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细菌脲酶蛋白复合物及其活化机制 被引量:16
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作者 李晓姣 赵圣国 +2 位作者 郑楠 程建波 王加启 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期204-215,共12页
脲酶能够催化尿素分解生成氨,在农业和医学领域中具有重要的意义。细菌脲酶蛋白包括结构蛋白(UreA、UreB和UreC)和辅助蛋白(UreD/UreH、UreE、UreF和UreG),它们在脲酶活化过程中各自具有独特的作用,结构蛋白形成脲酶活性中心,而辅助蛋... 脲酶能够催化尿素分解生成氨,在农业和医学领域中具有重要的意义。细菌脲酶蛋白包括结构蛋白(UreA、UreB和UreC)和辅助蛋白(UreD/UreH、UreE、UreF和UreG),它们在脲酶活化过程中各自具有独特的作用,结构蛋白形成脲酶活性中心,而辅助蛋白主要负责镍离子的传递。文中综述了细菌脲酶蛋白复合物的结构和功能,以及各蛋白之间如何相互作用完成其活化过程,以期为脲酶活性调控研究及脲酶抑制剂开发等提供理论指导。 展开更多
关键词 细菌脲酶 结构蛋白 辅助蛋白 活化机制
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Molecular Characteristics,Functions,and Related Pathogenicity of MERS-CoV Proteins 被引量:6
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作者 Yan-Hua Li Chen-Yu Hu +2 位作者 Nan-Ping Wu Hang-Ping Yao Lan-Juan Li 《Engineering》 SCIE EI 2019年第5期940-947,共8页
Middle East respiratory syndrome(MERS)is a viral respiratory disease caused by a de novo coronavirus—MERS-CoV—that is associated with high mortality.However,the mechanism by which MERS-CoV infects humans remains unc... Middle East respiratory syndrome(MERS)is a viral respiratory disease caused by a de novo coronavirus—MERS-CoV—that is associated with high mortality.However,the mechanism by which MERS-CoV infects humans remains unclear.To date,there is no effective vaccine or antibody for human immunity and treatment,other than the safety and tolerability of the fully human polyclonal Immunoglobulin G(IgG)antibody(SAB-301)as a putative therapeutic agent specific for MERS.Although rapid diagnostic and public health measures are currently being implemented,new cases of MERS-CoV infection are still being reported.Therefore,various effective measures should be taken to prevent the serious impact of similar epidemics in the future.Further investigation of the epidemiology and pathogenesis of the virus,as well as the development of effective therapeutic and prophylactic anti-MERS-CoV infections,is necessary.For this purpose,detailed information on MERS-CoV proteins is needed.In this review,we describe the major structural and nonstructural proteins of MERS-CoV and summarize different potential strategies for limiting the outbreak of MERS-CoV.The combination of computational biology and virology can accelerate the advanced design and development of effective peptide therapeutics against MERS-CoV.In summary,this review provides important information about the progress of the elimination of MERS,from prevention to treatment. 展开更多
