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抑制AMPK观察清燥救肺汤对肺癌细胞自噬启动相关蛋白表达的影响 被引量：7
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作者 张汗顺 余功 +1 位作者 刘成 谢斌 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期25-31,共7页
目的:观察应用腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂(compound C)后,清燥救肺汤对肺癌细胞自噬启动相关蛋白AMPK,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR),UNC-51样激酶1(ULK1)表达的影响。方法:雄性C57BL/6J小鼠随机分为模型组,环磷酰胺(CTX)组(50 mg&... 目的:观察应用腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂(compound C)后,清燥救肺汤对肺癌细胞自噬启动相关蛋白AMPK,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR),UNC-51样激酶1(ULK1)表达的影响。方法:雄性C57BL/6J小鼠随机分为模型组,环磷酰胺(CTX)组(50 mg·kg^(-1)),清燥救肺汤组(11 g·kg^(-1)),AMPK抑制剂组(10 mg·kg^(-1)),清燥救肺汤加AMPK抑制剂组(清燥加抑制剂组)(11 g·kg^(-1)+10 mg·kg^(-1))。小鼠右腋皮下注射Lewis肺癌细胞构建肺癌荷瘤模型。造模24 h后,CTX组腹腔注射给药,隔日1次,共7次,AMPK抑制剂组与清燥加抑制剂组腹腔注射compound C,每日1次,共14 d。清燥救肺汤组和清燥加抑制剂组,造模前后14 d均以中药设定剂量灌胃给药。实验结束后处死各组小鼠并取荷瘤组织,统计各组瘤质量;透射电镜(TEM)观察各组肺癌组织自噬溶酶体的生成情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测AMPK,磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK),mTOR,磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR),ULK1,磷酸化UNC-51样激酶1(p-ULK1),微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)和p62蛋白的表达;苏木素-伊红(HE)染色观察各组肺癌组织病理学变化。结果:与模型组比较,清燥救肺汤组瘤质量降低(P<0.01),电镜下发现自噬溶酶体生成,p-AMPK,p-ULK1,LC3B,LC3B-Ⅱ蛋白表达和p-AMPK/AMPK,p-ULK1/ULK1,LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ均升高(P<0.05,P<0.01),p-mTOR,p62蛋白表达和p-mTOR/mTOR均降低(P<0.05)。与清燥救肺汤组比较,清燥加抑制剂组电镜下未见自噬溶酶体生成,p-AMPK,p-ULK1,LC3B,LC3B-Ⅱ蛋白表达和p-AMPK/AMPK,p-ULK1/ULK1,LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ均明显降低(P<0.05,P<0.01),p62蛋白表达升高(P<0.05)。HE染色结果显示,各给药组肺癌组织与模型组比较,病理有明显改善。结论:清燥救肺汤能促进自噬发生标志蛋白LC3B-Ⅱ升高及p62蛋白表达降低从而诱导自噬发生,其自噬启动机制可能不是调控AMPK/mTOR/ULK1通路介导,而是通过AMPK/ULK1通路实现的。 展开更多
关键词 腺苷酸活化蛋白激酶(ampk) 清燥救肺汤 肺癌 自噬启动相关蛋白
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