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产气荚膜梭菌α毒素保护性抗原基因在大肠杆菌中的高效表达 被引量：18
1
作者 许崇波 朱平 +4 位作者 姚湘燕 王卓 冯书章 马从林 孟锐奇 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期29-32,共4页
对含有产气荚膜梭菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）α毒素基因的重组菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）和ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ（ｐＸＥＴＡ１），通过培养性状观察和小鼠接种试验，证明这２株重组菌... 对含有产气荚膜梭菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）α毒素基因的重组菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）和ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ（ｐＸＥＴＡ１），通过培养性状观察和小鼠接种试验，证明这２株重组菌株均无致病性。随后对这２株重组菌株的表达产物进行了研究，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和薄层凝胶扫描分析，ＩＰＴＧ诱导３～４ｈ后的ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）表达的α毒素占菌体总蛋白３３．２１％，ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ（ｐＸＥＴＡ１）表达的α毒素占菌体总蛋白２７．２５％，其相对分子质量约３７５００；经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析，表达产物可被α毒素抗血清识别。包涵体粗提物的免疫攻毒试验结果表明，以１倍致死量攻击的免疫小鼠可获得１００％（３６／３６）的保护，以２倍致死量攻击的免疫小鼠可获得９４．２８％（３３／３５）的保护，从而说明表达产物具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 Α毒素 基因表达 免疫原性
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产气荚膜梭菌α毒素亚单位基因的表达及表达产物活性分析 被引量：4
2
作者 刘家森 刘怀然 +1 位作者 陈洪岩 李一经 《中国比较医学杂志》 CAS 2003年第6期332-335,共4页
含有产气荚膜梭菌α毒素基因序列的克隆载体pMD18TCα ,经BamHⅠ和HindⅢ内切酶双酶切后 ,将α毒素亚单位基因亚克隆到原核表达载体pET30b中 ,构建表达载体pET30bPα。经酶切和测序鉴定 ,α毒素基因中的90 0bp的片段正确插入到表达载体... 含有产气荚膜梭菌α毒素基因序列的克隆载体pMD18TCα ,经BamHⅠ和HindⅢ内切酶双酶切后 ,将α毒素亚单位基因亚克隆到原核表达载体pET30b中 ,构建表达载体pET30bPα。经酶切和测序鉴定 ,α毒素基因中的90 0bp的片段正确插入到表达载体中。重组菌株BL2 1(DE3)pET30bPα经IPTG诱导的表达产物经SDS PAGE和Western_blot分析 ,表达出大小为 38× 10 3的重组蛋白具有和α毒素阳性血清发生特异性的免疫反应。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 Α毒素 基因表达 克隆载体 免疫原性
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腐败梭菌α毒素基因的克隆表达及其类毒素的免疫原性研究 被引量：8
3
作者 张燕 边艳青 赵宝华 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期67-72,共6页