关键词 MERS-CoV SPIKE protein Structural protein accessory protein Nonstructural protein
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细胞骨架纤维间的相互联系 被引量:6
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作者 赵霞 刘全宏 +1 位作者 王筱冰 米娜 《细胞生物学杂志》 CSCD 2008年第2期191-195,共5页
细胞骨架是由微丝、微管及中间纤维组成的蛋白质纤维网络体系。三种骨架纤维具有不同的形态、结构和功能特征,它们在细胞中彼此联系、互相依赖,共同构成完整的细胞骨架系统,在细胞的各项生命活动中起着重要的作用。认识与研究细胞骨架... 细胞骨架是由微丝、微管及中间纤维组成的蛋白质纤维网络体系。三种骨架纤维具有不同的形态、结构和功能特征,它们在细胞中彼此联系、互相依赖,共同构成完整的细胞骨架系统,在细胞的各项生命活动中起着重要的作用。认识与研究细胞骨架的这三种纤维之间存在的相互联系,揭示它们作用的分子机制,对全面、科学的认识细胞骨架系统在细胞中起所的作用以及对于科学研究都有着重要的意义。 展开更多
关键词 细胞骨架 微丝 微管 中间纤维 辅助蛋白
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Juvenile hormone acts on male accessory gland function via regulating L-asparaginase expression and triacylglycerol mobilization in Aedes aegypti 被引量:2
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作者 Xiang-Yang Lyu Xue-Li Wang +2 位作者 Dan-Qian Geng Hong Jiang Zhen Zou 《Insect Science》 SCIE CAS CSCD 2023年第1期81-94,共14页
Hormones control the reproductive development of Aedes aegypti mosquitoes.The adult male reproductive process and mating behavior require adequate nutrients and energy.Understanding the molecular mechanism linking hor... Hormones control the reproductive development of Aedes aegypti mosquitoes.The adult male reproductive process and mating behavior require adequate nutrients and energy.Understanding the molecular mechanism linking hormones,energy metabolism,and reproduction in male mosquitoes is important.In this study,we found that the size of the male accessory gland,an essential part of the male reproductive system,gradually increased after eclosion.However,it was significantly reduced in male mosquitoes deficient in methoprene-tolerant(Met),the receptor of juvenile hormone.Likewise,egg hatchability of females that mated with Met-depleted males showed the same downward trend.The mRNA level of the gene encoding accessory gland protein,l-asparaginase(ASNase),was reduced in Met dsRNA-treated males.Electrophoretic mobility shift assay and quantitative reverse transcription-PCR results revealed that Met was capable of binding directly to the promoter of ASNase and activated its transcription.RNA interference of ASNase in males resulted in the reduction of egg hatchability of the females with which they mated.These results showed that Met influenced the fecundity of male mosquitoes by directly upregulating the expression of the ASNase gene.Moreover,the levels of triacylglycerol and the sizes of lipid droplets were decreased by 72-78 h after eclosion in the fat body cells,whereas both of them increased in Met-depleted male mosquitoes,indicating that Met knockdown reduced lipid catabolism.These data demonstrate that Met might influence the egg hatchability of females by regulating lipid metabolism and the development of the male accessory gland in male mosquitoes. 展开更多
