期刊文献+
共找到19篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
Analysis of severe human adenovirus infection outbreak in Guangdong Province,southern China in 2019 被引量:7
1
作者 Wenkuan Liu Shuyan Qiu +9 位作者 Li Zhang Hongkai Wu Xingui Tian Xiao Li Duo Xu Jing Dai Shujun Gu Qian Liu Dehui Chen Rong Zhou 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2022年第3期331-340,共10页
During 2018–2019,a severe human adenovirus(HAdV)infection outbreak occurred in southern China.Here,we screened 18 respiratory pathogens in 1704 children(≤14 years old)hospitalized with acute respiratory illness in G... During 2018–2019,a severe human adenovirus(HAdV)infection outbreak occurred in southern China.Here,we screened 18 respiratory pathogens in 1704 children(≤14 years old)hospitalized with acute respiratory illness in Guangzhou,China,in 2019.In total,151 patients had positive HAdV test results;34.4%(52/151)of them exhibited severe illness.HAdV infection occurred throughout the year,with a peak in summer.The median patient age was 3.0(interquartile range:1.1–5.0)years.Patients with severe HAdV infection exhibited increases in12 clinical indexes(P≤0.019)and decreases in four indexes(P≤0.007),compared with patients exhibiting nonsevere infection.No significant differences were found in age or sex distribution according to HAdV infection severity(P>0.05);however,the distributions of comorbid disease and HAdV co-infection differed according to HAdV infection severity(P<0.05).The main epidemic types were HAdV-3(47.0%,71/151)and HAdV-7(46.4%,70/151).However,the severe illness rate was significantly higher in patients with HAdV-7(51.4%)than in patients with HAdV-3(19.7%)and other types of HAdV(20%)(P<0.001).Sequencing analysis of genomes/capsid genes of 13 HAdV-7 isolates revealed high similarity to previous Chinese isolates.A representative HAdV-7isolate exhibited a similar proliferation curve to the curve described for the epidemic HAdV-3 strain Guangzhou01(accession no.DQ099432)(P>0.05);the HAdV-7 isolate exhibited stronger virulence and infectivity,compared with HAdV-3(P<0.001).Overall,comorbid disease,HAdV co-infection,and high virulence and infectivity of HAdV-7 were critical risk factors for severe HAdV infection;these data can facilitate treatment,control,and prevention of HAdV infection. 展开更多
关键词 Human adenovirus(hadv) Human adenovirus type 7(hadv-7) Severe illness EPIDEMIOLOGY Acute respiratory illness Virulence and infectivity Risk factor
原文传递
浙江省2019年儿童腺病毒肺炎流行病学特征分析 被引量:4
2
作者 叶青 许承鲜 +2 位作者 张莹莹 韩秀翠 毛建华 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期90-97,共8页