根据GenBank公布的腐败梭菌α毒素基因序列,设计了一对引物,并以腐败梭菌基因组为模板,经PCR特异性扩增出腐败梭菌菌株HeB01的α毒素基因。序列分析表明,该基因产物大小为1323bp,与GenBank报道的4个腐败梭菌参考菌株α毒素基因序列同源... 根据GenBank公布的腐败梭菌α毒素基因序列,设计了一对引物,并以腐败梭菌基因组为模板,经PCR特异性扩增出腐败梭菌菌株HeB01的α毒素基因。序列分析表明,该基因产物大小为1323bp,与GenBank报道的4个腐败梭菌参考菌株α毒素基因序列同源性高于99·5%。将扩增的α毒素基因定向克隆到原核表达载体pQE30中,得到重组质粒pQE30-α,将重组质粒转化大肠杆菌M15中,得到重组菌株M15(pQE30-α),经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析可见表达的48kD特异条带;Westernblot和ELISA检测实验表明:表达的α毒素与抗天然α毒素抗体发生特异性反应,说明α毒素蛋白具有较好的免疫原性。将表达的α毒素蛋白制成类毒素疫苗,免疫小鼠后,具有一定的保护能力,表明该重组菌株有望作为腐败梭菌基因工程类毒素疫苗的候选生产菌株。 展开更多
关键词 Α毒素 类毒素 免疫原性
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抗A型产气荚膜梭菌α毒素单链抗体的基因克隆及核苷酸序列分析 被引量：8
4
作者 许崇波 赵宝华 +2 位作者 马从林 冯书章 朱平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期246-248,共3页
应用 RT-PCR技术 ,从分泌具有中和活性的抗 A型产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体 ( Mc Ab)的杂交瘤细胞 2 E3中 ,扩增出抗体 VH 和 VL 基因 ,用 linker( Gly4Ser) 3基因 ,将 VH 和 VL 基因连接成 Sc Fv基因 ,并将其克隆至 p GEM-T载体中。... 应用 RT-PCR技术 ,从分泌具有中和活性的抗 A型产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体 ( Mc Ab)的杂交瘤细胞 2 E3中 ,扩增出抗体 VH 和 VL 基因 ,用 linker( Gly4Ser) 3基因 ,将 VH 和 VL 基因连接成 Sc Fv基因 ,并将其克隆至 p GEM-T载体中。经核苷酸序列分析证实 ,VH、VL 基因和 linker基因拼接正确 ,基因全长为 72 6bp。经计算机分析 ,VH 和 VL 基因均为新发现的基因序列 ,符合功能性重排的鼠抗体可变区基因特征。VH 和VL 基因分别属于鼠免疫球蛋白重链 ( B)和轻链κ 展开更多
关键词 Α毒素 基因克隆 序列分析 SCFV 创伤性气性坏疽
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产气荚膜梭菌α毒素研究进展 被引量：5
5
作者 赵宝华 杨虹 顾为望 《河北师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2002年第5期506-512,共7页
对产气荚膜梭菌 α毒素的组成、结构、理化性质、作用机理。
关键词 产气荚膜梭菌 Α毒素 研究进展 基因克隆 生物学特性 致病因子 分子遗传学
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抗A型产气荚膜梭菌α毒素单链抗体基因的表达 被引量：4
6
作者 赵宝华 许崇波 +1 位作者 冯书章 朱平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期367-370,共4页
将 2种抗 A型产气荚膜梭菌α毒素单链抗体 ( Sc Fv)基因 Sc Fv-2 E3和 Sc Fv-1 A8克隆至表达载体p UC1 1 9、p HOG2 1和 p ET2 0 b中 ,构建了重组质粒 p UC2 E3和 p UC1 A8、p HOG2 E3和 p HOG1 A8、p ET2 E3和 p ET1 A8后 ,分别转化至... 将 2种抗 A型产气荚膜梭菌α毒素单链抗体 ( Sc Fv)基因 Sc Fv-2 E3和 Sc Fv-1 A8克隆至表达载体p UC1 1 9、p HOG2 1和 p ET2 0 b中 ,构建了重组质粒 p UC2 E3和 p UC1 A8、p HOG2 E3和 p HOG1 A8、p ET2 E3和 p ET1 A8后 ,分别转化至受体菌 JM1 0 5、JM1 0 9和 BL2 1 ( DE3 )中 ,得到重组菌株 JM1 0 5( p UC2 E3 )和JM1 0 5( p UC1 A8)、JM1 0 9( p HOG2 E3 )和 JM1 0 9( p HOG1 A8)及 BL2 1 ( DE3 ) ( p ET2 E3 )和 BL2 1 ( DE3 )( p ET1 A8)。 