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抗除草剂转基因大豆插入拷贝数及其旁侧序列分析
被引量：
7
1
作者
仇有文
高学军
+3 位作者
张明辉
敖金霞
袁肖寒
刘营
《生物技术》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期31-35,共5页
目的:确定抗除草剂转基因大豆外源基因拷贝数和其插入位点侧翼序列。方法:采用绝对定量PCR法测定转EPSPS基因大豆中外源基因拷贝数,内参照基因标准曲线选用大豆凝集素(Lectin)基因为标准品,外源基因标准曲线以含EPSPS基因的阳性质粒为...
目的:确定抗除草剂转基因大豆外源基因拷贝数和其插入位点侧翼序列。方法:采用绝对定量PCR法测定转EPSPS基因大豆中外源基因拷贝数,内参照基因标准曲线选用大豆凝集素(Lectin)基因为标准品,外源基因标准曲线以含EPSPS基因的阳性质粒为标准品。采用基因组步移技术和巢式PCR方法确定抗除草剂转基因大豆插入位点旁侧序列。结果:抗除草剂转基因大豆外源基因的拷贝数为1。CaMV35S上游扩增887bp,NOS下游扩增1 340bp。结论:明确了EPSPS外源基因在转基因大豆中为单拷贝,转基因大豆插入位点附近大豆基因组发生了DNA重排。
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关键词
抗除草剂转基因大豆
旁侧序列
拷贝数
基因组步移
接头
pcr
原文传递
破囊壶菌Δ~4-脂肪酸脱饱和酶基因5'端侧翼区域的克隆与鉴定
被引量：
4
2
作者
江贤章
陈金卿
+5 位作者
田宝玉
高媛媛
舒正玉
李欣
蓝灿华
黄建忠
《福建师范大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第6期89-94,共6页
应用衔接头PCR(LA-PCR)技术,扩增得到约1000 bp的海洋破囊壶菌Δ4-脱饱和酶基因5’端侧翼区域的单一产物.对该产物测序,经启动子软件与序列比对分析,发现该序列(Genkbank登录号EU074209)具有真核启动子序列的基本结构特征,含有TATA盒、C...
应用衔接头PCR(LA-PCR)技术,扩增得到约1000 bp的海洋破囊壶菌Δ4-脱饱和酶基因5’端侧翼区域的单一产物.对该产物测序,经启动子软件与序列比对分析,发现该序列(Genkbank登录号EU074209)具有真核启动子序列的基本结构特征,含有TATA盒、CAAT盒、INR等元件.将扩增得到的脱饱和酶基因5’端侧翼序列亚克隆到含有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的质粒pGlow-TOPO中,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌细胞.荧光显微观察大肠杆菌阳性转化子发出荧光,侧翼序列含有启动子功能得到确认.
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关键词
破囊壶菌
脱饱和酶
衔接头
pcr
启动子
绿色荧光蛋白
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职称材料
侧翼序列克隆方法评价
被引量：
20
3
作者
洪登峰
万丽丽
杨光圣
《分子植物育种》
CAS
CSCD
2006年第2期280-288,共9页
克隆已知序列的侧翼DNA区域是基因操作实验中经常面临的任务之一。自PCR技术发明以来,以其为基础克隆侧翼序列的方法不断开发,如反向PCR(inversePCR)、捕捉PCR(capturePCR)、VectorettePCR、抑制PCR(suppressionPCR)、T接头PCR(T-linker...