为了解浙江地区腺病毒肺炎的流行病学和病原学特征,本研究统计分析了2019年1月至2019年12月浙江大学医学院附属儿童医院腺病毒肺炎患儿的基本临床资料;并前瞻性的通过聚合酶链式反应(PCR)随机对部分的腺病毒阳性的肺炎患儿咽拭子进行基... 为了解浙江地区腺病毒肺炎的流行病学和病原学特征,本研究统计分析了2019年1月至2019年12月浙江大学医学院附属儿童医院腺病毒肺炎患儿的基本临床资料;并前瞻性的通过聚合酶链式反应(PCR)随机对部分的腺病毒阳性的肺炎患儿咽拭子进行基因扩增、测序和分型鉴定;进而构建系统发育树分析其核苷酸序列进化情况。本研究共检测咽拭子标本19650份,其中腺病毒阳性标本有4032份,腺病毒检出率为20.5%;春季和夏季腺病毒肺炎的患病率相对较高,患儿年龄主要在1~7岁。本研究所检测的99株腺病毒阳性标本经与GenBank数据库比对均为HAdV-3,通过Hexon基因全长系统进化分析得出,所检出的HAdV-3腺病毒均为Clade2进化分支。2019年浙江地区存在儿童HAdV-3肺炎的暴发流行,该病毒株未发生大的变异,均为Clade2进化分支。1~7岁的儿童为主要的易感人群。 展开更多
关键词 腺病毒(hadv) 腺病毒肺炎 流行特征 病原学特征
原文传递
Seroprevalence of Neutralizing Antibodies against Six Human Adenovirus Types Indicates the Low Level of Herd Immunity in Young Children from Guangzhou, China 被引量:6
3
作者 Xingui Tian Ye Fan +8 位作者 Changbing Wang Zhenwei Liu Wenkuan Liu Yun Xu Chuncong Mo Aiping You Xiao Li Xia Rong Rong Zhou 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2021年第3期373-381,共9页
Human adenoviruses(HAdVs) commonly cause many diseases such as respiratory diseases, gastroenteritis, cystitis worldwide. HAdV-3,-7,-4 and emergent HAdV-55 and HAdV-14 are the most important types causing severe respi... Human adenoviruses(HAdVs) commonly cause many diseases such as respiratory diseases, gastroenteritis, cystitis worldwide. HAdV-3,-7,-4 and emergent HAdV-55 and HAdV-14 are the most important types causing severe respiratory diseases. There is no effective drug available for clinical treatment, and no vaccine available for the general population.Therefore, it is important to investigate the seroprevalence against HAdV for developing novel vaccines and vectors. In this study, we investigated the seroprevalence and titer levels of neutralizing antibodies(NAb) against HAdV-3,-4,-7,-14,-55,and-11 in total 278 healthy populations between 0 months and 49 years of age(228 children and 50 adults) from Guangzhou. In children under the age of 18 years, the seropositive rates were significantly increased against HAdV-3 at12.07%, 33.96%, and 64.29% and against HAdV-7 at 0%, 18.87%, and 19.05% in age groups of 1–2, 3–5, and 6–17 years,respectively. The seroprevalence was very low(0% - 8.1%) for all other four types. In adults aged between 18 and49 years, HAdV-3,-4, and-7(> 50.00%) were the most common types, followed by HAdV-14(38.00%),-55(34.00%),and-11(24.00%). Adults tended to have high NAb titers against HAdV-4 and-55. HAdV-55-seropositive donors tended to be HAdV-11-and HAdV-14-seropositive. These results indicated the low level of herd immunity against all six HAdV types in young children, and HAdV-14,-55,-11 in adults from Guangzhou City. Our findings demonstrate the importance of monitoring HAdV types and developing vaccines against HAdV for children and adults. 展开更多
关键词 Human adenovirus(hadv) SEROPREVALENCE Neutralizing antibodies(NAb) VACCINATION Vector Acute respiratory disease