ELISA检测表明 ,经 IPTG诱导后所表达的目的蛋白存在于重组菌株 JM1 0 5( p UC2 E3 )和JM1 0 5( p UC1 A8)及 JM1 0 9( p HOG2 E3 )和 JM1 0 9( p HOG1 A8)的菌培养上清中 ,在重组菌株 BL 2 1 ( DE3 )( p ET2 E3 )和 BL2 1 ( DE3 ) ( p ET1 A8)的胞周质中检测到了 Sc Fv的存在。 SDS-PAGE和薄层扫描分析表明 ,重组菌株 BL2 1 ( DE3 ) ( p ET2 E3 )和 BL2 1 ( DE3 ) ( p ET1 A8)的蛋白表达产物分别占菌体可溶性蛋白的 0 .9%和 0 .7%,其大小约为 2 60 0 0 ,且表达的目的蛋白具有中和磷脂酶 C的活性。 展开更多
关键词 A型产气荚膜梭菌 Α毒素 单链抗体 基因表达
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羊快疫发病机制及防治 被引量：5
7
作者 翁鸿宇 林静 柴同杰 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第15期33-35,共3页
羊快疫(Braxy)是由腐败梭菌(Clostridium septicum)引起的一种急性、高度致死性传染病,腐败梭菌α毒素是其主要的致死毒素。因腐败梭菌会引起家畜恶性水肿,故曾被称为恶性水肿杆菌,对人类健康和畜牧业生产造成严重危害。目前,国内外对... 羊快疫(Braxy)是由腐败梭菌(Clostridium septicum)引起的一种急性、高度致死性传染病,腐败梭菌α毒素是其主要的致死毒素。因腐败梭菌会引起家畜恶性水肿,故曾被称为恶性水肿杆菌,对人类健康和畜牧业生产造成严重危害。目前,国内外对于腐败梭菌及其毒素的研究尚有空白,疾病的诊断和防控技术还存在不足。文章从羊快疫的发病机制及其防治措施等方面进行了综述,介绍了目前国内外对于此种疾病的研究进展并进行了展望。 展开更多
关键词 羊快疫 腐败梭菌 Α毒素 免疫 厌氧菌 恶性水肿
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产气荚膜梭菌α毒素作用机制研究进展 被引量：3
8
作者 郭子槊 辛文文 王景林 《军事医学》 CAS 2022年第9期711-714,共4页
毒素是产气荚膜梭菌的主要毒力因子之一,具有磷脂酶C和鞘磷脂酶两种酶活性,能水解宿主细胞膜上的磷脂酰胆碱和鞘磷脂,导致多种人畜疾病。同时,该毒素也是一种潜在的生物战剂,对国家生物安全存在潜在威胁。该文主要对产气荚膜梭菌α毒素... 毒素是产气荚膜梭菌的主要毒力因子之一,具有磷脂酶C和鞘磷脂酶两种酶活性,能水解宿主细胞膜上的磷脂酰胆碱和鞘磷脂,导致多种人畜疾病。同时,该毒素也是一种潜在的生物战剂,对国家生物安全存在潜在威胁。该文主要对产气荚膜梭菌α毒素的生物学结构与性质、细胞毒性作用的信号通路、激活血小板的分子机制以及治疗方面进行综述。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 Α毒素 细胞毒性作用 溶血机制 血小板
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产气荚膜梭菌α毒素基因工程菌表达产物的免疫原性研究 被引量：2
9
作者 许崇波 朱平 +4 位作者 姚湘燕 甘永华 冯书章 马从林 孟锐奇 《畜牧与兽医》 北大核心 1998年第6期248-249,共2页
已构建的能表达产气荚膜梭菌α毒素保护性抗原基因工程菌株Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）经动物试验证实没有毒性。从ＩＰＴＧ诱导后的工程菌中提取包涵体，再辅以氢氧化铝胶制成抗原，免疫小鼠３０ｄ后，用产气荚膜... 已构建的能表达产气荚膜梭菌α毒素保护性抗原基因工程菌株Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）经动物试验证实没有毒性。从ＩＰＴＧ诱导后的工程菌中提取包涵体，再辅以氢氧化铝胶制成抗原，免疫小鼠３０ｄ后，用产气荚膜梭菌强毒株培养上清及培养菌体攻击，结果免疫鼠能抵抗至少２ＬＤ１００的攻击，证明Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）工程菌株表达产物具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 Α毒素 免疫原性