关键词 accessory gland protein energy juvenile hormone lipid metabolism male accessory gland male mosquito
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Characterization of humoral immune responses against SARS-CoV-2 accessory proteins in infected patients and mouse model
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作者 Yuming Li Yanhong Tang +23 位作者 Xiaoqian Wang Airu Zhu Dongdong Liu Yiyun He Hu Guo Jie Zheng Xinzhuo Liu Fengyu Chi Yanqun Wang Zhen Zhuang Zhaoyong Zhang Donglan Liu Zhao Chen Fang Li Wei Ran Kuai Yu Dong Wang Liyan Wen Jianfen Zhuo Yanjun Zhang Yin Xi Jingxian Zhao Jincun Zhao Jing Sun 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2024年第3期414-421,共8页
Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2(SARS-CoV-2),the causative agent of COVID-19,encodes several accessory proteins that have been shown to play crucial roles in regulating the innate immune response.Howeve... Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2(SARS-CoV-2),the causative agent of COVID-19,encodes several accessory proteins that have been shown to play crucial roles in regulating the innate immune response.However,their expressions in infected cells and immunogenicity in infected humans and mice are still not fully understood.This study utilized various techniques such as luciferase immunoprecipitation system(LIPS),immunofluorescence assay(IFA),and western blot(WB)to detect accessory protein-specific antibodies in sera of COVID-19 patients.Specific antibodies to proteins 3a,3b,7b,8 and 9c can be detected by LIPS,but only protein 3a antibody was detected by IFA or WB.Antibodies against proteins 3a and 7b were only detected in ICU patients,which may serve as a marker for predicting disease progression.Further,we investigated the expression of accessory proteins in SARS-CoV-2-infected cells and identified the expressions of proteins 3a,6,7a,8,and 9b.We also analyzed their ability to induce antibodies in immunized mice and found that only proteins 3a,6,7a,8,9b and 9c were able to induce measurable antibody productions,but these antibodies lacked neutralizing activities and did not protect mice from SARS-CoV-2 infection.Our findings validate the expression of SARS-CoV-2 accessory proteins and elucidate their humoral immune response,providing a basis for protein detection assays and their role in pathogenesis. 展开更多