原文传递
Application of Human Adenovirus Genotyping by Phylogenetic Analysis in an Outbreak to Identify Nosocomial Infection 被引量:4
4
作者 Chuanyu Yang Chunmei Zhu +11 位作者 Yuan Qian Jie Deng Baoyuan Zhang Runan Zhu Fang Wang Yu Sun Dongmei Chen Qi Guo Yutong Zhou Lei Yu Ling Cao Linqing Zhao 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2021年第3期393-401,共9页
Nosocomial infections are common in pediatric patients and can be fatal in infants and immunocompromised patients. In September 2018, a high positive rate of human adenovirus HAdV was occurred among hospitalized child... Nosocomial infections are common in pediatric patients and can be fatal in infants and immunocompromised patients. In September 2018, a high positive rate of human adenovirus HAdV was occurred among hospitalized children in the Children's Hospital Affiliated to the Capital Institute of Paediatrics in Beijing. To investigate whether this outbreak of HAdV was related to nosocomial infections or the result of community infections, we collected respiratory specimens from patients with acute respiratory infections in a respiratory ward during June to December 2018, and screened for respiratory viruses. Among 1,840 cases included, 95(5.2%, 95/1840) were positive for HAdV and 81 were genotyped based on phylogenetic analysis, including seven as HAdV-1(8.6%), 30 HAdV-3(37.0%), two HAdV-6(2.5%), and 42 HAdV-7(51.9%). More HAdV-positive samples were collected in August(4.7%, 12/255), September(15.0%, 41/274) and October(6.9%, 17/247), with a peak in September 2018. By combining the results of HAdV phylogenetic analysis with clinical data of patients, there were 77 cases(4.2%, 77/1840;81.1%, 77/95) excluded from nosocomial infections, eight cases representing possible infections transmitted by visitors or attending parents, three cases without sequences that might have been due to infection transmitted by roommates positive for HAdV, one case of a roommate without an HAdV sequence, and six cases that shared highly homologous sequences with those of their roommates, for which nosocomial infections might be considered. In conclusion, genotyping of HAdVs based on phylogenetic analysis combined with clinical information provides a powerful method to distinguish nosocomial infections from community acquired infection, especially when tracing the origins of nosocomial infections. 展开更多
关键词 Acute respiratory tract infection Human adenovirus(hadv) Phylogenetic analysis Nosocomial infection
原文传递
致急性呼吸道感染人腺病毒的体外感染特性初步比较 被引量:13
5
作者 陈诗颖 樊晔 +2 位作者 张玲 田新贵 周荣 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期741-747,共7页
