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利用甘油发酵耦联生产3-羟基丙酸及1,3-丙二醇重组菌的构建及筛选 被引量：5
1
作者 王凤寰 杨建国 +1 位作者 王晓楠 谭天伟 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1611-1617,共7页
在肺炎克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae)代谢甘油生产1,3-丙二醇(1,3-PD)的过程中,为了减少有毒中间产物3-羟基丙醛(3-HPA)的积累,可将其转化为3-羟基丙酸(3-HP),从而实现1,3-丙二醇和3-羟基丙酸的联产。克隆来自于酿酒酵母的NAD+依... 在肺炎克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae)代谢甘油生产1,3-丙二醇(1,3-PD)的过程中,为了减少有毒中间产物3-羟基丙醛(3-HPA)的积累,可将其转化为3-羟基丙酸(3-HP),从而实现1,3-丙二醇和3-羟基丙酸的联产。克隆来自于酿酒酵母的NAD+依赖型的乙醛脱氢酶(ALDH)的基因aldh4,构建了表达载体pKP-aldh,转化K.pneumoniae,得到了有效表达乙醛脱氢酶的重组肺炎克雷伯杆菌(K.pneumoniae A+)。在此基础上,使用紫外诱变联合菌种驯化的方法对K.pneumoniae A+进行筛选,获得了可耐受较高3-HP浓度(≥35 g/L)的重组肺炎克雷伯杆菌K.pneumoniae A+5-3。发酵实验结果表明,K.pneumoniae A+5-3可将3-HPA转化为3-HP,能够同时利用甘油耦联生产3-HP和1,3-PD,产量分别达到5.0 g/L和74.5 g/L。 展开更多
关键词 3-羟基丙酸 1 3-丙二醇 乙醛脱氢酶 重组肺炎克雷伯杆菌
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川芎内酯抑制结肠癌细胞的生长和肿瘤干细胞样特性 被引量：4
2
作者 董梁 张敬 缪柯 《广州中医药大学学报》 CAS 2021年第12期2742-2750,共9页
【目的】探讨川芎内酯对结肠癌细胞的抑制作用及其机制。【方法】(1)体外研究:选择SW620和SW480 2种结肠癌细胞株。应用不同浓度的川芎内酯处理细胞24 h后,用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活力。选择浓度为0、25、50、100μmol/L的川... 【目的】探讨川芎内酯对结肠癌细胞的抑制作用及其机制。【方法】(1)体外研究:选择SW620和SW480 2种结肠癌细胞株。应用不同浓度的川芎内酯处理细胞24 h后,用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活力。选择浓度为0、25、50、100μmol/L的川芎内酯处理SW620和SW480细胞株,采用克隆形成实验检测增殖能力,采用流式细胞术检测癌细胞凋亡,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 (Caspase-3)及裂解的Caspase-3(cleaved Caspase-3)的表达,采用流式细胞术检测线粒体膜电位的变化,按照试剂盒说明方法检测超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量,应用显微镜观察SW620和SW480干细胞成球情况,采用Aldefluor分析法检测乙醛脱氢酶(ALDH)活性,采用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测干细胞标记物Nanog、八聚体结合转录因子4(OCT4)和性别决定域Y蛋白2(SOX2)的表达。(2)体内研究:裸鼠皮下接种SW480细胞构建荷瘤模型,加药组给予川芎内酯5 mg/kg处理,每5 d检测瘤体积。30 d后,处死祼鼠取出肿瘤称质量,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色检测肿瘤组织细胞凋亡,免疫组织化学法检测肿瘤组织中p21和SOX2的表达,按照试剂盒说明方法检测肿瘤组织MDA和SOD含量。【结果】与川芎内酯0μmol/L组比较,川芎内酯50μmol/L对SW620细胞活力有明显抑制作用(P<0.05),川芎内酯25μmol/L对SW480细胞活力有明显抑制作用(P<0.05)。川芎内酯明显降低结肠癌细胞存活率(P<0.05),增加细胞凋亡率(P<0.05),上调p21和cleaved Caspase-3的表达水平(P<0.05),降低线粒体膜电位,增加SOD的含量(P<0.05),减少MDA的含量(P<0.05),减小结肠癌细胞成球直径的大小(P<0.05),降低ALDH活性及Nanog、OCT4和SOX2的表达(P<0.05)。体内移植实验结果显示,川芎内酯减小肿瘤体积(P<0.05),增加肿瘤组织中TUN 展开更多
