塞米松诱导小鼠胸腺凋亡的动物模型和anti—Fas单克隆抗体诱导小鼠肝凋亡的动物模型（均设相应对照组），检测^99Tc^m HYNIC—Annexin B1探测体内细胞凋亡的潜力，并用原位末端标记法（TUNEL）染色证实细胞凋亡。采用配对t检验进行统计学处理。结果间接标记法制备的^99Tc^m HYNIC—Annexin B1具有很高的放化纯（〉96％）和较好的体外稳定性。与活化人血小板的结合实验表明，^99Tc^mHYNIC—Annexin B1具有与磷脂酰丝氨酸（PS）残基结合的生物活性。地塞米松诱导18h后，小鼠胸腺对^99Tc^mHYNIC—Annexin B1的摄取为对照组的3．50倍（t=5．234，P〈0．01）。anti—Fas诱导后2h时，小鼠肝对^99Tc^mHYNIC—Annexin B1的摄取为对照组的2．02倍（t=6．178，P〈0．01）。结论采用^99Tc^m间接标记法制备的^99Tc^mHYNIC—Annexin B1具有很高的放化纯及较好的体外稳定性。^99Tc^m-HYNIC—AnnexinB1具有与PS结合的体外生物活性和探测体内细胞凋亡的潜力，是一种新的细胞凋亡显像剂。 展开更多
关键词 膜联蛋白b1 同位素标记 锝 细胞凋亡 小鼠
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^(18)F-SFB-Annexin B1探测化疗后肿瘤细胞凋亡的实验研究 被引量：2
6
作者 郑宇佳 王明伟 +5 位作者 张建平 徐俊彦 杨忠毅 程竞仪 张勇平 章英剑 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期798-803,共6页
背景与目的:诱导细胞凋亡是肿瘤化疗的机制之一,分子影像能在活体内无创、动态地检测细胞凋亡,有助于药物筛选和疗效分析。本研究旨在探讨N-琥珀酰亚胺-4-氟苯甲酸酯偶联的氟-18-膜联蛋白B1(18F-SFB-AnnexinB1)显像剂早期评价化疗诱导... 背景与目的:诱导细胞凋亡是肿瘤化疗的机制之一,分子影像能在活体内无创、动态地检测细胞凋亡,有助于药物筛选和疗效分析。本研究旨在探讨N-琥珀酰亚胺-4-氟苯甲酸酯偶联的氟-18-膜联蛋白B1(18F-SFB-AnnexinB1)显像剂早期评价化疗诱导细胞凋亡的可行性。方法:以SFB作为中间体将18F标记到AnnexinB1上。了解18F-SFB-Annexin B1在健康小鼠体内的生物分布特性。建立Walker-256荷瘤小鼠模型,随机分为两组,化疗组腹腔注射环磷酰胺(CTX 200 mg/kg,n=3),对照组注射等体积无菌0.9%的氯化钠溶液(n=3)。24 h后静脉注射18F-SFB-Annexin B1,分别于注射后1、2、3、4 h进行PET/CT显像。比较肿瘤/肌肉放射性摄取率比值(T/M)与原位缺口末端标记(TUNEL)染色法测定凋亡指数(AI)的关系。结果:18F-SFBAnnexin B1放化纯度>95%,生物分布显示肾脏放射性最高,其次为肝、脾和心肌,显像剂在体内清除速率快。化疗组与对照组各时间点T/M比值分别为4.38±0.56、6.75±1.16、6.44±1.12、4.81±0.17和2.35±0.14、2.99±0.55、3.04±0.41、2.33±0.47,差异有统计学意义(F分别为23.790、16.913、14.046、77.517,P均<0.05)。TUNEL染色AI分别为(21.00±0.04)%和(8.58±0.01)%,差异有统计学意义(F=21.539,P<0.05),且T/M值与AI间有很好的相关性(r=0.91,P<0.05)。结论:18F-SFB-AnnexinB1能早期反映化疗诱导的细胞凋亡,有望用于活体细胞凋亡分子显像和早期疗效判断。 展开更多
关键词 膜联蛋白b1 凋亡 放射性核素显像 化学疗法 疗效评价
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Annexin B1分子结构、Ca^(2+)结合位点与进化的分析 被引量：1
7
作者 王凯慧 郭瀛军 +3 位作者 高远舰 王开宇 颜宏利 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1078-1081,共4页
目的 :研究 Annexin B1与其他膜联蛋白的相关性及生物学功能。方法 :从 Swiss- Prot和 NCBI- Structure数据库中已知的膜联蛋白氨基酸序列中 ,根据物种的分类挑选 6 8个 ,用生物信息学方法分析 Annexin B1的结构、功能与进化。 结果 :An... 目的 :研究 Annexin B1与其他膜联蛋白的相关性及生物学功能。方法 :从 Swiss- Prot和 NCBI- Structure数据库中已知的膜联蛋白氨基酸序列中 ,根据物种的分类挑选 6 8个 ,用生物信息学方法分析 Annexin B1的结构、功能与进化。 结果 :Annexin B1包含 4个序列和结构高度相似的结构域 ,含有 8个 Ca2 + 结合位点 ,二级结构显示蛋白主要由 α螺旋结构组成 ,具有寄生生物所特有的氨基酸残基。在物种进化上 ,Annexin B1和节肢动物为 1支 ,新杆线虫、植物、鸟类和脊椎动物为 1支 ,原虫、腔肠动物、两栖类和脊索动物为 1支。另外 ,Annexin B1与 Annexin A1在进化上有较强的亲缘关系 ,结构和功能上 An-nexin A1和 Annexin A5相似。结论 :Annexin B1具有膜联蛋白的结构特征 ,含有抗凝血、参与细胞凋亡、炎性反应、信号转导和细胞分化等细胞生理功能的氨基酸结构域和决定种属特异性的氨基酸序列 ,在进化上同源于 Annexin A1。 展开更多