致急性呼吸道感染人腺病毒(Human adenoviruses,HAdV)的型别特异性体外感染可能与细胞因子诱导的差异有关,并推测型别特异性体外感染可能与肺细胞中型别特异性细胞因子的诱导有关。为了比较致急性呼吸道感染人腺病毒3型、5型、7型和55... 致急性呼吸道感染人腺病毒(Human adenoviruses,HAdV)的型别特异性体外感染可能与细胞因子诱导的差异有关,并推测型别特异性体外感染可能与肺细胞中型别特异性细胞因子的诱导有关。为了比较致急性呼吸道感染人腺病毒3型、5型、7型和55型的体外感染特性,临床分离多株人腺病毒3型、7型和55型接种人肺腺癌细胞(A549细胞)或人胚肺成纤维细胞(MRC-5细胞),比较其感染滴度;将人腺病毒3型、5型、7型和55型毒株接种MRC-5细胞和A549细胞进行空斑试验,比较其空斑形成以及大小、形态;接种感染MRC-5细胞,分别于感染后10h和26h收集细胞培养上清,用人炎症细胞因子抗体芯片同步检测10个主要炎症相关细胞因子包括IL-1α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-13、MCP-1、IFN-γ以及TNF-α的表达水平并进行分析。结果显示,与MRC-5细胞相比,A549细胞对这几种人腺病毒更加敏感;人腺病毒55型毒株与其它型别相比产毒量较高。人腺病毒在MRC-5细胞上难以形成空斑,而用A549细胞进行的空斑试验显示人腺病毒5型和55型毒株有较高的空斑形成单位,并且形成的空斑为规则的圆形且边缘清晰,空斑直径较大;而人腺病毒7型和3型毒株感染滴度较低,人腺病毒7型形成的空斑大小不均匀,形状不规则,人腺病毒3型形成的空斑直径很小,呈点状。炎症细胞因子检测结果显示,与正常对照组相比,野生型人腺病毒55型表达差异的炎症细胞因子是IL-1α、IL-1β和TNF-α;改造的人腺病毒3型感染MRC-5细胞后,两个时间点的各炎症细胞因子基本低表达。与正常对照组相比,人腺病毒感染MRC-5细胞后表达有差异的炎症细胞因子主要为IL-6和IL-8。 展开更多
关键词 人腺病毒(hadv) 病毒培养 人胚肺成纤维细胞(MRC-5细胞) 抗体芯片 炎症细胞因子
原文传递
人腺病毒流行病学研究进展 被引量:13
6
作者 杨传宇 赵林清 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期732-739,共8页
人腺病毒(Human adenovirus,HAdV)是引起儿童急性呼吸道感染(ARTIs)的主要原因之一,可引起重症肺炎的暴发流行,迄今为止尚无安全有效的防治手段。HAdV已有52个血清型,被分为7组,即HAdV A-G。有研究提示不同的型别导致的疾病严重程度不同... 人腺病毒(Human adenovirus,HAdV)是引起儿童急性呼吸道感染(ARTIs)的主要原因之一,可引起重症肺炎的暴发流行,迄今为止尚无安全有效的防治手段。HAdV已有52个血清型,被分为7组,即HAdV A-G。有研究提示不同的型别导致的疾病严重程度不同,不同时间和地区的优势型别也有所差异。近年来,不断有新的HAdV型别被发现,已报道的共有103个型别。HAdV不断地以重组等方式进化,导致了组织嗜性和中和特性的改变,从而产生高致病性、高传染性的新型毒株,对疾病防控提出了新的挑战。本文以已有研究结果为基础,综合对HAdV的流行病学特征进行综述,为HAdV的疫苗研制和疾病防控提供参考依据。 展开更多
关键词 人腺病毒(hadv) 呼吸道感染 流行病学 血清型 基因型
原文传递
进化树指导的腺病毒六邻体家族蛋白的快速建模 被引量:5
7
作者 袁晓辉 王迎晨 +8 位作者 曲章义 任家毅 王靖飞 郭莹莹 王雅贤 华东 吴晓敏 杨志伟 高虹 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1838-1844,共7页
为实现对人腺病毒六邻体家族蛋白进行快速准确的结构建模,发展了一种新的基于进化树的预测蛋白质家族中一系列分子三维空间结构的快速建模方法.首先利用邻接法对7株D亚属人腺病毒的六邻体序列构建了基于距离的进化树,并根据进化树所提... 为实现对人腺病毒六邻体家族蛋白进行快速准确的结构建模,发展了一种新的基于进化树的预测蛋白质家族中一系列分子三维空间结构的快速建模方法.首先利用邻接法对7株D亚属人腺病毒的六邻体序列构建了基于距离的进化树,并根据进化树所提供的信息确定最佳六邻体家族蛋白渐进式建模路径,然后利用Modeler与Charmm程序实现六邻体家族蛋白的快速建模.新的建模方法与传统方法相比,需要的计算量大大减少,经过结构评估以及与传统方法建模所得到的结构进行比较,证实基于进化树的快速建模结果是可靠的.人腺病毒六邻体家族蛋白的快速建模对于实现快速高通量的表位预测及开发多价人腺病毒疫苗与腺病毒分型诊断试剂都具有重大的意义. 展开更多
关键词 同源建模 进化树 人腺病毒 六邻体家庭蛋白
下载PDF
稳定同位素标记氨基酸细胞培养联合质谱绝对定量技术在5、7、55型腺病毒鉴定中的应用
8
作者 朱文清 李恒 +1 位作者 张妍 徐忠伟 《化学世界》 CAS 2023年第6期445-452,共8页
利用稳定同位素标记肽段的质谱绝对定量(AQUA)技术,实现了对5、7和55型人腺病毒的准确鉴定。采用细胞培养条件下稳定同位素代谢标记(SILAC)技术培养细胞至大肠杆菌生长至对数生长期,1 mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)低温诱导蛋... 利用稳定同位素标记肽段的质谱绝对定量(AQUA)技术,实现了对5、7和55型人腺病毒的准确鉴定。采用细胞培养条件下稳定同位素代谢标记(SILAC)技术培养细胞至大肠杆菌生长至对数生长期,1 mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)低温诱导蛋白表达,提取并利用谷胱甘肽S转移酶(GST)纯化富集相应标记的腺病毒六邻体蛋白。通过胶消化分别消化三种不同标记策略(非标记、中度标记和重度标记)的纯化蛋白,消化肽段等量混合脱盐后经纳流液相色谱-串联质谱(Nano HPLC-MS/MS)进行定量蛋白分析。通过SILAC实现大肠杆菌的完整代谢标记,诱导表达腺病毒六邻体蛋白,通过AQUA技术实现对非标记、中度标记、重度标记六邻体蛋白标志性肽段鉴定。成功实现SILAC三种不同标记策略条件下大肠杆菌中5、7、55型人腺病毒六邻体蛋白的完整标记,为5、7、55型人腺病毒感染的快速分型检测提供了新的鉴定策略。 展开更多