关键词 川芎内酯 结肠癌 凋亡 线粒体膜电位 乙醛脱氢酶 SW620细胞 SW480细胞 裸鼠
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子宫内膜息肉组织中ALDH1和COX-2的表达及其与术后复发的关系研究 被引量：1
3
作者 冒晓玲 夏亚芳 秦妍婷 《长春中医药大学学报》 2023年第3期327-330,共4页
目的 探究子宫内膜息肉组织中乙醛脱氢酶1(ALDH1)和环氧合酶-2(COX-2)的表达及其与术后复发的关系。方法 筛选82例子宫内膜息肉患者作为研究对象,收集并整理所有受试者的病例资料,以免疫组化法完成子宫内膜息肉组织中ALDH1和COX-2的表... 目的 探究子宫内膜息肉组织中乙醛脱氢酶1(ALDH1)和环氧合酶-2(COX-2)的表达及其与术后复发的关系。方法 筛选82例子宫内膜息肉患者作为研究对象,收集并整理所有受试者的病例资料,以免疫组化法完成子宫内膜息肉组织中ALDH1和COX-2的表达检测,根据患者子宫内膜息肉患者术后6个月内复发情况将其分为复发组和正常组。Logistic多因素回归分析探讨影响子宫内膜息肉患者术后复发的相关因素,以受试者工作特征曲线(ROC)评估子宫内膜息肉组织中ALDH1和COX-2的表达对子宫内膜息肉患者术后复发的预测价值。结果 82例子宫内膜息肉患者中术后复发21例,复发率25.61%。复发组BMI≥24 kg·m^(-2)、合并妇科疾病、ALDH1阳性表达、COX-2阳性表达所占比例均高于正常组(P <0.05)。Logistic多因素回归分析结果显示,BMI≥24 kg·m^(-2)、合并妇科疾病、ALDH1阳性表达、COX-2阳性表达均为子宫内膜息肉患者术后复发的影响因素(P <0.05)。ROC分析结果显示,子宫内膜息肉组织中ALDH1和COX-2表达单一及联合对子宫内膜息肉患者术后复发ROC预测的曲线下面积(AUC)分别为0.763、0.659、0.864,且单一预测效能低于联合(P <0.05)。结论 子宫内膜息肉组织中ALDH1和COX-2表达可用于预测子宫内膜息肉患者术后复发,且联合预测效能较高。 展开更多
关键词 子宫内膜息肉 乙醛脱氢酶1 环氧合酶-2 术后复发
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乙醛脱氢酶2可减少氧化损伤诱导的心肌细胞凋亡 被引量：4
4
作者 胡艺川 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期1417-1422,共6页
乙醛脱氢酶2 (aldehyde dehydrogenase 2, ALDH2)是线粒体特异性酶,已被证明参与氧化应激诱导的细胞凋亡,而在心肌细胞中的作用知之甚少。本研究旨在通过用特异性ALDH2抑制剂大豆苷抑制ALDH2活性来研究ALDH2在抗霉素A诱导的心肌细胞凋... 乙醛脱氢酶2 (aldehyde dehydrogenase 2, ALDH2)是线粒体特异性酶,已被证明参与氧化应激诱导的细胞凋亡,而在心肌细胞中的作用知之甚少。本研究旨在通过用特异性ALDH2抑制剂大豆苷抑制ALDH2活性来研究ALDH2在抗霉素A诱导的心肌细胞凋亡中的作用。应用抗霉素A和大豆苷诱导小鼠心肌细胞,然后测定ALDH2酶活性、细胞内活性氧(reactive oxy gen species, ROS)含量和细胞凋亡,应用RT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测ALDH2 m RNA和蛋白表达。结果表明,抗霉素A (40μg/mL)可诱导新生心肌细胞凋亡,而大豆苷(50μmol/L)能有效地抑制ALDH2活性而对细胞凋亡没有影响,并且可显著增强抗霉素A诱导的心肌细胞凋亡(53.72%～71.33%, p<0.05)。与单独用抗霉素A处理的细胞相比,抗霉素A和大豆苷共处理的心肌细胞中活化的丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)信号传导途径(p38-MAPK)的磷酸化也显著增加。本研究初步表明,改变线粒体ALDH2活性可能是减少氧化损伤诱导的心肌细胞凋亡的潜在选择。 展开更多
关键词 乙醛脱氢酶2 心肌细胞 细胞凋亡 抗霉素A 大豆苷