关键词 annexin b1 结构 功能 进化
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Annexin B1单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和特性鉴定
8
作者 高远舰 王俊霞 +3 位作者 王凯慧 张毅 颜宏利 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1347-1349,共3页
目的:制备抗Annexin B1单克隆抗体,为进一步研究Annexin B1的生理功能奠定基础。方法:制备了具有抗原性的Annexin B1,并采用脾内包埋法免疫小鼠,无菌取出脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,随后以ELISA方法和有限稀释法进行3次筛选和亚... 目的:制备抗Annexin B1单克隆抗体,为进一步研究Annexin B1的生理功能奠定基础。方法:制备了具有抗原性的Annexin B1,并采用脾内包埋法免疫小鼠,无菌取出脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,随后以ELISA方法和有限稀释法进行3次筛选和亚克隆。结果:用杂交瘤技术,我们获得了1株杂交瘤细胞株,能稳定地分泌高滴度的针对Annexin B1的特异单抗。结论:成功筛选并制备了Annexin B1的特异单抗,为下一步功能研究打下了良好的基础。 展开更多
关键词 膜联蛋白b1 杂交瘤 单克隆抗体
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膜联蛋白B1在猪囊尾蚴免疫逃避作用的研究进展
9
作者 于铭川 王昕蕊 +3 位作者 宋伟宜 宋伊宁 杨景芳 孙树民 《中国农学通报》 2021年第8期110-115,共6页
膜联蛋白是一类有效的内源性调节蛋白,在Ca2+存在的条件下与膜磷脂结合,参与细胞活动的多种功能,其与肿瘤发生、自身免疫性疾病、病毒和寄生虫感染等密切相关。作为膜联蛋白家族成员Annexin B1具有独特的氨基酸残基结构,与不同种属的寄... 膜联蛋白是一类有效的内源性调节蛋白,在Ca2+存在的条件下与膜磷脂结合,参与细胞活动的多种功能,其与肿瘤发生、自身免疫性疾病、病毒和寄生虫感染等密切相关。作为膜联蛋白家族成员Annexin B1具有独特的氨基酸残基结构,与不同种属的寄生虫入侵特异性宿主密切相关。本文主要阐述了膜联蛋白的种类及膜联蛋白B1在猪囊尾蚴感染宿主机体过程中免疫逃避的作用,旨在探索其猪囊尾蚴感染的免疫逃避机制。深入对膜联蛋白B1和囊尾蚴之间相互关系的进一步了解,以及膜联蛋白B1在寄生虫免疫中更深入的研究,对寄生虫免疫逃避的生物学意义和寄生虫病诊断治疗提供了相关的策略。 展开更多
关键词 膜联蛋白b1 调节蛋白 囊尾蚴 凋亡 免疫逃避机制
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融合蛋白AnxB1-MLT的表达、纯化及其对肝癌细胞SMMC7721和HepG2增殖的抑制作用
10
作者 王玉招 颜宏利 +3 位作者 唐冠楠 林恒荣 章意亮 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1171-1176,共6页
目的以膜联蛋白B1（AnxBl）为导向分子，与蜂毒素（MLT）基因融合，制备AnxBl一MLT融合蛋白，探讨其对磷脂酰丝氨酸脂质体的结合活性及对肝癌细胞SMMC7721和HepG2增殖的抑制作用。方法利用重叠延伸PCR技术构建AnxBl和MLT的融合基因AnxBl... 目的以膜联蛋白B1（AnxBl）为导向分子，与蜂毒素（MLT）基因融合，制备AnxBl一MLT融合蛋白，探讨其对磷脂酰丝氨酸脂质体的结合活性及对肝癌细胞SMMC7721和HepG2增殖的抑制作用。方法利用重叠延伸PCR技术构建AnxBl和MLT的融合基因AnxBl-MLT，克隆至原核表达载体pGEX-5T，转化至宿主菌K802，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导AnxBl-MLT融合蛋白表达，优化表达条件，用谷胱甘肽一孓转移酶（GST）亲和色谱纯化柱纯化融合蛋白。采用磷脂结合实验验证AnxBl-MLT融合蛋白的钙依赖性磷脂结合活性，采用CCK-8方法分别检测AnxBl-MLT融合蛋白对肝癌细胞系SMMC7721和HepG2细胞增殖的影响。结果AnxBl-MLT融合蛋白在宿主菌K802中能够表达，在菌液生长至D600为0．6时，加入诱导剂IPTG至终浓度0．2mmol／L，低温（22~24℃）诱导表达4h，可使蛋白表达量较高且在上清有表达。通过GST亲和色谱纯化柱纯化融合蛋白，SDS-PAGE结果显示在63000处可见单一目的条带，纯度〉95％。AnxBl-MLT融合蛋白保留了AnxBl的钙依赖性磷脂结合活性，并能显著抑制肝癌细胞系SMMC7721和HepG2的增殖。结论成功制备了AnxBl-MLT融合蛋白，该融合蛋白具有AnxBl的钙依赖性磷脂结合活性，可抑制肝癌细胞SMMC7721和HepG2的增殖，为进一步利用动物实验研究AnxBl-MLT的抗肿瘤效果奠定了基础。 展开更多
关键词 膜联蛋白b1 蜂毒素 细胞增殖 靶向药物治疗
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