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谷氨酸棒杆菌L-天冬氨酸α-脱羧酶在大肠杆菌中的表达及酶转化生产β-丙氨酸 被引量：10
1
作者 赵连真 张梁 石贵阳 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期2161-2170,共10页
【目的】克隆谷氨酸棒杆菌来源L-天冬氨酸α-脱羧酶基因,实现其在大肠杆菌中的异源表达,并进行酶转化L-天冬氨酸合成β-丙氨酸的研究。【方法】PCR扩增谷氨酸棒杆菌L-天冬氨酸α-脱羧酶基因pand,构建表达载体pET24a(+)-Pand,转化宿主菌... 【目的】克隆谷氨酸棒杆菌来源L-天冬氨酸α-脱羧酶基因,实现其在大肠杆菌中的异源表达,并进行酶转化L-天冬氨酸合成β-丙氨酸的研究。【方法】PCR扩增谷氨酸棒杆菌L-天冬氨酸α-脱羧酶基因pand,构建表达载体pET24a(+)-Pand,转化宿主菌大肠杆菌BL21(DE3),对重组菌进行诱导表达,表达产物经DEAE离子交换层析和G-75分子筛层析纯化后进行酶学性质研究,然后进行酶转化实验,说明底物和产物对酶转化的影响。【结果】重组菌SDS-PAGE分析表明Pand表达量可达菌体总蛋白的50%以上,AccQ·Tag法检测酶活达到94.16 U/mL。该重组酶最适反应温度为55°C,在低于37°C时保持较好的稳定性,最适pH为6.0,在pH 4.0 7.0范围内有较好的稳定性。酶转化实验说明:底物L-天冬氨酸和产物β-丙氨酸对转化反应均有抑制作用;实验建立了较优的酶转化反应方式,在加酶量为每克天冬氨酸3 000 U时,以分批加入固体底物L-天冬氨酸的形式,使100 g/L底物转化率达到97.8%。【结论】重组L-天冬氨酸α-脱羧酶在大肠杆菌中获得高效表达,研究了酶转化生产β-丙氨酸的影响因素,为其工业应用奠定了基础。 展开更多
关键词 L-天冬氨酸α-脱羧酶 Β-丙氨酸 谷氨酸棒杆菌 表达 纯化 转化率
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密度泛函理论方法研究Mn^2+催化丙氨酸反应的机理及催化活性 被引量：1
2
作者 孟祥军 赵红丽 +3 位作者 和芹 王磊 苏月 杨静 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期223-231,共9页
采用密度泛函理论的BP86-D3方法研究了Mn^2+催化丙氨酸转化反应的机理及催化活性.得到15个稳定构型和12个过渡态,最稳定构型的结合自由能为-710.8kJ·mol^-1.Mn^2+可以催化丙氨酸发生质子迁移反应、手性转化反应、裂解失CO反应和裂... 采用密度泛函理论的BP86-D3方法研究了Mn^2+催化丙氨酸转化反应的机理及催化活性.得到15个稳定构型和12个过渡态,最稳定构型的结合自由能为-710.8kJ·mol^-1.Mn^2+可以催化丙氨酸发生质子迁移反应、手性转化反应、裂解失CO反应和裂解失H2O反应;对应的吉布斯自由能垒分别为7.7kJ·mol^-1、78.7kJ·mol^-1、166.4kJ·mol^-1和225.2kJ·mol^-1.丙氨酸质子迁移反应和手性转化反应通道的决速步基元反应相同,自由能垒是119.1kJ·mol^-1,相应反应较易发生.丙氨酸裂解反应通道的最高自由能垒为225.2kJ·mol^-1,反应较难发生. 展开更多
关键词 丙氨酸转化 反应机理 单原子催化 轨道作用 电荷分解 催化活性
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L-天冬氨酸α-脱羧酶异源表达和转化条件的优化
3
作者 任彬 李博 +2 位作者 范超 洪皓 张春枝 《大连工业大学学报》 CAS 北大核心 2022年第1期23-26,共4页
为提高L-天冬氨酸α-脱羧酶粗酶液催化L-天冬氨酸生产β-丙氨酸的效率,研究了诱导剂添加时间、诱导剂浓度、诱导温度和培养时间对重组菌株产酶的影响,并优化了粗酶液的反应温度、pH和底物浓度等转化条件。得到最优诱导条件:在OD_(600)达... 为提高L-天冬氨酸α-脱羧酶粗酶液催化L-天冬氨酸生产β-丙氨酸的效率,研究了诱导剂添加时间、诱导剂浓度、诱导温度和培养时间对重组菌株产酶的影响,并优化了粗酶液的反应温度、pH和底物浓度等转化条件。得到最优诱导条件:在OD_(600)达到0.6左右时加入诱导剂IPTG 0.5 mmol/L、25℃下诱导表达18 h时,酶活力达到251.2 U/mL。粗酶液的最佳转化条件为反应体系10 mL中含1.5 mL粗酶液,底物质量浓度90 g/L,反应温度60℃,pH 7.5,反应3 h后β-丙氨酸产量最大,可达32.58 g/L。 展开更多