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产气荚膜梭菌α毒素荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
10
作者 杨夷平 李海利 +5 位作者 杨帆 杨康 段进刚 张国新 李斌 马春江 《中国动物检疫》 CAS 2023年第11期95-99,共5页
为利用TaqMan荧光定量PCR技术建立一种快速、敏感、特异的产气荚膜梭菌α毒素检测方法,根据产气荚膜梭菌各型之间共同的生物学特性,以编码产气荚膜梭菌α毒素的基因序列作为靶序列,设计1对引物和探针,分别以A、B、C、D4个型的产气荚膜梭... 为利用TaqMan荧光定量PCR技术建立一种快速、敏感、特异的产气荚膜梭菌α毒素检测方法,根据产气荚膜梭菌各型之间共同的生物学特性,以编码产气荚膜梭菌α毒素的基因序列作为靶序列,设计1对引物和探针,分别以A、B、C、D4个型的产气荚膜梭菌DNA为模板,通过优化引物、探针浓度和扩增条件,建立了TaqMan荧光定量PCR方法,同时对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行了验证。结果显示:当上下游引物浓度和探针浓度均为0.25μmol/L时,Ct值最低;该方法与大肠杆菌、巴氏杆菌、沙门氏菌等细菌均无交叉反应,具有良好的特异性;灵敏度高,对A型产气荚膜梭菌基因组DNA的最低检测限为9.1pg/μL;重复性好,组内及组间试验标准差均小于0.4;对2023年收集的24份样品进行检测,发现本方法的阳性检出率(20.83%)与商品试剂盒一致。综上,本研究建立了一种快速、灵敏、稳定、特异的TaqMan荧光定量PCR方法,可对产气荚膜梭菌α毒素进行快速检测,为防控产气荚膜梭菌病提供了有力的技术支撑。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 Α毒素 TaqMan荧光定量PCR 检测
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表达产气荚膜梭菌α-β融合蛋白基因工程菌株的构建 被引量：2
11
作者 卫广森 许崇波 《中国兽药杂志》 2001年第5期5-9,共5页
用 PCR从含产气荚膜梭菌 α毒素基因的质粒 p XETA1中扩增出 α毒素基因 ,用 Nco I和 Bam HI双酶切该α毒素基因 ,回收 0 .95 kb的α毒素基因片段 ,再用 Nco I和 Bam HI双酶切含产气荚膜梭菌 β毒素基因质粒 p XETB2 ,与上述回收的 α... 用 PCR从含产气荚膜梭菌 α毒素基因的质粒 p XETA1中扩增出 α毒素基因 ,用 Nco I和 Bam HI双酶切该α毒素基因 ,回收 0 .95 kb的α毒素基因片段 ,再用 Nco I和 Bam HI双酶切含产气荚膜梭菌 β毒素基因质粒 p XETB2 ,与上述回收的 α毒素基因片段连接 ,转化至受体菌 BL2 1( DE3)中。经 Nco I、Bam HI、Not I酶切反应鉴定和核苷酸序列分析证实 ,获得了理想重组质粒p XCPAB2 ,该重组质粒含有α-β融合基因。重组菌株 BL 2 1 ( DE3) ( p XCPAB2 )经 IPTG诱导后 ,其表达产物经 ELISA检测和 SDS- PAGE分析 ,结果表明重组菌株可以高效表达α-β融合蛋白 ,该融合蛋白占菌体总蛋白的 2 2 .1 4%。用从 IPTG诱导的工程菌中提取的包涵体或经甲醛灭活的工程菌制成抗原免疫小鼠 ,免疫小鼠至少能抵抗 2 MLD的 C型产气荚膜梭菌的攻击。这表明构建的工程菌株 BL2 1 ( DE3) ( p XCPAB2 ) 展开更多
关键词 气荚膜梭菌 α-β融合蛋白 基因工程 菌株 动物 坏死性肠
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A型产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆及高效表达 被引量：3
12
作者 王景林 王利春 +2 位作者 吴东林 康琳 姜永强 《军事医学科学院院刊》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期28-30,共3页