克隆已知序列的侧翼DNA区域是基因操作实验中经常面临的任务之一。自PCR技术发明以来,以其为基础克隆侧翼序列的方法不断开发,如反向PCR(inversePCR)、捕捉PCR(capturePCR)、VectorettePCR、抑制PCR(suppressionPCR)、T接头PCR(T-linkerPCR)、多功能接头PCR(versatilecassettePCR)、AluPCR、热不对称交错PCR(thermalasymmetricinterlacedPCR)和DNA步行—复性控制引物(DNAwalking-an-nealingcontrolprimerTM)等。本文对上述方法的原理进行了简要的概括和总结,据此将其归为三大策略,即连接成环PCR、外源接头介导PCR和半随机引物PCR。对不同的策略和同一策略中不同的方法的优缺点亦进行了比较,进而讨论和展望了它们的主要应用领域和潜力,以期对实际操作起到借鉴作用。
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关键词
侧翼序列
连接成环
pcr
外源接头介导
pcr
半随机引物
pcr
T接头
pcr
热不对称交错
pcr
DNA步行-复性控制引物
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职称材料
染色体步移技术研究进展
被引量：
16
4
作者
梁成真
张锐
郭三堆
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第10期75-82,87,共9页
染色体步移技术是一种常用的克隆已知片段旁侧序列的技术。综述了近年来染色体步移技术的发展情况,介绍了结合基因组文库的染色体步移技术和基于PCR的染色体步移技术。同时总结了物理剪切法和限制性内切酶法构建亚克隆文库的优化步骤,...
染色体步移技术是一种常用的克隆已知片段旁侧序列的技术。综述了近年来染色体步移技术的发展情况,介绍了结合基因组文库的染色体步移技术和基于PCR的染色体步移技术。同时总结了物理剪切法和限制性内切酶法构建亚克隆文库的优化步骤,以及连接成环PCR法、外源接头介导PCR法和半随机引物PCR法的原理,并且比较分析了他们之间的优缺点,以期对实际操作起到借鉴作用。
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关键词
染色体步移
侧翼序列
BAC克隆反向
pcr
外源接头介导
pcr
半随机引物
pcr
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职称材料
题名
抗除草剂转基因大豆插入拷贝数及其旁侧序列分析
被引量：
7
1
作者
仇有文
高学军
张明辉
敖金霞
袁肖寒
刘营
机构
东北农业大学生命科学与生物技术研究中心/农业部转基因生物产品成分监督检测测试中心
出处
《生物技术》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期31-35,共5页
基金
国家转基因重大专项子课题(2008ZX08012-001)
哈尔滨市科技创新人才专项资金(2010RFQXN101)资助
文摘
目的:确定抗除草剂转基因大豆外源基因拷贝数和其插入位点侧翼序列。方法:采用绝对定量PCR法测定转EPSPS基因大豆中外源基因拷贝数,内参照基因标准曲线选用大豆凝集素(Lectin)基因为标准品,外源基因标准曲线以含EPSPS基因的阳性质粒为标准品。采用基因组步移技术和巢式PCR方法确定抗除草剂转基因大豆插入位点旁侧序列。结果:抗除草剂转基因大豆外源基因的拷贝数为1。CaMV35S上游扩增887bp,NOS下游扩增1 340bp。结论:明确了EPSPS外源基因在转基因大豆中为单拷贝,转基因大豆插入位点附近大豆基因组发生了DNA重排。
关键词
抗除草剂转基因大豆
旁侧序列
拷贝数
基因组步移
接头
pcr
Keywords
herbicide
resistant
transgenic
soybean
flanking
sequence
copy
number
genome
walking
adapter
pcr
分类号
Q81 [生物学—生物工程]
原文传递
题名
破囊壶菌Δ~4-脂肪酸脱饱和酶基因5'端侧翼区域的克隆与鉴定
被引量：
4
2
作者
江贤章
陈金卿
田宝玉
高媛媛
舒正玉
李欣
蓝灿华
黄建忠
机构
福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心
出处
《福建师范大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第6期89-94,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(30370028)
福建省自然科学基金重大项目(2003F005)
+3 种基金
福建省教育厅基金资助项目(JB07079)
福建省发改委重大项目([2004]477)
福建省科技厅重大项目(2005Q007)
福建省青年人才基金资助项目(2008F3036)
文摘
应用衔接头PCR(LA-PCR)技术,扩增得到约1000 bp的海洋破囊壶菌Δ4-脱饱和酶基因5’端侧翼区域的单一产物.对该产物测序,经启动子软件与序列比对分析,发现该序列(Genkbank登录号EU074209)具有真核启动子序列的基本结构特征,含有TATA盒、CAAT盒、INR等元件.将扩增得到的脱饱和酶基因5’端侧翼序列亚克隆到含有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的质粒pGlow-TOPO中,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌细胞.荧光显微观察大肠杆菌阳性转化子发出荧光,侧翼序列含有启动子功能得到确认.
