利用amiRNA技术沉默矮牵牛查尔酮合成酶基因 被引量：11

1

作者 王会平 遇玲 +3 位作者 邹世慧 陈璟 郭余龙 李名扬 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期2491-2498,共8页

转基因介导的基因沉默技术是进行基因功能分析和利用基因工程改良作物的重要手段。在植物中,amiRNA(artificial microRNA)是具有高度特异性的基因沉默技术。根据amiRNA设计的原则设计了用于沉默矮牵牛查尔酮合成酶(chalcone synthase,C... 转基因介导的基因沉默技术是进行基因功能分析和利用基因工程改良作物的重要手段。在植物中,amiRNA(artificial microRNA)是具有高度特异性的基因沉默技术。根据amiRNA设计的原则设计了用于沉默矮牵牛查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)基因的amiRNA:amiRchs1,用拟南芥miR319a的前体作为表达amiRchs1的骨架,重叠PCR扩增,将天然miR319a序列替换成amiRchs1,合成的DNA片段置于35S启动子之后,转化导入矮牵牛。转基因植株花色变淡,花冠出现弥散的白色斑点或不规则的白色斑块,严重的几乎呈纯白色,花色素苷含量明显下降,CHS的mRNA含量明显降低,表明拟南芥miR319a的前体作为表达amiRNA的骨架在矮牵牛中可行,且能有效沉默结构基因。 展开更多

关键词 矮牵牛 基因沉默 amirna 查尔酮合成酶基因

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丹参转录因子基因SmMYC amiRNA表达载体的构建及其对丹参的转化 被引量：5

2

作者 王浩如 王健 +1 位作者 王仕英 王喆之 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1339-1346,共8页

丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)为我国传统中药,其活性成分的药理作用广泛,尤其在防治心血管病药物中具有重要作用。丹参水溶性酚酸类物质合成途径由苯丙烷代谢和酪氨酸代谢共同参与而成。转录因子对植物次生代谢起着十分重要的调节... 丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)为我国传统中药,其活性成分的药理作用广泛,尤其在防治心血管病药物中具有重要作用。丹参水溶性酚酸类物质合成途径由苯丙烷代谢和酪氨酸代谢共同参与而成。转录因子对植物次生代谢起着十分重要的调节作用。我们前期测序结果显示,SmMYC是一个丹参bHLH类转录因子,可能参与丹参酚酸类化合物生物合成的调控。本研究利用拟南芥miRNA319前体为模板骨架,通过over-lapping PCR技术构建旨在能对SmMYC进行特异性沉默的artifi cal miRNA(amiRNA)植物表达载体,命名为pCambia1302-amiR-SmMYC,并通过农杆菌介导的遗传转化方法将其导入丹参。Real-time PCR结果显示,所得转化阳性株系中SmMYC的mRNA水平均呈现不同程度的下降,同时酚酸类代谢途径中相关酶基因的表达也表现为相应程度的下调;福林酚法检测结果显示,转化株系中总酚酸含量均低于同期的野生型丹参。以上实验结果初步显示丹参SmMYC可能作为一个重要的转录因子参与酚酸类活性物质的代谢调控,同时为进一步研究SmMYC在丹参酚酸类化合物生物合成中的调控功能奠定了基础。 展开更多

关键词 丹参 bHLH转录因子 amirna 遗传转化

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SmPAP1基因特异性沉默导致转基因丹参体内的酚酸含量显著下降 被引量：4

3

作者 王健 王浩如 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期2348-2354,共7页

R2R3-MYB类转录因子在植物次生代谢中具有十分重要的调控作用。丹参SmPAP1是一个R2R3-MYB类转录因子基因。为了探讨SmPAP1是否参与丹参酚酸类化合物生物合成的调控,本研究以拟南芥miRNA319前体为基本骨架,通过over-lapping PCR技术构建a... R2R3-MYB类转录因子在植物次生代谢中具有十分重要的调控作用。丹参SmPAP1是一个R2R3-MYB类转录因子基因。为了探讨SmPAP1是否参与丹参酚酸类化合物生物合成的调控,本研究以拟南芥miRNA319前体为基本骨架,通过over-lapping PCR技术构建artifical miRNA(amiRNA)植物表达载体进而对SmPAP1进行特异性沉默。Real-time PCR和杂交结果显示:与对照株相比,阳性转基因株系中SmPAP1的mRNA水平均呈现不同程度的显著下降,同时酚酸类化合物合成途径中酶基因也呈现不同程度的显著下调;总酚含量测定结果显示:转化株系中总酚酸含量均约为同期野生型丹参的50%。研究结果说明SmPAP1可能作为一个重要的转录因子参与丹参酚酸类活性物质的代谢调控。 展开更多