关键词 SARS-CoV-2 accessory protein Humoral immune responses COVID-19 Mouse model
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猪δ冠状病毒辅助蛋白研究进展
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作者 张蕙畅 方谱县 +1 位作者 方六荣 肖少波 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第1期213-221,共9页
猪δ冠状病毒(PDCoV)是一种新发现的猪肠道冠状病毒,可引起新生仔猪的腹泻、呕吐、脱水、死亡,而且具有跨种感染潜能,给养猪业和公共卫生构成了巨大威胁。冠状病毒的辅助蛋白(accessory protein)是一类功能特殊的蛋白,不同属甚至同属不... 猪δ冠状病毒(PDCoV)是一种新发现的猪肠道冠状病毒,可引起新生仔猪的腹泻、呕吐、脱水、死亡,而且具有跨种感染潜能,给养猪业和公共卫生构成了巨大威胁。冠状病毒的辅助蛋白(accessory protein)是一类功能特殊的蛋白,不同属甚至同属不同种的冠状病毒编码的辅助蛋白数量、同源性均存在较大差异,具有属或种特异性。虽然辅助蛋白是冠状病毒增殖非必需的,但在调控宿主天然免疫、病毒复制与致病性中发挥重要作用。目前,已证实PDCoV至少编码3个辅助蛋白,而且近年来在PDCoV辅助蛋白的功能研究方面取得了显著进展。本文简要介绍了PDCoV辅助蛋白的鉴定及其在免疫调控和致病性中的作用,并对今后的研究进行了展望。 展开更多
关键词 猪δ冠状病毒 辅助蛋白 感染 免疫抑制 致病性
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猪δ冠状病毒主要蛋白功能研究进展 被引量:1
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作者 黄瑶 曹飞 +6 位作者 李凤琴 谷思睿 王玉玲 岳健国 徐志文 周远成 朱玲 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期738-745,共8页
猪δ冠状病毒(Porcine Deltacoronavirus,PDCoV)是冠状病毒科,δ冠状病毒属成员,为单股正链RNA病毒。由于猪δ冠状病毒是一种新型肠道冠状病毒(于2012年首次报道),目前对其研究较少,缺少商品化的疫苗。对疫病的防控无疫苗可用,一旦发病... 猪δ冠状病毒(Porcine Deltacoronavirus,PDCoV)是冠状病毒科,δ冠状病毒属成员,为单股正链RNA病毒。由于猪δ冠状病毒是一种新型肠道冠状病毒(于2012年首次报道),目前对其研究较少,缺少商品化的疫苗。对疫病的防控无疫苗可用,一旦发病,会对猪场造成严重损失。本文综述了已有的关于猪δ冠状病毒结构蛋白、辅助蛋白、非结构蛋白等的特点和功能,以期为深入研究PDCoV致病机制和免疫机理提供参考,从而有助于其疫苗研发。 展开更多
关键词 猪δ冠状病毒(PDCoV) 结构蛋白 辅助蛋白 非结构蛋白 功能研究
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鸡传染性支气管炎病毒辅助蛋白研究进展 被引量:2
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作者 赵秀美 周生 +5 位作者 姜逸 俞燕 高明燕 程旭 李建梅 戴有礼 《中国家禽》 北大核心 2022年第1期97-101,共5页
鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的高度接触性传染病,给养殖生产造成巨大的经济损失。近年来随着反向遗传操作技术的发展,国内外学者在分子生物学水平对IBV... 鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的高度接触性传染病,给养殖生产造成巨大的经济损失。近年来随着反向遗传操作技术的发展,国内外学者在分子生物学水平对IBV基因组结构与功能开展了深入研究,在IBV编码的结构蛋白和辅助蛋白功能研究方面取得了重要进展。文章就IBV辅助蛋白对病毒复制、病毒毒力的影响以及辅助蛋白在疾病预防方面的研究进行总结,为IBV辅助蛋白的功能研究及减毒活疫苗研发提供新的方向。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 辅助蛋白 致病性 疫苗
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急性铅染毒对河南华溪蟹副性腺诱导精子顶体反应的影响 被引量:1
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作者 李娜 许鹏 王兰 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1571-1577,共7页