关键词 L-天冬氨酸α-脱羧酶 Β-丙氨酸 诱导表达 酶转化
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丙氨酸咪唑钐的三维荧光激发和发射光谱 被引量：10
4
作者 杨一心 赵天成 +3 位作者 白晋涛 张秀成 陈慰宗 李绍雄 《光子学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第9期1165-1168,共4页
测量了新制丙氨酸咪唑钐水溶液的三维荧光激发和发射光谱 ,分析了在不同波长激发光作用下的荧光特征 ,与配体咪唑、α 丙氨酸及氯化钐的荧光谱进行了比较 ,讨论了模型化合物上转换荧光中的双光子和多光子加合现象并发现在 1 0 - 2 - 1 0... 测量了新制丙氨酸咪唑钐水溶液的三维荧光激发和发射光谱 ,分析了在不同波长激发光作用下的荧光特征 ,与配体咪唑、α 丙氨酸及氯化钐的荧光谱进行了比较 ,讨论了模型化合物上转换荧光中的双光子和多光子加合现象并发现在 1 0 - 2 - 1 0 - 4 展开更多
关键词 丙氨酸咪唑钐 三维荧光激发 发射光谱 升频转换荧光 发光性能 稀土有机络合物
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酶法拆分(±)-N-(2,6-二甲苯基)-丙氨酸甲酯 被引量：9
5
作者 黄丽琴 陈道文 杨红 《有机化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1575-1579,共5页
用脂肪酶Candidarugosalipase(CRL)拆分(±)-N-(2,6-二甲苯基)-丙氨酸甲酯,并进一步优化反应条件.结果表明,在加入1mmolN-(2,6-二甲苯基)-丙氨酸甲酯、100mL的0.2mol/L磷酸缓冲液中,CRL拆分该底物的最适反应条件为:pH6.4,CRL脂酶250... 用脂肪酶Candidarugosalipase(CRL)拆分(±)-N-(2,6-二甲苯基)-丙氨酸甲酯,并进一步优化反应条件.结果表明,在加入1mmolN-(2,6-二甲苯基)-丙氨酸甲酯、100mL的0.2mol/L磷酸缓冲液中,CRL拆分该底物的最适反应条件为:pH6.4,CRL脂酶250mg,聚乙二醇(PEG)2g,转速160r?min-1,温度35℃.其中酶量、温度对转化率影响较大.反应后分离得R-(+)-N-(2,6-二甲苯基)-丙氨酸甲酯.它和酰氯反应可制备一系列旋光性N-酰基丙氨酸类杀菌剂. 展开更多
关键词 N-(2 6-二甲苯基)-丙氨酸甲酯 CANDIDA RUGOSA lipases 拆分 转化率 反应速度
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(±)-N-(2,6-二甲苯基)-丙氨酸甲酯的脂肪酶酶促水解拆分方法 被引量：5
6
作者 黄丽琴 杨红 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期135-139,共5页
酶法拆分（±）-N-（2,6-二甲苯基）-丙氨酸甲酯,其反应体系为：在含1 mmol（±）-N-（2,6-二甲苯基）-丙氨酸甲酯的100 mL 0.2 mol.L-1磷酸缓冲液（PBS）中,添加2 g聚乙二醇（PEG-6000）,并用皱落假丝酵母脂肪酶（Candida rugo... 酶法拆分（±）-N-（2,6-二甲苯基）-丙氨酸甲酯,其反应体系为：在含1 mmol（±）-N-（2,6-二甲苯基）-丙氨酸甲酯的100 mL 0.2 mol.L-1磷酸缓冲液（PBS）中,添加2 g聚乙二醇（PEG-6000）,并用皱落假丝酵母脂肪酶（Candida rugosalipases,CRL）拆分,反应后分离得到R-（＋）-N-（2,6-二甲苯基）-丙氨酸甲酯。进一步采用高效液相色谱检测酶促反应的转化率,采用250 mm×4.6 mm,5μHypersil（ODS色谱柱,以甲醇与水混合液（体积比为80∶20）为流动相,230 nm为检测波长,外标法峰面积定量。（±）-N-（2,6-二甲苯基）-丙氨酸和其甲酯的回收率在91.5%-96.1%之间。 展开更多
关键词 (±)-N-(2 6-二甲苯基)-丙氨酸甲酯 皱落假丝酵母脂肪酶 拆分 转化率 HPLC
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