目的 :实现产气荚膜梭菌α毒素 (Clostridiumperfringensalphatoxin ,CPa)基因的克隆与表达。方法 :用PCR技术从A型产气荚膜梭菌中扩增出CPa基因 ,克隆到原核表达载体pQE30中 ,构建了重组质粒pQE30_CPa ,转化E .coliM15获得了CPa的高效... 目的 :实现产气荚膜梭菌α毒素 (Clostridiumperfringensalphatoxin ,CPa)基因的克隆与表达。方法 :用PCR技术从A型产气荚膜梭菌中扩增出CPa基因 ,克隆到原核表达载体pQE30中 ,构建了重组质粒pQE30_CPa ,转化E .coliM15获得了CPa的高效表达。结果 :序列测定和双酶切表明 ,CPa基因正确插入载体。序列分析发现CPa基因与GenBank中的 4种CPa基因相似率为 76 .7%～ 99.9%。工程菌裂解液经SDS_PAGE分析显示在相对分子质量 4 30 0 0处有一条表达很强的蛋白区带 ,与CPa相对分子质量相符 ,约占菌体总蛋白的 6 2 .88% ,主要以包涵体形式存在。免疫印迹结果表明 ,表达的重组CPa蛋白同抗CPa血清有特异性结合。结论 :为进一步研究CPa重组疫苗和制备CPa的特异性抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 A型产气荚膜梭茵 Α毒素 基因表达 序列分析
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产气荚膜梭菌α毒素的研究进展 被引量：2
13
作者 赵立峰 任家琰 《经济动物学报》 CAS 2004年第4期243-246,共4页
产气荚膜梭菌 (Clostridiumperfringens)的致病作用一般由它所产生的胞外酶或毒素诱导。主要有α -毒素、β -毒素、θ -毒素及其他的一些胞外酶。本文针对产气荚膜梭菌α毒素的组成、结构、理化性质、作用机理及分子遗传等方面的研究... 产气荚膜梭菌 (Clostridiumperfringens)的致病作用一般由它所产生的胞外酶或毒素诱导。主要有α -毒素、β -毒素、θ -毒素及其他的一些胞外酶。本文针对产气荚膜梭菌α毒素的组成、结构、理化性质、作用机理及分子遗传等方面的研究进展作了简要综述。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 Α毒素 胞外酶 分子遗传 致病作用 理化性质 作用机理 研究进展 诱导 综述
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羊梭菌病快速鉴别PCR方法的建立及初步应用 被引量：2
14
作者 李田美 吴正双 +1 位作者 许大伟 姜艳芬 《动物医学进展》 北大核心 2019年第7期20-25,共6页
根据GenBank已公布的产气荚膜梭菌和腐败梭菌的α毒素基因序列,分别设计并合成针对2种α毒素基因的特异性引物,通过扩增条件的优化,建立快速鉴别产气荚膜梭菌和腐败梭菌的双重PCR方法。特异性试验显示,产气荚膜梭菌和腐败梭菌参考菌株... 根据GenBank已公布的产气荚膜梭菌和腐败梭菌的α毒素基因序列,分别设计并合成针对2种α毒素基因的特异性引物,通过扩增条件的优化,建立快速鉴别产气荚膜梭菌和腐败梭菌的双重PCR方法。特异性试验显示,产气荚膜梭菌和腐败梭菌参考菌株均扩增出了相应的预期目的条带,而大肠埃希菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌和链球菌则均未能扩增出相应条带。灵敏度试验结果显示,产气荚膜梭菌和腐败梭菌基因组DNA最低检测量分别为17.95pg/μL和1.261pg/μL。应用该方法对样品进行检测,其中5份为产气荚膜梭菌阳性。成功建立了特异性强、敏感性高的双重PCR方法,可以有效进行产气荚膜梭菌和腐败梭菌的快速鉴别,对羊梭菌病病原快速鉴定及流行病学调查具有重要意义。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 腐败梭菌 Α毒素 鉴别 双重PCR
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产气荚膜梭菌α毒素基因PLC-Asp56定点突变及其特性鉴定 被引量：2
15
作者 陈乾坤 李晓宇 +2 位作者 梅伟恒 陈少坚 许崇波 《广东化工》 CAS 2020年第2期230-232,共3页
本实验通过对A型产气荚膜梭菌α毒素PLC基因第56位氨基酸进行定点突变,将天冬氨酸Asp突变为丙氨酸Ala,构建了含有PLC-Asp56Ala突变基因的表达质粒,测序结果表明,重组质粒pPLC-Asp56Ala已经含有α毒素PLC基因的PLC-Asp56Ala突变基因。经... 本实验通过对A型产气荚膜梭菌α毒素PLC基因第56位氨基酸进行定点突变,将天冬氨酸Asp突变为丙氨酸Ala,构建了含有PLC-Asp56Ala突变基因的表达质粒,测序结果表明,重组质粒pPLC-Asp56Ala已经含有α毒素PLC基因的PLC-Asp56Ala突变基因。经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,PLC-Asp56Ala突变体蛋白含量占菌体总蛋白相对含量的22.48%。二级结构预测结果表明PLC-Asp56Ala突变体蛋白的二级结构第55位和第56位突变位点相对于α毒素由原来的无规则卷曲变成β转角。生物学活性检测表明PLC-Asp56Ala突变体蛋白已经完全丧失该酶活性。本研究结果可为今后对A型产气荚膜梭菌α毒素的致病机制的探究提供基础理论依据。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 Α毒素 定点突变
