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腺相关病毒载体血清型8递送的大鼠FVⅢ轻链对不同长度人FVⅢ重链活性的促进作用
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作者 毛建华 沈艳 +1 位作者 阮铮 奚晓东 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1817-1823,共7页
目的:研究大鼠FVⅢ轻链(rL C)对不同长度人FVⅢ重链(hHC,包括hHC745和hHC1690)活性的影响。方法:将hHC745、hHC1690、人FVⅢ轻链(hLC)和rL C分别克隆至含CB启动子的腺相关病毒血清型8(AAV8)表达载体中,采用HC和LC共表达的双链策略,转染2... 目的:研究大鼠FVⅢ轻链(rL C)对不同长度人FVⅢ重链(hHC,包括hHC745和hHC1690)活性的影响。方法:将hHC745、hHC1690、人FVⅢ轻链(hLC)和rL C分别克隆至含CB启动子的腺相关病毒血清型8(AAV8)表达载体中,采用HC和LC共表达的双链策略,转染293T细胞,收取转染后48 h的细胞培养上清;质粒经尾静脉高压注入血友病A(HA)小鼠,注射后48 h通过眼眶采血收集小鼠的外周血血浆。应用活化部分凝血活酶时间(aPTT)法检测FVⅢ的活性,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测FVⅢ的抗原表达量,计算比活性。结果:在293T细胞中,hHC745和hHC1690与rL C共表达时的FVⅢ活性显著高于与hLC共表达时的活性,分别提高到约4.6倍和2.9倍;ELISA结果表明hHC745和hHC1690与hLC和rL C共表达时的FVⅢ抗原表达无统计学差异;根据aPTT测得的FVⅢ活性与ELISA测得的FVⅢ抗原表达量计算的比活性结果显示,hHC745与rL C共表达时的比活性提高到与hLC共表达时的比活性的约4.1倍,而hHC1690与rL C共表达时的比活性提高到与hLC共表达时的约2.8倍。在高压注射的HA小鼠中,hHC745和hHC1690与rL C共表达时的FVⅢ活性显著高于与hLC共表达时的活性,活性分别提高到约5.1倍和2.1倍;ELISA结果同样显示,hHC745和hHC1690与hLC和rL C共表达时FVⅢ抗原表达无统计学差异;比活性结果表明,hHC745和hHC1690与rL C共表达时的比活性较与hLC共表达时的比活性显著提高,分别提高到约4.2倍和1.8倍;hHC1690与rL C共表达时的FVⅢ活性显著高于hHC745与rL C共表达时的活性。结论:rL C可以显著提高不同长度hF VⅢ重链(hHC745和hHC1690)的活性。 展开更多
关键词 大鼠凝血因子Vⅲ轻链 人凝血因子Vⅲ重链 血友病A 腺相关病毒载体血清型8 凝血因子Vⅲ活性
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