关键词 丹参 amirna R2R3MYB类转录因子 基因特异性沉默 酚酸

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大豆gma-miR1510a生物信息学分析及人工microRNA植物表达载体构建 被引量：4

4

作者 倪志勇 于月华 +1 位作者 陈全家 曲延英 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期239-244,共6页

Micro RNAs(mi RNAs)是最近发现的一类广泛存在的内生的小RNAs,在转录水平负调控基因的表达。本研究采用生物信息学方法分析gma-mi R1510a的靶基因和启动子中的顺式作用元件。PLACE和Plant CARE启动子数据库分析表明gma-mi R1510a启动... Micro RNAs(mi RNAs)是最近发现的一类广泛存在的内生的小RNAs,在转录水平负调控基因的表达。本研究采用生物信息学方法分析gma-mi R1510a的靶基因和启动子中的顺式作用元件。PLACE和Plant CARE启动子数据库分析表明gma-mi R1510a启动子具有一些参与非生物胁迫、植物激素、组织特异表达和光应答元件。PMRD软件预测获得9个gma-mi R1510a靶基因,属于抗病蛋白和ATP结合家族成员。通过重叠PCR方法替换拟南芥At-MIR319的成熟链和互补链序列,构建含有ami R1510a前体的植物表达载体ami R1510a-p CAMBIA3301。 展开更多

关键词 大豆 gma-miR1510a amirna 启动子

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GbTCP10基因植物表达载体的构建及拟南芥转化 被引量：3

5

作者 王怡 于月华 +2 位作者 杨成元 陈全家 倪志勇 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期144-149,共6页

TCP转录因子广泛参与植物细胞生长和增殖调控,本研究构建海岛棉GbTCP10基因沉默和过量表达植物表达载体。以GbTCP10基因pGEM-T Easy-GbTCP10质粒为模板进行PCR扩增,连接至植物表达载体pCAMBIA3301中,再利用冻融法和热激法转到农杆菌GV3... TCP转录因子广泛参与植物细胞生长和增殖调控,本研究构建海岛棉GbTCP10基因沉默和过量表达植物表达载体。以GbTCP10基因pGEM-T Easy-GbTCP10质粒为模板进行PCR扩增,连接至植物表达载体pCAMBIA3301中,再利用冻融法和热激法转到农杆菌GV3101菌株中,通过农杆菌浸染法转化拟南芥植株,初步证明已获得海岛棉GbTCP10基因的拟南芥。利用重叠PCR方法替换拟南芥At-MIR319的成熟链和互补链序列,构建含有amiRTCP10前体的植物表达载体amiRTCP10-pCAMBIA3301,本试验结果有助于进一步研究海岛棉GbTCP10基因的生物学功能和棉花纤维发育机制。 展开更多

关键词 海岛棉(Gossypium barbadense) 拟南芥(Arabidopsis thaliana) 植物表达载体 amirna

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棉花FAD2-1基因的克隆及其ihpRNA和amiRNA干扰载体的构建 被引量：2

6

作者 赵立群 李仁 +4 位作者 李蔚 谭小力 杨佑明 华金平 郭仰东 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2011年第2期189-192,F0003,共5页

采用RT-PCR方法克隆了棉花△-12脂肪酸去饱和酶基因(GhFAD2-1)的cDNA全长序列,该基因含有1158 bp的完整开放阅读框。棉花FAD2-1是种子中编码催化油酸形成不饱和脂肪酸的关键酶的基因,选取GhFAD2-1基因中的一段特异的515 bp片段,构建了... 采用RT-PCR方法克隆了棉花△-12脂肪酸去饱和酶基因(GhFAD2-1)的cDNA全长序列,该基因含有1158 bp的完整开放阅读框。棉花FAD2-1是种子中编码催化油酸形成不饱和脂肪酸的关键酶的基因,选取GhFAD2-1基因中的一段特异的515 bp片段,构建了种子特异性启动子NAPIN调控的ihpRNA干扰表达载体pFGC1008-NAPIN-FAD2-1,同时构建了针对GhFAD2-1基因的人工miRNA表达载体pCAMBIA1302-amiRNA-FAD2-1。 展开更多