为探究河南华溪蟹副性腺的功能以及铅对副性腺功能的影响和毒性机理,首先采用钙离子载体A23187诱导法对河南华溪蟹进行精子顶体反应诱导实验,结果显示副性腺匀浆+A23187组合下的顶体反应诱导率最高,可达78%,这提示河南华溪蟹副性腺具有... 为探究河南华溪蟹副性腺的功能以及铅对副性腺功能的影响和毒性机理,首先采用钙离子载体A23187诱导法对河南华溪蟹进行精子顶体反应诱导实验,结果显示副性腺匀浆+A23187组合下的顶体反应诱导率最高,可达78%,这提示河南华溪蟹副性腺具有调节精子顶体反应的作用。在此基础上采用急性铅染毒的方法,设1个对照组和5个铅处理组(3.675、7.35、14.70、29.40和58.80 mg/L),染毒时间分别为3、5和7 d,检测了铅染毒后的副性腺对精子顶体反应诱导率的影响,以及染毒后副性腺中活性氧(ROS)含量、蛋白质羰基化(PCO)含量、DNA-蛋白质交联率(DPC)的变化。结果显示,随着铅染毒剂量的增加和染毒时间的延长,精子顶体反应诱导率明显下降,副性腺中ROS含量和PCO含量升高,但DPC无明显变化。研究表明,铅对河南华溪蟹副性腺有明显的生殖毒性,可降低其在精子顶体反应诱导过程中的作用,主要原因是铅诱导产生的ROS使副性腺中蛋白质发生了氧化损伤。 展开更多
关键词 河南华溪蟹 副性腺 顶体反应 蛋白质羰基化 DNA-蛋白质交联率
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Mating behavior induces changes of expression of Fos protein,plasma testosterone and androgen receptors in the accessory olfactory bulb (AOB) of the male mandarin vole Microtus mandarinus 被引量:1
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作者 Fengqin HE Fadao TAI 《Current Zoology》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第4期288-295,共8页
In order to investigate the neuroendocrine mechanism of the mating behavior in the adult male mandarin voles Microtus mandarinus,the radioimmunoassay(RIA)and immunohistochemistry methods were used to investigate the d... In order to investigate the neuroendocrine mechanism of the mating behavior in the adult male mandarin voles Microtus mandarinus,the radioimmunoassay(RIA)and immunohistochemistry methods were used to investigate the differences in plasma testosterone(T)concentrations and distribution of T immunoreactive neurons(T-IRs),androgen receptor immunoreactive neurons(AR-IRs)and Fos protein immunoreactive neurons(Fos-IRs)in the accessory olfactory bulb(AOB)and the main olfactory bulb(MOB)following exposure to clean hard-wood shavings(control group),soiled bedding(exposure group)or contact with an estrous female(mating group).Results showed that plasma T concentration was significantly higher in the mating group than that in the exposure group,and both the mating group and the exposure group displayed significantly higher plasma T concentration than the control group.T-IRs,AR-IRs and Fos-IRs were investigated with the immunohistochemistry method in granule cell(GC)and mitral cell(MC)of the MOB and the AOB in the three groups.There were significantly more T-IRs,AR-IRs and Fos-IRs in MC and GC of the AOB in the mating group than that in the exposure group or the control group.T-IRs,AR-IRs and Fos-IRs did not show significant differences between the exposure group and the control group.Furthermore,obvious differences in MC and GC of the MOB were not found among the three groups.The results confirm that both changes of T and AR in the AOB might be underlying mating behavior in the adult male mandarin voles. 展开更多