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A型产气荚膜梭菌α毒素的基因扩增和提纯鉴定 被引量：1
16
作者 于立新 苏佳 +2 位作者 赵晓慧 马学恩 么宏强 《内蒙古农业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2011年第4期34-37,共4页
为了对A型产气荚膜梭菌α毒素快速准确地做出检测,本实验利用厌氧肉肝汤培养A型产气荚膜梭菌,经革兰染色观察以及含铁牛奶培养基观察其生化特性。然后使用饱和度为60﹪的硫酸铵粗提其α毒素蛋白,进行透析纯化并应用SDS-PAGE方法鉴定A型... 为了对A型产气荚膜梭菌α毒素快速准确地做出检测,本实验利用厌氧肉肝汤培养A型产气荚膜梭菌,经革兰染色观察以及含铁牛奶培养基观察其生化特性。然后使用饱和度为60﹪的硫酸铵粗提其α毒素蛋白,进行透析纯化并应用SDS-PAGE方法鉴定A型产气荚膜梭菌的α毒素,鉴定之后将纯化的α毒素给小鼠腹腔注射来检测其活性。结果表明,厌氧肉肝汤培养基变浑浊且产生大量气体,含铁牛奶培养基发生爆烈发酵现象,SDS-PAGE检测结果,α毒素分子量为43.6kDa,小白鼠出现梭菌病的典型临床症状。本实验为α毒素的鉴定及大量快速提取提供了一种参考方法,为进一步开展梭菌毒素的致病机理及制备类毒素疫苗奠定重要的实验基础。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 Α毒素 基因扩增 毒素鉴定
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产气荚膜梭菌α-β融合基因的构建
17
作者 许崇波 赵宝华 +2 位作者 卫广森 蒋玉文 王卓 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期341-343,共3页
用 PCR从含产气荚膜梭菌β毒素基因的质粒 p XETB2中扩增出β毒素基因 ,Nco 和 Bam H 双酶切该 β毒素基因 ,回收 0 .93kb的 β毒素基因片段 ,再用 Nco 和 Bam H 双酶切含产气荚膜梭菌 α毒素基因质粒 p XETA1 ,与上述回收的 β毒素基... 用 PCR从含产气荚膜梭菌β毒素基因的质粒 p XETB2中扩增出β毒素基因 ,Nco 和 Bam H 双酶切该 β毒素基因 ,回收 0 .93kb的 β毒素基因片段 ,再用 Nco 和 Bam H 双酶切含产气荚膜梭菌 α毒素基因质粒 p XETA1 ,与上述回收的 β毒素基因片段连接 ,转化至受体菌 BL2 1 ( DE3)中。经 Nco 、Bam H 、Not 酶切反应鉴定和核苷酸序列分析证实 ,获得的重组质粒 p XCPAB1含有 α-β融合基因。重组菌株 BL2 1( DE3) ( p XCPAB1 )表达产物经 ELISA检测和 SDS-PAGE分析 。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 Α毒素基因 β毒素基因 融合基因 基因克隆 动物 坏死性肠炎
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A型产气荚膜梭菌重组α毒素对小鼠的致病性研究 被引量：1
18
作者 乔艺然 李兰兰 +6 位作者 郑晓星 王莹莹 聂思静 任玉东 李广兴 黄小丹 杨贵君 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期281-287,共7页