关键词 棉花△-12脂肪酸去饱和酶基因 ihpRNA amirna 高油酸

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大豆gma-miR1514b生物信息学分析及人工microRNA植物表达载体构建 被引量：2

7

作者 倪志勇 于月华 +1 位作者 陈全家 曲延英 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期46-51,共6页

MicroRNAs在植物发育与逆境响应等多个方面具有重要的调节作用。本研究采用生物信息学方法分析gmamiR1514b的靶基因和启动子中的顺式作用元件。PLACE和Plant CARE启动子在线预测工具分析表明gma-miR1514b启动子序列具有TATA-box、CAAT-... MicroRNAs在植物发育与逆境响应等多个方面具有重要的调节作用。本研究采用生物信息学方法分析gmamiR1514b的靶基因和启动子中的顺式作用元件。PLACE和Plant CARE启动子在线预测工具分析表明gma-miR1514b启动子序列具有TATA-box、CAAT-box基本的顺式作用元件和一些参与光、逆境和植物激素应答相关的顺式作用元件。PMRD软件预测获得5个gma-miR1514b靶基因,分别与拟南芥CA2、NTL9和ANAC014基因同源。通过重叠PCR方法替换拟南芥At-MIR319的成熟链和互补链序列,构建含有amiR1514b前体的植物表达载体amiR1514b-p CAMBIA3301。 展开更多

关键词 大豆 gma-miR1514b amirna 启动子

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amiRNA分子设计及其离体合成策略 被引量：2

8

作者 叶梅霞 崔东清 +4 位作者 李昊 王静澄 刘军梅 张志毅 安新民 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期92-97,共6页

详细介绍了基于WMD3(Web MicroRNA Designer 3)软件平台的amiRNA(artificial microRNA)分子自动设计方法及其离体合成策略。应用网络在线设计时,只需输入目的基因靶序列相关信息后便可获得候选amiRNA。根据选定的最佳amiRNA,可得到4条含... 详细介绍了基于WMD3(Web MicroRNA Designer 3)软件平台的amiRNA(artificial microRNA)分子自动设计方法及其离体合成策略。应用网络在线设计时,只需输入目的基因靶序列相关信息后便可获得候选amiRNA。根据选定的最佳amiRNA,可得到4条含有amiRNA以及载体中miRNA两侧序列的寡聚核苷酸序列。重叠延伸PCR合成策略可以以这4条序列以及根据质粒模板设计的A、B两段序列作为引物,扩增出目标amiRNA。同样尿嘧啶切除的策略也可合成amiRNA,但这些引物序列需做适当调整变动。此外,还介绍了基于特异引物退火的amiRNA合成策略,该策略可保证amiRNA分子能够一步PCR合成,合成后的amiRNA表达盒可通过合适的限制性位点被克隆至目的载体中的相应位点。可以预见,这种amiRNA分子设计的科学性与合成策略的精确性将会使amiRNAi技术在生物基因功能分析中发挥更加重要的作用,对生命科学研究产生深远的影响。 展开更多

关键词 WMD3 amirna 分子设计 合成策略

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转人工miRNA抗玉米粗缩病毒载体玉米的培育及其抗病能力 被引量：2

9

作者 宣宁 赵传志 +6 位作者 彭振英 陈高 边斐 廉明政 刘国霞 王兴军 毕玉平 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1375-1386,共12页