关键词 Mandarin voles Microtus mandarinus Main olfactory bulb (MOB) accessory olfactory bulb (AOB) Testosterone(T) Androgen receptor (AR) Fos protein Mating behavior
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泡沫逆转录病毒Bet蛋白的研究进展
11
作者 高原 孙燕 +3 位作者 李治 刘清梅 刘万红 何小华 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期285-290,共6页
泡沫逆转录病毒能长期感染哺乳动物宿主而不引发疾病,这一特点引起研究者们极大兴趣。有研究发现,泡沫逆转录病毒的辅助蛋白Bet不仅能调控病毒的基因表达和感染周期,对病毒慢性感染的建立有重要作用;还能阻止宿主细胞防御因子APOBEC3对... 泡沫逆转录病毒能长期感染哺乳动物宿主而不引发疾病,这一特点引起研究者们极大兴趣。有研究发现,泡沫逆转录病毒的辅助蛋白Bet不仅能调控病毒的基因表达和感染周期,对病毒慢性感染的建立有重要作用;还能阻止宿主细胞防御因子APOBEC3对病毒复制产生干扰,与病毒持续性感染的维持有关。为了阐明Bet在病毒复制和感染时所发挥的作用,本文对近年来有关Bet蛋白功能的研究进行了分析和总结。 展开更多
关键词 泡沫逆转录病毒 辅助蛋白 基因表达 感染周期 细胞防御因子
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镉对河南华溪蟹副性腺抗氧化酶活性及脂质、蛋白质和DNA的影响 被引量:6
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作者 侯宇华 李娜 +2 位作者 李丹 井维鑫 王兰 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期621-626,共6页
随着现代工业化的发展,重金属对水生生物的毒性影响已经引起了广泛的关注。其中,镉作为一种广泛存在的重金属污染物,具有一定的生殖毒性。研究发现,雄性生殖系统是其作用的重要靶器官,镉对精巢、精子的运动能力、成活率和受精能力均能... 随着现代工业化的发展,重金属对水生生物的毒性影响已经引起了广泛的关注。其中,镉作为一种广泛存在的重金属污染物,具有一定的生殖毒性。研究发现,雄性生殖系统是其作用的重要靶器官,镉对精巢、精子的运动能力、成活率和受精能力均能产生影响。副性腺是溪蟹雄性生殖系统的重要组成部分。关于副性腺的研究主要集中在昆虫和哺乳动物类。 展开更多
关键词 河南华溪蟹 副性腺 抗氧化酶活性 脂质过氧化水平 DNA-蛋白质交联率 蛋白质羰基化含量
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溶藻弧菌附着定植因子ACFA蛋白的原核表达、抗原性鉴定及生物信息学分析 被引量:6
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作者 刘祥 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第7期1755-1760,共6页
溶藻弧菌附着定植因子ACFA蛋白具有很好的免疫原性,在疫苗上有应用前景。本试验通过分子克隆获得ACFA蚕白的表达菌株,利用SDS.PAGE切胶纯化与尿素浓度梯度复性获得ACFA蛋白,免疫小鼠制备抗血清,Western-blotting检测发现ACFA蛋白... 溶藻弧菌附着定植因子ACFA蛋白具有很好的免疫原性,在疫苗上有应用前景。本试验通过分子克隆获得ACFA蚕白的表达菌株,利用SDS.PAGE切胶纯化与尿素浓度梯度复性获得ACFA蛋白,免疫小鼠制备抗血清,Western-blotting检测发现ACFA蛋白具有很好的抗原性。利用在线软件预测ACFA蛋白为亲水的分泌型蛋白,存在多个酶切位点;采用TMHMM Serverv.2.0程序预测ACFA无跨膜结构并定位于细胞膜外;SOPMA服务器预测ACFA二级结构中含无规则卷曲32.56%,a-螺旋25,58%,β-转角6.05%,β-片层35.81%。通过SignalP 4.1软件分析显示,ACFA的1—18位氨基酸为信号肽序列。通过Swiss-Model程序预测的三维结构显示,ACFA蛋白没有配体。利用ABCprvd和BepiPred方案,预测ACFA存在4个B细胞表位。运用神经网络与量化矩阵法预测ACFA具有2个CTL表位。使用MHC—II类分子结合肽在线程序预测发现ACFA存在2个n表位。 展开更多
关键词 溶藻弧菌 ACFA蛋白 细胞表位 蛋白结构 预测
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IL-33/ST2信号通路与骨代谢的研究进展 被引量:5
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作者 朱燕霞 格根塔娜 《口腔疾病防治》 2019年第3期202-204,共3页