为了研究A型产气荚膜梭菌α毒素(PLC)的致病性,采用PCR扩增编码产气荚膜梭菌α毒素去除信号肽的plc基因片段,构建重组质粒pGEX-plc,经IPTG诱导表达获得重组蛋白PLC。对纯化鉴定后的PLC蛋白进行细胞毒性试验,结果显示,感染后第4小时Hela... 为了研究A型产气荚膜梭菌α毒素(PLC)的致病性,采用PCR扩增编码产气荚膜梭菌α毒素去除信号肽的plc基因片段,构建重组质粒pGEX-plc,经IPTG诱导表达获得重组蛋白PLC。对纯化鉴定后的PLC蛋白进行细胞毒性试验,结果显示,感染后第4小时Hela细胞开始出现病变,并随时间延长而逐渐严重,说明α毒素对Hela细胞有毒性作用。进一步建立小鼠病理模型,重组PLC蛋白接种组与阳性细菌感染组的病理变化显示,小鼠发病迅速,腹部膨大,肠道臌气明显;组织学观察结果显示,被感染小鼠内脏器官出现不同程度的病理变化,以小肠各段尤为明显,表现为肠黏膜损伤、绒毛脱落等。上述结果为A型产气荚膜梭菌致病机制的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 气性坏疽 Α毒素 细胞毒性试验 小鼠病理模型
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重组腐败梭菌α毒素的生物活性及其灭活疫苗的免疫效果 被引量：1
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作者 彭国瑞 蒋玉文 +3 位作者 彭小兵 王秀丽 李旭妮 王猛 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1118-1124,共7页
为了研究重组腐败梭菌α毒素的生物活性及其灭活疫苗的免疫效果,采用PCR法扩增腐败梭菌α毒素基因,构建重组表达质粒pET28α-csa,转化E.coli BL21(DE3);对表达产物的细胞毒性、小鼠致死毒力和抗毒素中和试验等生物活性进行鉴定,并将其... 为了研究重组腐败梭菌α毒素的生物活性及其灭活疫苗的免疫效果,采用PCR法扩增腐败梭菌α毒素基因,构建重组表达质粒pET28α-csa,转化E.coli BL21(DE3);对表达产物的细胞毒性、小鼠致死毒力和抗毒素中和试验等生物活性进行鉴定,并将其制成灭活疫苗免疫家兔和靶动物绵羊,通过攻毒素试验和血清中和试验与类毒素疫苗进行比较。结果显示,重组α毒素能够与腐败梭菌抗毒素血清反应,具有细胞毒性,小鼠致死毒力超过300 MLD/mL,其毒性可以被腐败梭菌抗毒素中和。制成灭活疫苗免疫家兔,随着免疫剂量的增加血清中和效价随之提高,0.25 mL/只(含重组α毒素0.11 mg)免疫即可使家兔获得100%保护,免疫效果优于类毒素疫苗;0.50 mL/只(含重组α毒素0.22 mg)免疫绵羊攻毒保护率为75%。结果表明,重组腐败梭菌α毒素具有很好的生物活性,所制成的灭活疫苗可以作为预防羊快疫的候选疫苗。 展开更多
关键词 腐败梭菌 Α毒素 生物活性 家兔 绵羊 羊快疫
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利用groupⅡ intron构建产气荚膜梭菌突变体 被引量：1
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作者 马臣杰 宋孚洋 +3 位作者 高姗 康琳 王玉炯 王景林 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期285-288,共4页
目的通过插入失活α毒素基因获得产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)突变体。方法利用MobilegroupⅡintron的自我剪切作用,对本室保藏的1株野生型C.perfringens的α基因plc插入失活。通过菌落PCR检测,以及观察突变株在哥伦比亚血琼... 目的通过插入失活α毒素基因获得产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)突变体。方法利用MobilegroupⅡintron的自我剪切作用,对本室保藏的1株野生型C.perfringens的α基因plc插入失活。通过菌落PCR检测,以及观察突变株在哥伦比亚血琼脂培养基和脑心浸液培养基(4%卵黄)平板上的形态变化,进行阳性筛选。蛋白质免疫印迹分析α毒素蛋白活性。结果 PCR检测到α毒素突变体的plc基因中,存在Mobile groupⅡintron片段,并且观察到该菌在哥伦比亚鲜血琼脂平板培养基上的α毒素溶血环消失,在脑心浸液培养基(4%卵黄)平板上无白晕。蛋白质免疫印迹分析表明,plc突变体不表达α毒素蛋白。结论成功构建C.perfringensα毒素突变体,为后期探索C.perfringens口服疫苗打下了重要基础。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 Α毒素 细菌毒素类 口服疫苗
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