玉米是重要的粮食作物,水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)是玉米粗缩病的病原,由其引起的玉米粗缩病给玉米生产造成重大损失。利用人工mi RNA构建抗病毒植物的技术已经在多种植物中被证明有效,但是在玉米中的尝试未见报道。实验根据玉米zea-mi R1... 玉米是重要的粮食作物,水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)是玉米粗缩病的病原,由其引起的玉米粗缩病给玉米生产造成重大损失。利用人工mi RNA构建抗病毒植物的技术已经在多种植物中被证明有效,但是在玉米中的尝试未见报道。实验根据玉米zea-mi R159a的前体序列和RBSDV基因组中编码功能蛋白的基因和基因沉默抑制子的序列信息设计引物,构建了用于沉默RBSDV编码基因和基因沉默抑制子的ami RNA(Artificial mi RNA)基因。构建p CAMBIA3301-121-ami RNA植物表达载体,利用农杆菌介导法转化玉米自交系综31(Z31)。对转基因玉米进行分子检测,选择mi RNA表达量高的纯合体株系进行自然发病实验,按0-4的分级标准调查玉米粗缩病的严重度。结果表明,转抗粗缩病毒人工mi RNA载体玉米纯合体株系的抗病表现好于野生型玉米,其中针对基因组6的S6-mi R159转基因玉米抗病情况较好。研究表明利用人工mi RNA技术构建抗病毒病玉米新品种是可行的。 展开更多

关键词 amirna 玉米粗缩病毒 转基因玉米

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番茄响应生物胁迫相关miRNA的研究进展 被引量：1

10

作者 崔娟娟 栾雨时 《生命科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期533-538,共6页

mi RNA(micro RNA)是一类长约22 nt的非编码小RNA分子,参与植物生长发育和胁迫响应等过程。近年来,通过生物学实验和生物信息学预测两种方法,陆续发现了一些响应病毒、真菌和共生真菌胁迫的番茄mi RNA。这些mi RNA的研究以及ami RNA(art... mi RNA(micro RNA)是一类长约22 nt的非编码小RNA分子,参与植物生长发育和胁迫响应等过程。近年来,通过生物学实验和生物信息学预测两种方法,陆续发现了一些响应病毒、真菌和共生真菌胁迫的番茄mi RNA。这些mi RNA的研究以及ami RNA(artificial mi RNA)技术的应用,将为番茄乃至其他植物病害的防治提供新的契机。 展开更多

关键词 番茄 生物胁迫 MIRNA amirna

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甘蓝型油菜雄性不育基因BnaX.MS1.a的克隆及其amiRNA载体的构建 被引量：1

11

作者 刘振林 柯丽萍 +1 位作者 何海燕 陈锦清 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第5期552-557,共6页

根据拟南芥MS1基因已知保守序列设计特异性引物,分离克隆甘蓝型油菜中与拟南芥MS1基因同源的基因片段。应用PCR-Walking技术获得甘蓝型油菜核雄性不育基因BnaX.MS1.a,其全长3 424 bp。BnaX.MS1.a基因与拟南芥MS1基因全长序列同源性为60.... 根据拟南芥MS1基因已知保守序列设计特异性引物,分离克隆甘蓝型油菜中与拟南芥MS1基因同源的基因片段。应用PCR-Walking技术获得甘蓝型油菜核雄性不育基因BnaX.MS1.a,其全长3 424 bp。BnaX.MS1.a基因与拟南芥MS1基因全长序列同源性为60.3%,编码序列同源性为89.5%。根据基因序列比对结果推测开放阅读框长2 004 bp,编码667个氨基酸,分子量为76.5 kD,等电点为8.01。BnaX.MS1.a基因编码的氨基酸序列与已知拟南芥MS1基因编码的氨基酸序列同源性达93%。构建BnaX.MS1.a基因的amiRNA载体转化甘蓝型油菜,旨在研发核不育基因工程油菜。 展开更多

关键词 MS1 BnaX.MS1.a 甘蓝型油菜 amirna

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amiRNA技术及其在食用作物遗传改良中的应用 被引量：1

12

作者 杨延 刘迪秋 +1 位作者 葛锋 陈朝银 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期388-392,397,共6页

内源miRNAs(microRNAs)是负调控真核生物基因表达的关键因子。amiRNAs(artificial microRNAs)是模拟内源miRNA的生成途径人工合成的miRNA,它能高效抑制靶基因的表达。运用amiRNA技术调控基因表达在调控精确性、效率、遗传稳定性及生物... 内源miRNAs(microRNAs)是负调控真核生物基因表达的关键因子。amiRNAs(artificial microRNAs)是模拟内源miRNA的生成途径人工合成的miRNA,它能高效抑制靶基因的表达。运用amiRNA技术调控基因表达在调控精确性、效率、遗传稳定性及生物安全性等多方面具有显著优势。本文就amiRNA技术的原理、优势以及该技术在食用作物品质改良及营养改善、雄性不育系培育、抗病毒和抗逆作物培育中的应用进行了综述。 展开更多