白细胞介素-33(interleukin-33,IL-33)是白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)细胞因子超家族的一个新成员,它可以激活肥大细胞、淋巴细胞、巨噬细胞,产生Th2细胞因子,并且在炎症、感染、自身免疫性疾病中发挥其重要作用。IL-33的经典信号... 白细胞介素-33(interleukin-33,IL-33)是白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)细胞因子超家族的一个新成员,它可以激活肥大细胞、淋巴细胞、巨噬细胞,产生Th2细胞因子,并且在炎症、感染、自身免疫性疾病中发挥其重要作用。IL-33的经典信号途径是通过ST2和IL-1受体辅助蛋白(interleukin-1 receptor accessory protein,IL-1 RAcP)组成的异三聚体,将信号转导至细胞内。IL-33/ST2信号通路通过激活T、B淋巴细胞等方面影响骨代谢。本文就IL-33/ST2信号通路在骨代谢中的作用研究作一综述,复习文献结果表明,IL-33在骨代谢方面的作用仍存在争议,一些学者研究认为IL-33可抑制破骨细胞的生成,并且在生理性骨重建中起作用;但也有学者认为IL-33可促进破骨细胞的形成及分化,从而导致骨吸收。IL-33及其信号通路参与牙周炎及根尖周炎牙槽骨骨代谢,具体机制尚不清楚,还需进一步研究。 展开更多
关键词 白细胞介素-33 ST2 破骨细胞 成骨细胞 骨代谢 IL-1受体辅助蛋白 牙周炎 根尖周炎
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HIV-1辅助蛋白Vpr多肽抗体的制备与鉴定 被引量:3
15
作者 孙俊 孟哲峰 +2 位作者 徐建青 张晓燕 吕建新 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期151-157,共7页
预测Vpr蛋白的B细胞抗原表位,并利用合成的B细胞表位肽制备Vpr特异性抗体。应用生物信息学技术获得Vpr蛋白共享氨基酸序列并预测其潜在B细胞抗原表位,与载体蛋白血蓝蛋白(KLH)偶联合成多肽并免疫家兔,鉴定及纯化获得的多肽特异性抗体。... 预测Vpr蛋白的B细胞抗原表位,并利用合成的B细胞表位肽制备Vpr特异性抗体。应用生物信息学技术获得Vpr蛋白共享氨基酸序列并预测其潜在B细胞抗原表位,与载体蛋白血蓝蛋白(KLH)偶联合成多肽并免疫家兔,鉴定及纯化获得的多肽特异性抗体。软件预测显示,Vpr蛋白N端的第3~19位(N)和C端的第82~95位(C)氨基酸序列为潜在B细胞抗原表位;ELISA检测抗血清中多肽特异性抗体的效价都达到1:105以上;Western-Blotting结果显示,无论对HIV-1B亚型还是CRF07_BC重组型的Vpr蛋白,其多肽N抗体和C抗体均能特异性识别;免疫沉淀结果显示,Vpr多肽N和C抗体也能特异性结合未变性的野生型Vpr或GFP-Vpr融合蛋白。利用生物信息学技术能成功预测Vpr蛋白B细胞抗原表位,免疫所获得的抗体具有较好的特异性和应用性。 展开更多
关键词 HIV-1辅助蛋白Vpr B细胞表位 表位预测 多肽抗体
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磷脂酶A1辅助蛋白N端截短菌株的构建及其优化表达 被引量:3
16
作者 朱昊 薛正莲 +2 位作者 王洲 陈阿娜 杨蒙 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期34-38,45,共6页
根据GenBank公布的磷脂酶A1辅助蛋白plaS基因序列,通过生物信息学软件分析,截短辅助蛋白PlaS的N端35AA。将截短后的辅助蛋白plaS基因经PCR扩增技术与原核表达载体pET-28a(+)连接,再转化到BL21(DE3)宿主菌中进行融合表达,从而成功构建dS... 根据GenBank公布的磷脂酶A1辅助蛋白plaS基因序列,通过生物信息学软件分析,截短辅助蛋白PlaS的N端35AA。将截短后的辅助蛋白plaS基因经PCR扩增技术与原核表达载体pET-28a(+)连接,再转化到BL21(DE3)宿主菌中进行融合表达,从而成功构建dSP28表达菌株。用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导辅助蛋白表达,对诱导时间、IPTG浓度、起始菌体浓度(OD_(600nm))和温度逐项进行优化,摸索得到辅助蛋白的最佳诱导表达条件为诱导时间8 h,IPTG浓度0.2 mmol/L,起始体浓度(OD_(600nm))0.7,温度40℃,转速200 r/min。在此条件下,对P28、SP28和dSP28发酵中OD_(600nm)进行测定,结果表明,加入IPTG诱导后P28和dSP28能够快速的增殖,且诱导8 h后仍显示增长趋势,而SP28的生长受到明显的抑制作用。 展开更多
关键词 磷脂酶A1辅助蛋白PlaS N端截短 原核表达 表达条件优化
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苏云金杆菌辅助蛋白P19对杀虫晶体蛋白Cry11Aa表达的影响 被引量:1
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作者 师永霞 曾少灵 +2 位作者 袁美妗 孙钒 庞义 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期353-357,共5页