关键词 人腺病毒 质谱绝对定量技术 稳定同位素标记氨基酸细胞培养技术 病原体检测
下载PDF
乳酸脱氢酶基因调控对HEK-293细胞代谢和腺病毒生产的影响
9
作者 缪俊青 易小萍 +1 位作者 李祥超 庄英萍 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期3863-3875,共13页
减少乳酸积累一直是哺乳动物细胞生物技术产业的一个目标。体外培养动物细胞时,乳酸积累主要是2种代谢途径作用的综合结果:一方面,葡萄糖在乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)的作用下生成乳酸;另一方面,乳酸可通过乳酸脱氢酶B(... 减少乳酸积累一直是哺乳动物细胞生物技术产业的一个目标。体外培养动物细胞时,乳酸积累主要是2种代谢途径作用的综合结果:一方面,葡萄糖在乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)的作用下生成乳酸;另一方面,乳酸可通过乳酸脱氢酶B(LDHB)或乳酸脱氢酶C(LDHC)氧化为丙酮酸重新进入三羧酸循环。本研究综合评估了乳酸代谢关键基因调控对人胚胎肾细胞(human embryonic kidney 293 cells,HEK-293)细胞生长、代谢和人腺病毒(human adenovirus,HAdV)生产的影响,有效提高了HEK-293细胞的HAdV生产能力,并为哺乳动物细胞的乳酸代谢工程调控提供了理论基础。通过改造乳酸代谢关键调控基因(敲除ldha基因以及过表达ldhb和ldhc基因),有效改善了HEK-293细胞的物质和能量代谢效率,显著提高了HAdV的生产。与对照细胞相比,3个基因改造均能促进细胞生长,降低乳酸和氨的积累,明显增强细胞的物质和能量代谢效率,显著提高了HEK-293细胞的HAdV生产能力。ldhc基因过表达对HEK-293细胞的生长、代谢和HAdV生产调控最显著,最大细胞密度提高了约38.7%,乳酸对葡萄糖得率和氨对谷氨酰胺得率分别下降了33.8%和63.3%,HAdV滴度提高了至少16倍。此外,相比于对照细胞株,改造细胞株的腺苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)生成速率、ATP/O_(2)比率、ATP与腺苷二磷酸(adenosine diphosphate,ADP)的比值以及还原型辅酶Ⅰ(nicotinamide adenine dinucleotide,NADH)含量均有不同程度的提高,能量代谢效率明显改善。 展开更多
关键词 乳酸脱氢酶 人胚胎肾细胞(HEK-293) 物质代谢 能量代谢 腺病毒
原文传递
云南省两医疗机构腹泻儿童腺病毒感染分子生物学特征 被引量:1
10
作者 曹亿会 乔恩发 +3 位作者 寸建萍 周晓芳 姜黎黎 向以斌 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1133-1137,共5页
人腺病毒(Human adenovrius,HAdV)是引起腹泻的重要病原体之一,本研究于2015~2018年在云南省昆明市儿童医院、玉溪市妇幼保健院两家哨点医院采集5岁以下腹泻儿童粪便样本1017份,采用实时荧光定量核酸检测HAdV。结果显示,HAdV阳性样本共4... 人腺病毒(Human adenovrius,HAdV)是引起腹泻的重要病原体之一,本研究于2015~2018年在云南省昆明市儿童医院、玉溪市妇幼保健院两家哨点医院采集5岁以下腹泻儿童粪便样本1017份,采用实时荧光定量核酸检测HAdV。结果显示,HAdV阳性样本共40份,阳性感染率为3.93%。其中男性患儿21人,女性患儿19人,男女性别比为1.1∶1。2岁以下幼儿感染HAdV有33例(82.5%)。6、7月阳性检出率较高,阳性检出数占全年阳性数的40.0%。2015~2018年,每年腹泻HAdV检出率逐步增加。阳性样本六邻体Hexon和纤维突蛋白Fiber基因序列分析发现,7号毒株可能存在基因重组。肠道HAdV感染在昆明、玉溪两地儿童腹泻中占有重要地位,应加强该地区的HAdV监测与防控。 展开更多
关键词 人腺病毒(hadv) 腹泻 儿童 六邻体 纤维突蛋白基因
原文传递
荧光素酶标记的重组人3型腺病毒的构建及分析
11
作者 陈诗颖 周志超 +1 位作者 田新贵 周荣 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期660-669,共10页
人3型腺病毒在人DSG2受体转基因鼠体内复制及侵染等生命过程尚不清楚。本研究旨在构建含萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase,Fluc)报告基因的复制型重组人3型腺病毒,为可视化重组人3型腺病毒的应用奠定基础。通过PCR扩增萤火虫荧光素酶... 人3型腺病毒在人DSG2受体转基因鼠体内复制及侵染等生命过程尚不清楚。本研究旨在构建含萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase,Fluc)报告基因的复制型重组人3型腺病毒,为可视化重组人3型腺病毒的应用奠定基础。通过PCR扩增萤火虫荧光素酶报告基因,克隆入去掉EGFP基因的人3型腺病毒穿梭质粒pSKA3E3LR(EGFP),经双酶切后与人3型腺病毒骨架质粒pBRAd3-EGFP的PCR扩增片段经重组酶Exnase体外重组的方法,得到中间载体,最后与pBRAd3-EGFP酶切片段连接,得到重组腺病毒质粒pAd3-LUC;转染AD293细胞,将包装成功的重组腺病毒rAd3-LUC纯化并免疫动物,分析重组腺病毒的特性和在小鼠体内的免疫反应。结果显示采用体外重组、酶切连接等方法成功获得到重组人3型腺病毒质粒pAd3-LUC,线性化的pAd3-LUC转染AD293细胞包装拯救得到重组腺病毒rAd3-LUC,观察到细胞病变和检测到荧光素酶的稳定表达,rAd3-LUC免疫小鼠抗血清可以识别并中和重组腺病毒rAd3-LUC(滴度约128~256)。本研究成功构建了E3区缺失并嵌入荧光素酶的复制型重组人3型腺病毒rAd3-LUC,为监控人3型腺病毒在人DSG2受体转基因小鼠体内复制及侵染等生命过程奠定基础。 展开更多