关键词 amirna 食用作物 基因沉默 遗传改良 应用

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拟南芥植物型PEPC基因人工小RNA表达载体的构建与遗传转化

13

作者 冯都华 王伏林 陈锦清 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第12期249-254,共6页

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)是植物中具有多种生理功能的酶。为探索拟南芥中植物型PEPC基因对模式植物拟南芥脂肪酸含量以及抗逆性等方面的影响,笔者构建了同时敲除拟南芥Atppc1、Atppc2和Atppc3基因的人工小RNA(amiRNA)植物表达载体p... 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)是植物中具有多种生理功能的酶。为探索拟南芥中植物型PEPC基因对模式植物拟南芥脂肪酸含量以及抗逆性等方面的影响,笔者构建了同时敲除拟南芥Atppc1、Atppc2和Atppc3基因的人工小RNA(amiRNA)植物表达载体pFGC-amiAtppc123,经根癌农杆菌EHA105介导,用花序浸染法转化拟南芥,成功获得转基因植株。RT-PCR半定量分析表明人工小RNA在转化植株中成功进行了超量表达。该试验为分析拟南芥脂肪酸含量以及抗逆性方面提供了基础材料。 展开更多

关键词 PEPC 拟南芥 amirna 脂肪酸含量 花序浸染

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amiRNA介导的兼抗PVX、PVY、PSTVd马铃薯植株获得及抗性鉴定 被引量：1

14

作者 姜丽丽 牟芮 +2 位作者 刘尚武 张桂芝 金光辉 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2021年第3期195-202,共8页

为获得兼抗多种病毒(类病毒)的马铃薯植株,分别克隆了靶向PVX、PVY和PSTVd蛋白的P25、HC-Pro和Virp1基因,以拟南芥pre-miR159a为骨架设计了针对P25、HC-Pro和Virp1基因的amiRNA序列,通过Overlapping PCR将3个amiRNA片段连接,并导入植物... 为获得兼抗多种病毒(类病毒)的马铃薯植株,分别克隆了靶向PVX、PVY和PSTVd蛋白的P25、HC-Pro和Virp1基因,以拟南芥pre-miR159a为骨架设计了针对P25、HC-Pro和Virp1基因的amiRNA序列,通过Overlapping PCR将3个amiRNA片段连接,并导入植物双元表达载体pCAMBIA1300-221,构建植物表达载体p1300-221-pre-amiR-P25-HCPro-Virp1,经PCR及酶切验证,表达载体构建正确。农杆菌介导法将含目的基因质粒菌液侵染马铃薯品种费乌瑞它脱毒微型薯片,经再生、压力筛选,抗性植株分化及植株壮苗共获得转化株系15株,PCR检测结果表明,其中10株检测到与目的基因大小一致的片段(729 bp)。qRT-PCR结果显示,外源amiR-P25-HCPro-Virp1基因在10个转化植株中均有表达,相对表达量在7.68~21.37。对T0阳性转化植株的攻毒试验,将PVX、PVY和PSTVd病毒等量混合液摩擦接种至6~8叶期的植株叶片,20 d后观察发现,对照植株感病严重,出现植株矮小、叶片斑驳等症状,而转化植株未表现出感病症状,生长正常。RT-PCR进行病毒特异性检测,结果显示,转化植株中也未检测到病毒序列,这表明转amiR-P25-HCPro-Virp在转化植株中能稳定表达,转化植株能够兼抗PVX、PVY和PVSTd 3种病毒(类病毒)。得到了同时兼抗PVX、PVY和PVSTd转化植株,且抗性显著,为马铃薯抗病毒育种提供了新的遗传资源。 展开更多

关键词 马铃薯 amirna PVX PVY PSTVD

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人工microRNA干扰DREB亚族A-5组转录抑制子基因增强了拟南芥对低温和高盐胁迫的耐受性 被引量：1

