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沙田柚花柱S-糖蛋白的纯化和N-端序列测定
被引量：
19
1
作者
杨继华
饶桂荣
薛妙男
《广西师范大学学报（自然科学版）》
CAS
2001年第1期72-79,共8页
以人工自花授粉 3 d后的沙田柚 (Citrusgrandisvar.Shatinyu Hort.)花柱为材料 ,切取 1 /2部位处花柱组织 ,匀浆后 ,进行抽提和硫酸铵盐析 ,得到 3 5%级分的蛋白质粗提液 ,此液经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 ,显示出 9条蛋白质带 ;经 Con A-...
以人工自花授粉 3 d后的沙田柚 (Citrusgrandisvar.Shatinyu Hort.)花柱为材料 ,切取 1 /2部位处花柱组织 ,匀浆后 ,进行抽提和硫酸铵盐析 ,得到 3 5%级分的蛋白质粗提液 ,此液经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 ,显示出 9条蛋白质带 ;经 Con A-Sepharose 4 B亲和柱层析 ,特异峰 (S#)仅显示 1条蛋白质带 ,恰好是 3 5%级分中近正极端的 2种蛋白质中的一种最优势蛋白质 ;部分生化性质测定结果表明 ,该蛋白质为碱性糖蛋白 ,糖含量为 9.2 % ,由 2个亚基组成 ,相对分子质量分别为 3 8.0 ku,3 2 .0 ku,等电点分别约为 7.5,7.2 ;生物活性测定结果表明 ,该蛋白质能抑制离体 (in vitro)萌发自花花粉花粉管的生长 ;氨基酸序列分析表明 ,3 2 .0 ku组分 N-端 1 5个氨基酸序列与矮牵牛 ,花烟草等的
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关键词
沙田柚
花柱S-糖蛋白
亲和层析
N-端氨基酸序列
纯化
序列分析
生物活性
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职称材料
苦瓜核糖体失活蛋白的纯化及其诱导HL-60细胞凋亡的研究
被引量：
11
2
作者
郎海滨
糜漫天
+3 位作者
程天民
张乾勇
杨志祥
彭家和
《营养学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第2期139-143,共5页
目的: 探讨运用假配基亲和层析和凝胶过滤层析相结合的手段纯化苦瓜核糖体失活蛋白(RIP)的可行性,同时观察其抑制HL-60细胞增殖并诱导其发生凋亡的生物学活性。方法: 利用假配基亲和层析法、凝胶过滤层析法提取纯化苦瓜RIP;通过绘制生...
目的: 探讨运用假配基亲和层析和凝胶过滤层析相结合的手段纯化苦瓜核糖体失活蛋白(RIP)的可行性,同时观察其抑制HL-60细胞增殖并诱导其发生凋亡的生物学活性。方法: 利用假配基亲和层析法、凝胶过滤层析法提取纯化苦瓜RIP;通过绘制生长曲线和MTT检测观察苦瓜RIP抑制HL-60细胞增殖的活性,运用流式细胞仪检测细胞周期相分布及细胞凋亡率。结果: 运用硫酸铵分级沉淀、Blue Sepharose CL-6B假配基亲和层析、Sephadex-G75凝胶层析等方法提取、纯化得到了高纯度的苦瓜RIP,并且能够获得较高的得率;一定作用剂量的苦瓜RIP不仅能够抑制HL-60细胞的增殖活性,还可以诱导其发生凋亡。结论: 运用假配基亲和层析和凝胶过滤层析相结合的手段提取、纯化苦瓜RIP是可行的;苦瓜RIP可能是通过诱导细胞发生凋亡来发挥其抗肿瘤活性。
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关键词
苦瓜
糖体失活蛋白
纯化
HL-60细胞
细胞凋亡
凝胶层析
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职称材料
LPTS抗体的制备和活性检测
被引量：
3
3
作者
李义良
宋海
+3 位作者
赵静
张红锋
李载平
赵慕钧
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
2004年第3期44-47,共4页
LPTS是利用定位候选克隆策略 ,得到的一个新的肝相关候选肿瘤抑制基因 (anovelliver relatedputativetumorsuppressor) ,为了进一步研究其结构与功能 ,利用DNA重组技术 ,将LPTS的cDNA克隆到融合表达载体pET 2 4a中 ,在E .coli中表达 ,以...
