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题名LR重组法构建重组腺病毒rAd5-Vpr
被引量：6
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作者
冯学泉
徐军
王金环
徐新女
王淑杰
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机构
天津医科大学一中心临床学院神经外科
南开大学医学院
卫生部危重病急救医学重点实验室
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出处
《天津医药》
CAS
北大核心
2008年第11期840-842,共3页
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基金
国家自然科学基金资助项目(项目编号:30672158)
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文摘
目的:构建携带HIV-1Vpr基因的重组腺病毒。方法:采用限制性内切酶消化和T4DNA连接酶连接的方法,将Vpr基因克隆至腺病毒穿梭质粒pTrack-C上,然后通过重组穿梭质粒pTrack-C-Vpr和腺病毒骨架质粒pAdeno体外LR位点特异性重组的方法,将Vpr基因转移至腺病毒骨架质粒pAdeno上,最后重组骨架质粒pAdeno-Vpr鉴定正确后经PacI酶切,转染HEK293细胞,包装成重组腺病毒rAd5-Vpr。同时在HEK293细胞中进行病毒扩增,利用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,用微量全细胞病变法检测病毒滴度。结果:PCR鉴定重组腺病毒rAd5-Vpr构建成功;扩增后检测病毒滴度约为5×108PFU/mL。结论:应用LR重组法能成功构建携带HIV-1 Vpr基因的重组腺病毒,扩增后滴度能满足实验需要,为进一步相关研究的开展奠定了基础。
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关键词
腺病毒科
质粒
聚合酶链反应
hiv
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Keywords
adenovirus plasmids polymerase chain reaction hiv
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分类号
R734.2
[医药卫生—肿瘤]
R318.08
[医药卫生—临床医学]
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