关键词 人腺病毒(hadv) 萤火虫荧光素酶(Fluc) 报告基因 构建 免疫反应
原文传递
腺病毒抗原表位嵌合蛋白的原核表达及其免疫原性 被引量:1
12
作者 王新国 齐永 +8 位作者 潘英 李素芹 李佳萌 陈红霞 李素梅 陈晨 徐艺菲 张玉彬 李越希 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第7期685-689,共5页
目的设计含有人腺病毒(human adenovirus,HAd V)3、7、11、14及55型抗原表位的嵌合蛋白,利用大肠埃希菌进行原核表达,并检测其抗原性及免疫原性。方法对5种型别HAd V的六邻体蛋白氨基酸序列进行分析,筛选出其中具有强抗原性的片段,片段... 目的设计含有人腺病毒(human adenovirus,HAd V)3、7、11、14及55型抗原表位的嵌合蛋白,利用大肠埃希菌进行原核表达,并检测其抗原性及免疫原性。方法对5种型别HAd V的六邻体蛋白氨基酸序列进行分析,筛选出其中具有强抗原性的片段,片段之间用2个甘氨酸和1个丝氨酸进行连接,形成1个多抗原片段串联的嵌合蛋白。优化嵌合蛋白的基因序列并化学合成全长基因,克隆至原核表达载体p ET28a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),筛选高表达嵌合蛋白的工程菌。用High Affinity Ni-NTA resin纯化该嵌合蛋白,并将其作为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备抗血清,间接ELISA法检测嵌合蛋白的抗原性及免疫原性。结果成功构建了高表达嵌合蛋白的工程菌,表达的嵌合蛋白相对分子质量约55 000,表达量达95%;破菌上清中嵌合蛋白的纯度较高,纯化后纯度在90%以上。嵌合蛋白免疫小鼠4次后,小鼠抗血清效价达1∶320 000。制备的腺病毒抗原表位嵌合蛋白能有效检测血清中腺病毒3、7、11、14及55型抗体,且能有效刺激机体产生针对各型别腺病毒抗原表位的抗体。结论表达制备的包含5种型别HAd V抗原表位的嵌合蛋白具有较好的抗原性及免疫原性,为进一步研制腺病毒疫苗、单克隆抗体及诊断试剂奠定了基础。 展开更多
关键词 人腺病毒 抗原表位 嵌合蛋白 抗原性 免疫原性
原文传递
2018年北京市西城区呼吸道腺病毒感染疫情流行病学和病原学特征分析 被引量:8
13
作者 牛丹丹 毛乃颖 +7 位作者 乔富宇 秦京宁 白书媛 李红 许文波 王英 朱贞 初艳慧 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期270-280,共11页
2018年5~9月,北京市西城区五所小学先后共报告了5起呼吸道感染集中发热疫情。为了解报告的5起疫情的流行病学和病原学特征,开展了现场调查,并采集病例咽拭子标本,使用荧光定量PCR方法检测17种常见呼吸道病毒进行病原学筛查,对鉴定为人... 2018年5~9月,北京市西城区五所小学先后共报告了5起呼吸道感染集中发热疫情。为了解报告的5起疫情的流行病学和病原学特征,开展了现场调查,并采集病例咽拭子标本,使用荧光定量PCR方法检测17种常见呼吸道病毒进行病原学筛查,对鉴定为人腺病毒(Human adenovirus,HAdV)阳性的标本进行病毒分离,并分别扩增六邻体蛋白基因Loop2区域以及三个衣壳蛋白(五邻体基座蛋白、六邻体蛋白和纤维蛋白)基因全长,进行HAdV型别的初筛和确认,同时与GenBank数据库中国内外HAdV-3流行株序列进行比对分析。结果显示,5起集中发热疫情的致病原均为HAdV-3。进一步研究发现,全球流行HAdV-3可划分为Clade1和Clade2两个进化分支,2004年至今我国流行的HAdV-3病毒株均属于Clade2进化分支,也是近年全球优势流行株。两个进化分支HAdV-3病毒株在三个基因序列上均高度保守。本研究为我国呼吸道HAdV防控,以及HAdV-3型疫苗研发提供了基础科学数据。 展开更多
关键词 人腺病毒3型(hadv-3) 呼吸道感染疫情 流行病学特征 病原学鉴定
原文传递
2013~2014年我国4省急性呼吸道感染人腺病毒4型的基因特征分析 被引量:7
14
作者 李红 毛乃颖 +9 位作者 余鹏博 尹洁 姜洪波 张波 孟婷玉 孙利伟 崔爱利 许文波 朱贞 张荣波 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期850-859,共10页
为了从分子水平上初步探讨我国流行HAdV-4的基因特征以及分子进化规律,为HAdV-4在我国的疫情监测与防控以及疫苗研发提供科学数据,本研究通过对2013~2014年间在陕西、云南、吉林和山东4省发热呼吸道症候群监测病例鼻咽拭子标本中分离... 为了从分子水平上初步探讨我国流行HAdV-4的基因特征以及分子进化规律,为HAdV-4在我国的疫情监测与防控以及疫苗研发提供科学数据,本研究通过对2013~2014年间在陕西、云南、吉林和山东4省发热呼吸道症候群监测病例鼻咽拭子标本中分离得到的HAdV-4毒株,分别进行Penton base,Hexon和Fiber三个靶基因的序列测定,同时下载GenBank数据库中所有我国及全球流行HAdV-4病毒株的上述三基因序列进行比对,构建基因亲缘性关系树,并使用生物信息学分析软件进行基因特征和分子进化分析。结果显示:全球HAdV-4病毒株可划分两个进化分支(HAdV-4p和HAdV-4a),我国自2008年至今流行的HAdV-4病毒株属于HAdV-4a进化分支,与全球优势流行株一致;HAdV-4p和HAdV-4a进化分支病毒株的三个基因序列在时间和空间上均具保守性和稳定性,核苷酸和氨基酸突变主要与不同进化分支密切相关;HAdV-4基于三个基因的估算进化速率分别为3.73×10-5碱基替代/位点/年,1.86×10-5碱基替代/位点/年和4.09×10-5碱基替代/位点/年;基于Fiber基因估算的最近共同祖先(The most recent common ancestor,tMRCA)结果显示,HAdV-4起源于1771年,其中HAdV-4p和HAdV-4a可分别追溯至1933年和1962年。为了进一步积累并完善上述HAdV病毒学监测数据,我国急需建立长期有效的HAdV监测体系。 展开更多