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大鼠肠缺血/再灌注损伤后乙醛脱氢酶-2对线粒体应激的影响 被引量：2
5
作者 王益群 姚平波 赵红 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期467-470,共4页
目的探讨肠缺血/再灌注(VR)损伤后乙醛脱氢酶-2(ALDH2)对线粒体应激的影响。方法32只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、VR模型组、基因沉默(ALDH2-siRNA)组和空载体(Scrambled-siRNA)组(每组均8只)。结扎肠系膜上动脉血流1h、再灌注2h,建立... 目的探讨肠缺血/再灌注(VR)损伤后乙醛脱氢酶-2(ALDH2)对线粒体应激的影响。方法32只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、VR模型组、基因沉默(ALDH2-siRNA)组和空载体(Scrambled-siRNA)组(每组均8只)。结扎肠系膜上动脉血流1h、再灌注2h,建立肠VR损伤大鼠模型;假手术组不进行结扎。ALDH2-siRNA组和Scrambled-siRNA组于术前24、6、1h分别采用经尾静脉注射ALDH2-siRNA和Scrambled-siRNA混合液各1mL;假手术组、VR模型组则分别注射等量0.9%生理盐水注射液。再灌注2h后取血并处死大鼠取肠组织。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素(IL-6)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)水平;用Western Blot和RT-PCR分别检测肠组织ALDH2及线粒体应激相关因子,如热休克蛋白(HSP60、HSP70)、NIP3蛋白(Nix)及其mRNA的表达。结果与假手术组比较,VR模型组血清炎症因子明显升高[IL-6(ng/L):172.6±38.7比450.3±101.8,P<0.01;TRAF6(ng/L):499.5±142.1比962.5±213.8,P<0.01]及线粒体应激因子蛋白水平明显升高(HSP60:1.00±0.15比4.19±0.38,P<0.01;HSP70:1.00±0.12比3.22±0.41,P<0.01;Nix:1.00±0.12比3.03±0.31,P<0.01),且其mRNA水平明显升高(HSP60:1.00±0.23比11.16±0.40,P<0.01;HSP70:1.00±0.14比5.13±0.61,P<0.01;Nix:1.00±0.11比8.41±0.52,P<0.01),而ALDH2呈低水平表达;与VR模型组比较,ALDH2-siRNA组血清炎性因子水平明显升高[IL-6(ng/L):450.3±101.8比613.3±134.5,P<0.05;TRAF6(ng/L):962.5±213.8比1383.4±238.3,P<0.01)及线粒体应激因子蛋白水平明显升高(HSP60:4.19±0.38比6.02±0.51,P<0.01;HSP70:3.22±0.41比5.11±0.52,P<0.01;Nix:3.03±0.31比4.48±0.50,P<0.01),且其mRNA水平明显升高(HSP60:11.16±0.40比14.87±0.58,P<0.01;HSP70:5.13±0.61比7.17±0.65,P<0.01;Nix:8.41±0.52比9.97±0.78,P<0.01),而ALDH2水平明显降低。结论ALDH2可能介导炎症及线粒体应激信号通路起到抑制炎症反应及调控线粒体应激的稳态作用,从而保护大鼠肠VR损伤。 展开更多
关键词 乙醛脱氢酶-2(aldh2) 肠缺血/再灌注(VR) 炎性因子 线粒体应激
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ALDH2与乳腺浸润性微乳头状癌新辅助化疗的相关性研究 被引量：1
6
作者 付怡如 时倩倩 +2 位作者 牛琛 李帅 付丽 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2021年第23期1201-1207,共7页