15

作者 周露 董春娟 刘进元 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期34-41,共8页

转录抑制子是一类与DNA的特异位点结合并抑制其附近基因转录的蛋白质,主要通过与转录激活子或基本转录复合物发生作用以及引起染色质重排等3种方式来抑制目标基因的转录。DREB类转录因子的A-5组中共有6个转录抑制子,其功能和作用机制还... 转录抑制子是一类与DNA的特异位点结合并抑制其附近基因转录的蛋白质,主要通过与转录激活子或基本转录复合物发生作用以及引起染色质重排等3种方式来抑制目标基因的转录。DREB类转录因子的A-5组中共有6个转录抑制子,其功能和作用机制还有待进一步研究。通过设计人工microRNA-A5(amiRNA-A5)使其较特异地作用这些抑制子的mRNA,并将构建成功的pCAMBIA-pre-amiRNA-A5表达载体转化到拟南芥中,最终得到了9株T2代转基因纯合子。Real-time PCR检测表明,与野生型对照相比,转基因植株中靶基因的表达量有明显降低。抗性分析的结果显示与野生型植株相比转基因植株在低温和高盐胁迫条件下其相对离子渗漏率(REL)和丙二醛(MDA)含量增加都比较少,表明转基因植株对低温和高盐胁迫的耐受性增强,这为进一步研究DREB亚族A-5组转录抑制子在胁迫条件下的功能和作用的分子机制奠定了基础。 展开更多

关键词 amirna DREB亚族A-5组 转录抑制子 基因沉默 抗性

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海岛棉GbTCP5基因沉默和过量表达载体的构建及拟南芥转化 被引量：1

16

作者 王怡 范琪 +4 位作者 于月华 梁承娟 陈全家 曲延英 倪志勇 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期372-377,共6页

海岛棉具有优良的纤维品质,TCP蛋白参与细胞生长和增殖调控,本研究构建海岛棉GbTCP5基因沉默和过量表达植物表达载体。以GbTCP5基因pGEM-T Easy-GbTCP5质粒为模板进行PCR扩增,并将该基因构建到植物表达载体pCAMBIA3301中,利用冻融法转... 海岛棉具有优良的纤维品质,TCP蛋白参与细胞生长和增殖调控,本研究构建海岛棉GbTCP5基因沉默和过量表达植物表达载体。以GbTCP5基因pGEM-T Easy-GbTCP5质粒为模板进行PCR扩增,并将该基因构建到植物表达载体pCAMBIA3301中,利用冻融法转入农杆菌GV3101菌株,通过农杆菌浸染法转化拟南芥植株,初步证明已获得转化海岛棉GbTCP5基因的拟南芥。利用重叠PCR方法替换拟南芥AtMIR319的成熟链和互补链序列,构建含有amiRTCP5前体的植物表达载体amiRTCP5-pCAMBIA3301,为深入研究海岛棉GbTCP5基因的生物学功能奠定基础,为研究棉花纤维发育机制提供理论依据。 展开更多

关键词 海岛棉 植物表达载体 amirna 拟南芥

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amiRNA抗病毒策略及其在植物抗病毒研究中的应用 被引量：1

17

作者 王雷 刘文轩 +1 位作者 姬峰 张振臣 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2015年第7期5-10,共6页

人工小RNA(artificial microRNA,amiRNA)抗病毒策略是通过内源miRNA(microRNA)的作用机制人为沉默病毒靶基因,该策略稳定有效且能对多种病毒产生抗性。利用该策略,已经获得了多种抗病毒转基因植物。介绍了amiRNA抗病毒策略的机制、特点... 人工小RNA(artificial microRNA,amiRNA)抗病毒策略是通过内源miRNA(microRNA)的作用机制人为沉默病毒靶基因,该策略稳定有效且能对多种病毒产生抗性。利用该策略,已经获得了多种抗病毒转基因植物。介绍了amiRNA抗病毒策略的机制、特点及利用该策略防治植物病毒病害的研究进展。 展开更多

关键词 病毒病害 RNA干扰 amirna 抗病毒转基因植物

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ptc-miR213的人工microRNA植物表达载体的构建及遗传转化 被引量：1