关键词 人腺病毒4型(hadv-4) 急性呼吸道感染 基因特征 分子进化
原文传递
小鼠抗人腺病毒55型六邻体(HAdV55 Hexon)蛋白单克隆抗体的制备 被引量:2
15
作者 袁若栋 董阳超 +9 位作者 武福星 段甜 薛潘 张剑 袁明城 薛智丰 张海军 张欠欠 高小朋 雷迎峰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期544-551,共8页
目的制备特异性小鼠抗人腺病毒55型六邻体蛋白(HAdV55 Hexon)单克隆抗体(mAb)。方法以化学合成HAdV 55、3、4、7、16、21的Hexon基因为模板,PCR扩增后分别构建原核表达质粒pET28a-HAdV55 Hexon与真核表达质粒pCAGGS-HAdV3、4、7、16、21... 目的制备特异性小鼠抗人腺病毒55型六邻体蛋白(HAdV55 Hexon)单克隆抗体(mAb)。方法以化学合成HAdV 55、3、4、7、16、21的Hexon基因为模板,PCR扩增后分别构建原核表达质粒pET28a-HAdV55 Hexon与真核表达质粒pCAGGS-HAdV3、4、7、16、21、55 Hexon;将pET28a-HAdV55 Hexon质粒转化至大肠杆菌(E.coli)感受态细胞BL21(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,将纯化的包涵体经过变性与复性后利用切向流膜过滤系统获得纯化蛋白;将pCAGGS-HAdV55 Hexon用于拔罐免疫BALB/c小鼠,HAdV55 Hexon蛋白用于加强免疫,通过杂交瘤技术制备抗HAdV55 Hexon的mAb,并进行抗体效价测定、抗体亚类鉴定;对上述抗体利用pCAGGS-HAdV55 Hexon转染HEK293T细胞和BHK细胞分别进行Western blot法和免疫荧光法(IFA)以鉴定其特异性;选择其中效价高的两株抗体,进一步利用pCAGGS-HAdV3、4、7、16、21、55 Hexon转染细胞分别进行Western blot法和IFA做交叉反应性分析。结果成功构建pET28a-HAdV55 Hexon和pCAGGS-HAdV55 Hexon、3、4、7、16、21表达质粒;IPTG诱导pET28a-HAdV55 Hexon转化的BL21细菌,HAdV55 Hexon蛋白主要以包涵体形式表达,经过变性及复性后超滤得到纯化的HAdV55 Hexon蛋白;筛选得到6株可分泌HAdV55 Hexon mAb的杂交瘤细胞株,抗体亚类分析显示2株为IgG2a亚型,4株为IgG2b;获得与HAdV3 Hexon、HAdV4 Hexon、HAdV7 Hexon、HAdV16 Hexon、HAdV21 Hexon无交叉反应性的2株高效价的特异性HAdV55 Hexon抗体。结论获得的特异性小鼠抗HAdV55 Hexon的mAb为建立其抗原检测方法提供了实验基础。 展开更多
关键词 人腺病毒55型(hadv55) 六邻体蛋白(Hexon) 单克隆抗体(mAb)
下载PDF
利用Gibson DNA组装技术构建人5型腺病毒感染性克隆 被引量:4
16
作者 邹小辉 夏百成 +3 位作者 郭小娟 王敏 鲁茁壮 洪涛 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期349-355,共7页
为了构建人5型腺病毒(HAdV-5)的感染性克隆,我们使用了Gibson DNA组装技术。设计1对引物用于扩增质粒骨架(包含卡那霉素抗性基因和质粒的复制起点,KAN-ORI),在引物的5’端添加HAdV-5基因组末端序列(约30NT)和Pac I位点,以携带卡... 为了构建人5型腺病毒(HAdV-5)的感染性克隆,我们使用了Gibson DNA组装技术。设计1对引物用于扩增质粒骨架(包含卡那霉素抗性基因和质粒的复制起点,KAN-ORI),在引物的5’端添加HAdV-5基因组末端序列(约30NT)和Pac I位点,以携带卡那霉素抗性基因的pShuttle-CMV质粒为模板,PCR扩增得到KAN-ORI片段,该片段的两端均含有约30bp的HAdV-5基因组序列。将KAN-ORI片段与利用野毒扩增纯化的HAdV-5基因组混合,进行Gibson DNA组装反应;反应产物直接转化E.coli感受态细胞,涂布含卡那霉素的LB琼脂平板。挑取菌落,提取质粒,命名为pKAd5。限制性酶切鉴定的结果显示,所鉴定的质粒均含有完整的HAdV-5基因组。使用Pac I酶切线性化pKAd5,利用脂质体转染293细胞,转染4d后单层细胞出现病毒噬斑。拯救的病毒能够在HEp-2细胞扩增;电子显微镜观察呈现典型的腺病毒形态;提取病毒DNA,酶切鉴定的结果与预期的HAdV-5基因组相同,证实HAdV-5得到成功拯救。上述研究结果说明使用Gibson DNA组装技术构建HAdV-5感染性克隆简便易行,为其他DNA病毒基因组的克隆提供了新思路。 展开更多
关键词 人5型腺病毒(hadv-5) GIBSON DNA组装 感染性克隆 病毒拯救 透射电子显微镜
原文传递
纤维顶球改造增强了人5型腺病毒载体对造血细胞的感染 被引量:2
17
作者 郭小娟 梅玲玲 +3 位作者 付鸿臣 邹小辉 鲁茁壮 洪涛 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1079-1088,共10页
