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质粒DNA提取方法的比较 被引量：5
1
作者 孙晓东 韩立敏 +1 位作者 王转 陈萍 《陕西教育学院学报》 2009年第2期86-88,共3页
以含有原核表达载体pet21a和真核表达载体EGFP的DH5α系列菌株为材料,分别采用碱裂解法和试剂盒提取法提取质粒DNA,通过凝胶电泳分析,对两种质粒提取方法的各自特点进行了比较与分析。认为碱裂解法和试剂盒提取法提取质粒DNA均可进行后... 以含有原核表达载体pet21a和真核表达载体EGFP的DH5α系列菌株为材料,分别采用碱裂解法和试剂盒提取法提取质粒DNA,通过凝胶电泳分析,对两种质粒提取方法的各自特点进行了比较与分析。认为碱裂解法和试剂盒提取法提取质粒DNA均可进行后续试验,但试剂盒提取法具有省时、简洁、高效的优势。同时根据在实验过程中所遇到的问题,说明了在进行质粒DNA提取过程中应当注意的问题。 展开更多
关键词 质粒DNA 提取 碱裂解法 试剂盒法
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碱裂解叶片两步快速制备PCR模板技术研究 被引量：5
2
作者 陈平华 王恒波 +2 位作者 许莉萍 陈由强 陈如凯 《热带作物学报》 CSCD 2010年第3期422-429,共8页
广泛采用提取DNA作为PCR模板的方法主要有CTAB和SDS法2种,但步骤烦琐、耗时长。根据Taq酶储存液和PCR反应缓冲液所含K+离子、Cl-离子和Tween-20等成分,以0.05mol/LKOH为强碱裂解物、2%Tween-20为稳定剂配制碱裂解液,以0.05mol/L三羟甲... 广泛采用提取DNA作为PCR模板的方法主要有CTAB和SDS法2种,但步骤烦琐、耗时长。根据Taq酶储存液和PCR反应缓冲液所含K+离子、Cl-离子和Tween-20等成分,以0.05mol/LKOH为强碱裂解物、2%Tween-20为稳定剂配制碱裂解液,以0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸(Tris-HCl)和2mmol/LEDTA为中和液,经加热裂解和中和两步制备PCR模板。以甘蔗叶片为材料,用新鲜配制含KOH和Tween-20的裂解液,将适量叶片放入一定体积的裂解液中加热裂解,再中和,形成裂解混合物。直接以裂解混合物为模板,甘蔗内源基因为靶基因,在优化KOH裂解浓度、模板体积、加热裂解时间以及添加适量聚合酶稳定剂的情况下,PCR反应稳定,重复性强。以有代表性的单子叶和双子叶植物叶片为材料,经过多种内源基因PCR反应的反复验证,证实了这种方法的广泛适用性。该方法通过两步制备PCR模板,无需DNA提取过程,使用材料少,可以实现活体PCR检测,为遗传分析和分子诊断提供简便、快速和高效的分析方法。 展开更多
关键词 KOH 碱裂解 中和 PCR模板 酶稳定剂
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经典碱裂解法质粒大量提取方法的改良 被引量：5
3
作者 孟宇 李静 +4 位作者 孙智峰 李玉恒 李昌盛 林增 李士泽 《黑龙江八一农垦大学学报》 2012年第2期33-35,共3页
利用滤膜过滤技术对经典碱裂解法进行改良,并将改良后的提取效果与经典碱裂解法和试剂盒法进行比较。结果表明,改良法提取的质粒DNA浓度显著高于经典碱裂解法和试剂盒法,并且质粒纯度与试剂盒法相近。改良方法适用于实验室的应用与推广。
关键词 碱裂解法 质粒DNA 提取与纯化 滤膜过滤
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一种简易的甘蔗叶组织PCR模板制备方法 被引量：3
4
作者 崔学强 张树珍 冯翠莲 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期58-62,共5页
以转基因甘蔗叶片为材料,少量嫩叶经碱并短暂高温处理,再中和,形成裂解混合物。直接以此为模板,转基因甘蔗外源基因bar、KP4、Cry1Ac-2A-gna融合基因及内源基因Shactin基因为靶基因,PCR扩增结果稳定、准确、重复性强,完全可以达到常规C... 以转基因甘蔗叶片为材料,少量嫩叶经碱并短暂高温处理,再中和,形成裂解混合物。直接以此为模板,转基因甘蔗外源基因bar、KP4、Cry1Ac-2A-gna融合基因及内源基因Shactin基因为靶基因,PCR扩增结果稳定、准确、重复性强,完全可以达到常规CTAB法提取的DNA扩增效果。用此方法制备的模板室温下2周之内,4℃、-20℃下一个月之内结果不变。经多种外源基因PCR反应的反复验证,证实了这种方法在转基因甘蔗检测中的广泛适用性。该方法快速制备PCR模板,无需DNA提取过程,具有使用样品量少,成本低、简便、快捷等优点。 展开更多
关键词 甘蔗 碱裂解 中和 PCR模板 多重PCR
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改良碱变性法抽提冷冻山羊肝脏组织线粒体DNA 被引量：3
5
作者 李力 姚绍嫦 +3 位作者 孙群 赵建 张杰 杨志荣 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1331-1334,共4页
通过实验建立了一种简便、快捷地从冷冻山羊肝脏组织中制备高质量线粒体DNA(mtDNA)的方法.以差速离心法分离线粒体,用碱性SDS法裂解线粒体膜,释放线粒体DNA后用酚/氯仿抽提.与其他方法相比较,该方法具有对组织新鲜度要求不高,快速、简... 通过实验建立了一种简便、快捷地从冷冻山羊肝脏组织中制备高质量线粒体DNA(mtDNA)的方法.以差速离心法分离线粒体,用碱性SDS法裂解线粒体膜,释放线粒体DNA后用酚/氯仿抽提.与其他方法相比较,该方法具有对组织新鲜度要求不高,快速、简便、经济、产品产量高以及稳定性好等特点,其得率和纯度均能满足mtDNA多样性分析的要求. 展开更多
关键词 动物 MTDNA 改良碱变性法
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3种方法对临床菌血症样本细菌DNA提取的比较 被引量：5
6
作者 赵晓丽 李晓霞 +3 位作者 刘德华 任宝军 邵剑春 胡大春 《昆明医科大学学报》 CAS 2014年第4期117-120,共4页
目的寻找一种简单、有效的提取临床菌血症样本细菌DNA的方法.方法分别用碱液加热裂解法、溶菌酶法和商品DNA提取液法提取细菌DNA,用临床常见病原菌特异性引物,进行PCR扩增.结果 (1)商品DNA提取液法提取革兰阴性菌DNA,经PCR扩增后得到特... 目的寻找一种简单、有效的提取临床菌血症样本细菌DNA的方法.方法分别用碱液加热裂解法、溶菌酶法和商品DNA提取液法提取细菌DNA,用临床常见病原菌特异性引物,进行PCR扩增.结果 (1)商品DNA提取液法提取革兰阴性菌DNA,经PCR扩增后得到特异性目的片段,但未扩增出革兰阳性菌的特异性目的片段;(2)碱液加热裂解法、溶菌酶法提取革兰阴、阳性菌DNA,经PCR扩增后均得到特异性目的片段,但碱液加热裂解法比溶菌酶法能扩增到更低浓度的细菌DNA目的片段.结论碱液加热裂解法是3种方法中最简单有效的细菌DNA提取方法,适用于临床病原菌基因组DNA提取. 展开更多
关键词 细菌DNA 碱液加热裂解法 溶菌酶法 商品DNA提取法
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