18

作者 谢丽华 蒋晶 +4 位作者 刘明英 乔桂荣 邱文敏 杨惠琴 卓仁英 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2013年第1期29-33,共5页

ptc-miR213是在构建盐胁迫条件下青杨microRNA文库中发现的,预测其靶基因为MYB4、PP2C、蛋白激酶等,其中MYB家族与植物的耐盐性密切相关。为了探索ptc-miR213在植物盐碱胁迫应答方面的作用,实验构建了植物表达载体pCAM2300-ami213,经根... ptc-miR213是在构建盐胁迫条件下青杨microRNA文库中发现的,预测其靶基因为MYB4、PP2C、蛋白激酶等,其中MYB家族与植物的耐盐性密切相关。为了探索ptc-miR213在植物盐碱胁迫应答方面的作用,实验构建了植物表达载体pCAM2300-ami213,经根癌农杆菌EHA105介导转化拟南芥,成功获得转基因植株。RT-PCR分析表明amiR213在转基因拟南芥中能够超量表达。本研究为分析ptc-miR213及其靶基因参与植物盐碱胁迫应答奠定了基础。 展开更多

关键词 amirna 拟南芥 花序浸染 盐胁迫

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Artificial miRNA调控甘蓝型油菜芥酸的研究 被引量：1

19

作者 王志伟 张自阳 +3 位作者 林丽婷 张金文 刘明久 乔岩 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期24-30,共7页

芥酸是重要的工业原料,主要来源是甘蓝型油菜种子,为调节甘蓝型油菜种子内芥酸含量,针对甘蓝型油菜芥酸合成过程中的关键酶基因Bnfad2设计特异性amiRNA,并构建种子特异表达载体,转化高芥酸甘蓝型油菜品种MY15和低芥酸甘蓝型油菜品种LEA... 芥酸是重要的工业原料,主要来源是甘蓝型油菜种子,为调节甘蓝型油菜种子内芥酸含量,针对甘蓝型油菜芥酸合成过程中的关键酶基因Bnfad2设计特异性amiRNA,并构建种子特异表达载体,转化高芥酸甘蓝型油菜品种MY15和低芥酸甘蓝型油菜品种LEA01,并对转化植株T_0种子脂肪酸进行分析。结果表明,转化的高芥酸甘蓝型油菜芥酸的增加最高达到5.12%,最低2.11%;而转化的低芥酸品种,最高仅为0.45%,最低只有0.16%,而且所有转化低芥酸材料的芥酸含量都小于1%;同时转化种子内油酸的含量得到了明显的提高,最低为4.99%,最高达到了10.71%,亚油酸降低的幅度十分明显,最大降幅达到17%。表明amiRNA技术可以通过影响脂肪酸合成过程中特定基因的表达,有效改变种子内脂肪酸的组成,从而改变其营养结构,提高营养价值,进一步提高油菜种子的附加值。本研究为运用amiRNA技术调节油菜脂肪酸组成和改变其营养结构提供了一定理论依据。 展开更多

关键词 甘蓝型油菜 芥酸 脂肪酸 amirna 调控

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针对乙肝病毒的串联序列amiRNA表达载体的构建

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作者 蒲春文 王莉芬 +5 位作者 赵亮 曲素丽 张影 孙伟祥 黄鑫 程宁 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2011年第10期902-905,908,共5页

目的为优化RNA干扰研究方法,构建了针对乙肝病毒的串联序列amiRNA(artificial microRNA)质粒表达载体。方法设计针对乙型肝炎病毒S区的靶干扰序列,构建单一序列amiRNA质粒表达载体;将其中干扰效率好的两个序列串联起来,构建串联序列ami... 目的为优化RNA干扰研究方法,构建了针对乙肝病毒的串联序列amiRNA(artificial microRNA)质粒表达载体。方法设计针对乙型肝炎病毒S区的靶干扰序列,构建单一序列amiRNA质粒表达载体;将其中干扰效率好的两个序列串联起来,构建串联序列amiRNA质粒表达载体。结果经酶切及测序鉴定,插入序列与靶序列一致,载体构建正确。结论成功构建了新型针对乙肝病毒的串联序列amiRNA质粒表达载体,为进一步体外及体内实验奠定了基础。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 RNA干扰 amirna 串联序列质粒表达载体

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