关键词
破囊壶菌
脱饱和酶
衔接头
pcr
启动子
绿色荧光蛋白
Keywords
Thraustochytrium
desaturase
link-
adapter
pcr
promoter
green
fluores-cence
protein
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
侧翼序列克隆方法评价
被引量：
20
3
作者
洪登峰
万丽丽
杨光圣
机构
华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室
出处
《分子植物育种》
CAS
CSCD
2006年第2期280-288,共9页
基金
国家973项目（2001CBl08807）
长江学者和创新团队发展计划（IRT0442）的资助.
文摘
克隆已知序列的侧翼DNA区域是基因操作实验中经常面临的任务之一。自PCR技术发明以来,以其为基础克隆侧翼序列的方法不断开发,如反向PCR(inversePCR)、捕捉PCR(capturePCR)、VectorettePCR、抑制PCR(suppressionPCR)、T接头PCR(T-linkerPCR)、多功能接头PCR(versatilecassettePCR)、AluPCR、热不对称交错PCR(thermalasymmetricinterlacedPCR)和DNA步行—复性控制引物(DNAwalking-an-nealingcontrolprimerTM)等。本文对上述方法的原理进行了简要的概括和总结,据此将其归为三大策略,即连接成环PCR、外源接头介导PCR和半随机引物PCR。对不同的策略和同一策略中不同的方法的优缺点亦进行了比较,进而讨论和展望了它们的主要应用领域和潜力,以期对实际操作起到借鉴作用。
关键词
侧翼序列
连接成环
pcr
外源接头介导
pcr
半随机引物
pcr
T接头
pcr
热不对称交错
pcr
DNA步行-复性控制引物
Keywords
Flanking
sequence,
Orbicular-ligation
pcr
,
adapter
-mediated
pcr
,
Semi-random
primer
pcr
,T-linker
pcr
,
Thermal
asymmetric
interlaced
pcr
,
DNA
walking-annealing
control
primer^TM
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
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职称材料
题名
染色体步移技术研究进展
被引量：
16
4
作者
梁成真
张锐
郭三堆
机构
中国农业科学院生物技术研究所国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第10期75-82,87,共9页
基金
农业部国家转基因重大专项"转基因抗旱耐盐碱棉花新品种培育"(2008ZX005-004)
文摘
染色体步移技术是一种常用的克隆已知片段旁侧序列的技术。综述了近年来染色体步移技术的发展情况,介绍了结合基因组文库的染色体步移技术和基于PCR的染色体步移技术。同时总结了物理剪切法和限制性内切酶法构建亚克隆文库的优化步骤,以及连接成环PCR法、外源接头介导PCR法和半随机引物PCR法的原理,并且比较分析了他们之间的优缺点,以期对实际操作起到借鉴作用。
关键词
染色体步移
侧翼序列
BAC克隆反向
pcr
外源接头介导
pcr
半随机引物
pcr
Keywords
Chromosome
walking
Flanking
sequence
BAC
clone
I-
pcr
adapter
-mediated
pcr
Semi-random
primer
pcr
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗除草剂转基因大豆插入拷贝数及其旁侧序列分析
仇有文
高学军
张明辉
敖金霞
袁肖寒
刘营
《生物技术》
CAS
CSCD
北大核心
2011
7
原文传递
2
破囊壶菌Δ~4-脂肪酸脱饱和酶基因5'端侧翼区域的克隆与鉴定
江贤章
陈金卿
田宝玉
高媛媛
舒正玉
李欣
蓝灿华
黄建忠
《福建师范大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2008
4
下载PDF
职称材料
3
侧翼序列克隆方法评价
洪登峰
万丽丽
杨光圣
《分子植物育种》
CAS
CSCD
2006
20
下载PDF
职称材料
4
染色体步移技术研究进展
梁成真
张锐
郭三堆
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
16
下载PDF
职称材料
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