基于人5型腺病毒(Human adenovirus type 5,HAdV⁃5)的腺病毒载体对造血细胞的基因转导效率低,将病毒fiber基因替换为HAdV⁃11p的同源基因F11p后,载体对造血细胞的感染效率增强。本研究拟在F11p纤维顶球(knob)结构域添加RGD4C多肽或HIV包... 基于人5型腺病毒(Human adenovirus type 5,HAdV⁃5)的腺病毒载体对造血细胞的基因转导效率低,将病毒fiber基因替换为HAdV⁃11p的同源基因F11p后,载体对造血细胞的感染效率增强。本研究拟在F11p纤维顶球(knob)结构域添加RGD4C多肽或HIV包膜糖蛋白(gp120)的V3结构域,观察重组HAdV⁃5对造血细胞感染效率的变化。在前期构建的pKAd5f11p153R⁃EPG腺病毒质粒基础上,结合限制性酶切和DNA组装技术,在F11p 153 aa后(knob AB loop,153位)、228位(FG loop)以及300位(IJ loop)插入RGD4C肽或者gp120的V3肽,构建了共6种重组腺病毒载体(F153RGD⁃EG、F228RGD⁃EG、F300RGD⁃EG、F153CV⁃EG、F228CV⁃EG和F300CV⁃EG),以fiber未改造的HAdV5⁃EG和改造为F11p的F11p⁃EG病毒作对照,观察了其对4种造血细胞系U937、K562、Jurkat和HL60以及人原代T细胞的感染效率。结果显示,对于U937细胞,当感染复数(MOI,vp/cell)为100时,HAdV5⁃EG感染效率最低,为2%;其次为F228CV⁃EG,感染率为45%;F300RGD⁃EG、F153CV⁃EG和F300CV⁃EG感染率为85%~90%;F153RGD⁃EG、F228RGD⁃EG高于阳性对照病毒F11p⁃EG,三者分别为99%、99%、95%。各病毒对于Jurkat细胞的感染率均较高,但HAdV5⁃EG明显低于F11p⁃EG、F153RGD⁃EG和F228RGD⁃EG,当MOI为100时分别为75%、93%、93%和96%。感染K562细胞的情况与U937细胞类似。各病毒对于HL60细胞感染效率最低,MOI为500时,F300RGD⁃EG和F300CV⁃EG的转导效率为28%和33%,是F11p⁃EG的10倍。对于人原代T细胞,F153RGD⁃EG和F228RGD⁃EG优于F11p⁃EG,当MOI为1000时,感染率分别为87%、90%和84%。研究结果表明,F11p knob插入RGD4C比单独F11p替换的HAdV⁃5对造血细胞的感染效率高,同时,本研究还发现HAdV⁃11p fiber knob的AB、FG或IJ loop可插入外源多肽,为腺病毒嗜向性改造增加了新靶点。 展开更多
关键词 人5型腺病毒(hadv⁃5) 纤维顶球 造血细胞
原文传递
2010⁃2019年北京地区腹泻患儿中人腺病毒41型Fiber基因分子特征和进化分析 被引量:1
18
作者 刘立颖 钱渊 +2 位作者 贾立平 董慧谨 朱汝南 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1102-1111,共10页
人腺病毒41型(Human adenovirus 41,HAdV-41)是引起儿童腹泻的重要病原之一。为了解北京地区腹泻儿童中HAdV-41 Fiber基因的分子变异和遗传进化特征,选取2010-2019年首都儿科研究所附属儿童医院门诊腹泻患儿HAdV-41阳性的粪便标本,扩增F... 人腺病毒41型(Human adenovirus 41,HAdV-41)是引起儿童腹泻的重要病原之一。为了解北京地区腹泻儿童中HAdV-41 Fiber基因的分子变异和遗传进化特征,选取2010-2019年首都儿科研究所附属儿童医院门诊腹泻患儿HAdV-41阳性的粪便标本,扩增Fiber全基因,使用多种生物信息学软件进行系统发生、遗传进化、种群演变和选择压力等分析。结果显示HAdV-41本地毒株存在1644碱基(547氨基酸)和1689碱基(562氨基酸)两种长度的Fiber基因,截短的15个氨基酸位于Fiber蛋白纤维轴区。Mann-Whitney U秩和检验提示检测到感染短Fiber基因的HAdV-41的患儿年龄更小(P=0.036)。同源性分析结果显示Fiber基因的核苷酸和氨基酸序列同源性均大于97%,主要分为四个进化分支(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ),其中Ⅰ和Ⅲ是主要的流行分支,分支Ⅰ主要在国内流行,而分支Ⅲ全球均有流行。HAdV-41共祖起源可追溯到1856年,平均进化速率每年为6.81×10^(-5)碱基替换/位点,10年间理论有效种群一直比较平稳呈缓慢下降趋势。压力选择分析表明,一个正向和三个负向选择位点均位于Fiber蛋白的纤维轴区。上述结果表明2010-2019年间不同进化分支的HAdV-41在北京地区流行,进化速率稳定。Fiber蛋白轴区存在两种不同类型的氨基酸缺失。 展开更多
关键词 人腺病毒41型(hadv-41) 纤维蛋白 腹泻 分子进化
原文传递
人4型腺病毒拷贝数SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测方法的建立 被引量:1
19
作者 张文宁 王芃 +4 位作者 周建光 王健 秦崇涛 李宗 李山虎 《生物技术通讯》 CAS 2017年第4期528-533,共6页
目的:建立检测人4型腺病毒拷贝数的荧光定量PCR方法。方法:提取本实验室构建的4型腺病毒全基因组质粒,以梯度稀释质粒为标准模板,选取人4型腺病毒六邻体区域基因设计一对特异性引物,进行SYBR GreenⅠ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线。结... 目的:建立检测人4型腺病毒拷贝数的荧光定量PCR方法。方法:提取本实验室构建的4型腺病毒全基因组质粒,以梯度稀释质粒为标准模板,选取人4型腺病毒六邻体区域基因设计一对特异性引物,进行SYBR GreenⅠ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线。结果:标准曲线为y=-4.284x+53.468,由全基因组质粒所构建的标准曲线线性关系良好,扩增反应Ct值与拷贝数的对数呈线性关系(R2=0.999 609),检出敏感度可达1×102拷贝/μL,且与其他几种腺病毒无交叉反应。用该方法检测4型腺病毒感染细胞2、12和24 h后的病毒拷贝数,其病毒拷贝数随时间增加,与细胞病变(CPE)变化保持一致,且荧光定量PCR的测量结果稳定(变异系数<6%)。结论:建立了检测人4型腺病毒基因拷贝数的荧光定量RT-PCR方法,该方法灵敏度高、特异性强。 展开更多
关键词 人4型腺病毒拷贝数 实时荧光定量PCR 标准曲线
下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部