LPTS是利用定位候选克隆策略 ,得到的一个新的肝相关候选肿瘤抑制基因 (anovelliver relatedputativetumorsuppressor) ,为了进一步研究其结构与功能 ,利用DNA重组技术 ,将LPTS的cDNA克隆到融合表达载体pET 2 4a中 ,在E .coli中表达 ,以Ni+柱亲和层析 ,获得纯化的 6×His LPTS融合蛋白。以此为抗原免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体 ,ELISA法检测其滴度达 2 0 0 0 0以上 ,经亲和层析纯化 ,Western印迹结果表明 ,该纯化抗体可与真核表达的HA LPTS蛋白和内源性的LPTS蛋白特异性结合 ;免疫荧光分析显示SMMC 772 1细胞内源性表达的LPTS蛋白呈点状分布于细胞核内。以上结果表明获得了效价高 ,活性强的针对LPTS蛋白的多克隆抗体 。
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关键词
LPTS
抗体
活性
亲和层析
免疫荧光
特异性
肝癌
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职称材料
题名
沙田柚花柱S-糖蛋白的纯化和N-端序列测定
被引量：
19
1
作者
杨继华
饶桂荣
薛妙男
机构
广西师范大学生物学系
出处
《广西师范大学学报（自然科学版）》
CAS
2001年第1期72-79,共8页
基金
国家自然科学基金资助项目! (3 9760 0 0 7)
文摘
以人工自花授粉 3 d后的沙田柚 (Citrusgrandisvar.Shatinyu Hort.)花柱为材料 ,切取 1 /2部位处花柱组织 ,匀浆后 ,进行抽提和硫酸铵盐析 ,得到 3 5%级分的蛋白质粗提液 ,此液经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 ,显示出 9条蛋白质带 ;经 Con A-Sepharose 4 B亲和柱层析 ,特异峰 (S#)仅显示 1条蛋白质带 ,恰好是 3 5%级分中近正极端的 2种蛋白质中的一种最优势蛋白质 ;部分生化性质测定结果表明 ,该蛋白质为碱性糖蛋白 ,糖含量为 9.2 % ,由 2个亚基组成 ,相对分子质量分别为 3 8.0 ku,3 2 .0 ku,等电点分别约为 7.5,7.2 ;生物活性测定结果表明 ,该蛋白质能抑制离体 (in vitro)萌发自花花粉花粉管的生长 ;氨基酸序列分析表明 ,3 2 .0 ku组分 N-端 1 5个氨基酸序列与矮牵牛 ,花烟草等的
关键词
沙田柚
花柱S-糖蛋白
亲和层析
N-端氨基酸序列
纯化
序列分析
生物活性
Keywords
Citrus
grandis
var.shatinyu
Hort.
style
S-glycoprotein
affinitive
chromatography
amino-terminal
sequence
分类号
S666.301 [农业科学—果树学]
Q946.132 [农业科学—园艺学]
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职称材料
题名
苦瓜核糖体失活蛋白的纯化及其诱导HL-60细胞凋亡的研究
被引量：
11
2
作者
郎海滨
糜漫天
程天民
张乾勇
杨志祥
彭家和
机构
第三军医大学营养与食品卫生学教研室
第三军医大学生物化学教研室
出处
《营养学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第2期139-143,共5页
基金
重庆市院士基金资助(No.5687)
文摘
目的: 探讨运用假配基亲和层析和凝胶过滤层析相结合的手段纯化苦瓜核糖体失活蛋白(RIP)的可行性,同时观察其抑制HL-60细胞增殖并诱导其发生凋亡的生物学活性。方法: 利用假配基亲和层析法、凝胶过滤层析法提取纯化苦瓜RIP;通过绘制生长曲线和MTT检测观察苦瓜RIP抑制HL-60细胞增殖的活性,运用流式细胞仪检测细胞周期相分布及细胞凋亡率。结果: 运用硫酸铵分级沉淀、Blue Sepharose CL-6B假配基亲和层析、Sephadex-G75凝胶层析等方法提取、纯化得到了高纯度的苦瓜RIP,并且能够获得较高的得率;一定作用剂量的苦瓜RIP不仅能够抑制HL-60细胞的增殖活性,还可以诱导其发生凋亡。结论: 运用假配基亲和层析和凝胶过滤层析相结合的手段提取、纯化苦瓜RIP是可行的;苦瓜RIP可能是通过诱导细胞发生凋亡来发挥其抗肿瘤活性。
关键词
苦瓜
糖体失活蛋白
纯化
HL-60细胞
细胞凋亡
凝胶层析
Keywords
RIP(ribosomal
inactivating
protein)
psuedo-ligand
affinitive
chromatography
gel
chromatography
bitter
gourd
apoptosis
分类号
Q51 [生物学—生物化学]
Q291
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职称材料
题名
LPTS抗体的制备和活性检测
被引量：
3
3
作者
李义良
宋海
赵静
张红锋
李载平
赵慕钧
机构
中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所
华东师范大学生命科学学院
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
2004年第3期44-47,共4页
基金
国家"8 63"计划资助项目 (2 0 0 2BA711A0 2 )
文摘
LPTS是利用定位候选克隆策略 ,得到的一个新的肝相关候选肿瘤抑制基因 (anovelliver relatedputativetumorsuppressor) ,为了进一步研究其结构与功能 ,利用DNA重组技术 ,将LPTS的cDNA克隆到融合表达载体pET 2 4a中 ,在E .coli中表达 ,以Ni+柱亲和层析 ,获得纯化的 6×His LPTS融合蛋白。以此为抗原免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体 ,ELISA法检测其滴度达 2 0 0 0 0以上 ,经亲和层析纯化 ,Western印迹结果表明 ,该纯化抗体可与真核表达的HA LPTS蛋白和内源性的LPTS蛋白特异性结合 ;免疫荧光分析显示SMMC 772 1细胞内源性表达的LPTS蛋白呈点状分布于细胞核内。以上结果表明获得了效价高 ,活性强的针对LPTS蛋白的多克隆抗体 。
关键词
LPTS
抗体
活性
亲和层析
免疫荧光
特异性
肝癌
Keywords
LPTS
Polyclonal
antibodies
affinit
e
chromatography
Specificity
immunofluorescence
分类号
R735.7 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
沙田柚花柱S-糖蛋白的纯化和N-端序列测定
杨继华
饶桂荣
薛妙男
《广西师范大学学报（自然科学版）》
CAS
2001
19
下载PDF
职称材料
2
苦瓜核糖体失活蛋白的纯化及其诱导HL-60细胞凋亡的研究
郎海滨
糜漫天
程天民
张乾勇
杨志祥
彭家和
《营养学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004
11
下载PDF
职称材料
3
LPTS抗体的制备和活性检测
李义良
宋海
赵静
张红锋
李载平
赵慕钧
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
2004
3
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
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