目的:检测乳腺浸润性微乳头状癌(invasive micropapillary carcinoma,IMPC)中乙醛脱氢酶2(acetaldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)的表达,探讨ALDH2表达水平对IMPC患者新辅助化疗方案的指导意义。方法:选取2009年1月至2014年5月298例于天... 目的:检测乳腺浸润性微乳头状癌(invasive micropapillary carcinoma,IMPC)中乙醛脱氢酶2(acetaldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)的表达,探讨ALDH2表达水平对IMPC患者新辅助化疗方案的指导意义。方法:选取2009年1月至2014年5月298例于天津医科大学肿瘤医院行新辅助化疗(neoadjuvant chemotherapy,NAC)的乳腺癌患者的临床病理资料,其中IMPC为84例、浸润性导管癌非特殊型(invasive ductal carcinoma no special type,IDC-NOS)为214例。采用倾向评分匹配法成功匹配84例IMPC与IDC-NOS,检测ALDH2在IMPC组和IDC-NOS组中的表达差异,分析IMPC患者中ALDH2不同表达组的临床病理特征、NAC反应分级与预后相关性。结果:ALDH2在IMPC中的表达水平为48.8%(41/84),显著高于IDC-NOS的33.3%(28/84),两者比较差异具有统计学意义(P=0.041);IMPC患者中ALDH2表达水平与N分期(r_(s)=0.348,P=0.017)及p53突变水平(r_(s)=0.262,P=0.016)呈正相关,与NAC反应分级及无病生存率(disease-free survival,DFS)呈负相关(均P<0.05)。结论:在IMPC中ALDH2高表达且与NAC反应分级及DFS呈负相关。针对ALDH2高表达的IMPC患者应尽早行手术切除,以延长生存预后。 展开更多
关键词 乙醛脱氢酶2 浸润性微乳头状癌 乳腺癌 新辅助化疗
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精准医学实验在医学实验课程中的实践与探索
7
作者 李姣 贾松 +3 位作者 许洁 徐磊 徐国彤 吕立夏 《实验室科学》 2018年第2期15-18,共4页
精准医学代表了一种生命医学发展的方向,将精准医学实验融入到医学生的分子生物学实验中,学生通过抽提自身基因组DNA,以及荧光定量PCR分析乙醛脱氢酶2(ALDH2)的基因多态性,同时结合心绞痛的临床用药硝酸甘油,初步根据ALDH2的多态性来分... 精准医学代表了一种生命医学发展的方向,将精准医学实验融入到医学生的分子生物学实验中,学生通过抽提自身基因组DNA,以及荧光定量PCR分析乙醛脱氢酶2(ALDH2)的基因多态性,同时结合心绞痛的临床用药硝酸甘油,初步根据ALDH2的多态性来分析硝酸甘油对缓解个体心绞痛的药效作用。结合精准医学的理念和分子生物学的前沿技术激发学生的思考,更好地理解个体化医疗的方法和意义,为将来的临床应用打下基础。 展开更多
关键词 精准医学 乙醛脱氢酶2 硝酸甘油 分子生物学实验
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人乙醛脱氢酶2的原核表达及条件的优化
8
作者 黄娟 张小骥 +3 位作者 刘传青 向玲娟 陈孝平 吴元欣 《化学与生物工程》 CAS 2014年第6期25-27,30,共4页
通过双酶切、连接转化等方法将人乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因克隆至载体pGEX-4T-1上,构建原核表达重组质粒pGEX-4T-1-ALDH2。重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)后经IPTG诱导,SDS-PAGE分析表明目的蛋白得到大量表达。由于此载体本身带有融合蛋... 通过双酶切、连接转化等方法将人乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因克隆至载体pGEX-4T-1上,构建原核表达重组质粒pGEX-4T-1-ALDH2。重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)后经IPTG诱导,SDS-PAGE分析表明目的蛋白得到大量表达。由于此载体本身带有融合蛋白标签GST(谷胱甘肽转移酶),所以得到了部分可溶性的目的蛋白。通过对表达条件进行探讨,发现在28℃下,以终浓度0.1mmol·L-1的IPTG诱导表达10h,可溶性的目的蛋白约占总蛋白的25%。表明,融合蛋白标签GST及较低的诱导温度有利于提高人乙醛脱氢酶2基因在大肠杆菌内的可溶性表达。 展开更多
关键词 乙醛脱氢酶2 原核表达 融合蛋白 优化
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