苏云金杆菌以色列亚种的p19基因、cry11Aa基因和p20基因位于同一操纵子上,据推测辅助蛋白P19可能与Cry11Aa蛋白的晶体化相关。本研究利用穿梭载体pHT3101构建了两个重组质粒pHcy1和pHcy3,两质粒均携带cry11Aa基因,但后者完全缺失了cry1... 苏云金杆菌以色列亚种的p19基因、cry11Aa基因和p20基因位于同一操纵子上,据推测辅助蛋白P19可能与Cry11Aa蛋白的晶体化相关。本研究利用穿梭载体pHT3101构建了两个重组质粒pHcy1和pHcy3,两质粒均携带cry11Aa基因,但后者完全缺失了cry11Aa基因上游的p19基因。将重组质粒电激转化至苏云金杆菌无晶体突变株4Q7中进行蛋白表达,SDS-PAGE结果表明在4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy3)中均能检测到正常表达的Cry11Aa蛋白,但单位体积培养液的Cry11Aa蛋白在辅助蛋白P19存在时的表达量明显高于其单独表达的表达量;透射电镜观察显示两菌株中的Cry11Aa蛋白形成了大小相近、形状相似的双梯形晶体;另外,生物测定结果表明重组菌株4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy3)对三龄致倦库蚊的杀虫活性没有显著性差异。该现象说明辅助蛋白P19的缺失对Cry11Aa蛋白的晶体形成和杀蚊活性没有影响,但P19作为分子伴侣在一定程度上帮助提高了Cry11Aa蛋白的表达水平。 展开更多
关键词 苏云金杆菌 辅助蛋白P19 晶体蛋白Cry11Aa 生物测定
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白介素1受体辅助蛋白在儿童和成人低级别胶质瘤中的作用 被引量:3
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作者 邢树山 胡万宁 +2 位作者 赵喜庆 刘文庆 宫剑 《首都医科大学学报》 CAS 2013年第2期258-263,共6页
目的探讨白介素1受体辅助蛋白(interleukin 1 receptor accessory protein,IL-1RAP)在成人与儿童低级别胶质瘤中的表达,分析其与预后的相关性。方法应用高通量全基因分析、免疫组织化学法、qRT-PCR和Western blotting方法对20例低级别... 目的探讨白介素1受体辅助蛋白(interleukin 1 receptor accessory protein,IL-1RAP)在成人与儿童低级别胶质瘤中的表达,分析其与预后的相关性。方法应用高通量全基因分析、免疫组织化学法、qRT-PCR和Western blotting方法对20例低级别胶质瘤(成人10例,儿童10例)标本中IL-1RAP的表达进行检测。结果经高通量全基因分析、免疫组织化学、qRT-PCR和Western blotting分析证明IL-1RAP与成人比较,儿童低级别胶质瘤总阳性表达率较低,有统计学意义(100%>30%,Chi-Square=12.439,P<0.05)。结论 IL-1RAP可能在胶质瘤的发生、发展过程之中扮演重要的角色。IL-1RAP可能成为评价低级别胶质瘤预后差异的重要参考指标及潜在的药物靶点。 展开更多
关键词 白介素1受体辅助蛋白 低级别胶质瘤 成人 儿童
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高脲酶活性褐土的宏基因组测序与微生物来源脲酶基因的筛选 被引量:2
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作者 轩贝贝 郭建华 +10 位作者 王爱国 牟文君 戴华鑫 闫鼎 蔡宪杰 奚家勤 薛超群 周汉平 张艳玲 胡利伟 宋纪真 《烟草科技》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1-9,共9页
为明确褐土中产脲酶微生物的来源,采集河南省郑州、洛阳、许昌、平顶山和安阳5个产区的土样并检测其脲酶活性,将脲酶活性最高的土样进行富集培养,提取土壤DNA构建宏基因组文库,采用宏基因组测序技术对褐土中的产脲酶微生物进行分析。结... 为明确褐土中产脲酶微生物的来源,采集河南省郑州、洛阳、许昌、平顶山和安阳5个产区的土样并检测其脲酶活性,将脲酶活性最高的土样进行富集培养,提取土壤DNA构建宏基因组文库,采用宏基因组测序技术对褐土中的产脲酶微生物进行分析。结果表明:褐土脲酶活性在8.34~67.18μg·d^-1·g^-1之间。各取样点脲酶活性最高值分别为46.98、67.18、57.68、45.97和64.15μg·d^-1·g^-1。利用宏基因组测序数据进行序列组装,筛选到406个脲酶结构蛋白和437个脲酶辅助蛋白;物种注释表明,褐土中产脲酶微生物以细菌为主,以及少部分真菌和古细菌。产脲酶细菌与链霉菌属(Streptomyces)、节杆菌属(Arthrobacter)和不动杆菌属(Acinetobacter)等亲缘关系最近,与产脲酶真菌亲缘关系较近的有足马杜拉分枝菌(Madurella mycetomatis)、蓝莓枝枯病菌(Neofusicoccum parvum)和嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophilum)等;产脲酶古细菌与亚硝化球菌属(Nitrososphaera)和氨氧化古菌属(Nitrosopumilus)等亲缘关系较近,说明部分古细菌可能也参与了褐土中尿素的降解。 展开更多
关键词 褐土 脲酶活性 宏基因组学 脲酶 脲酶辅助蛋白 微生物
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产纤维素酶辅助蛋白菌种筛选及蛋白增效作用条件研究 被引量:1
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作者 陶恒 覃益民 +1 位作者 郑丽珍 张静茹 《安徽农业科学》 CAS 2012年第10期5737-5738,5762,共3页
[目的]筛选产纤维素酶辅助蛋白的菌种,测定该辅助蛋白作用条件。[方法]从纤维素降解菌的生存环境中,寻找到产纤维素酶辅助蛋白的菌株,通过Sephadex-G75分子筛层析对产纤维素酶辅助蛋白菌株胞外培养液进行蛋白分离纯化,分析辅助蛋白的增... [目的]筛选产纤维素酶辅助蛋白的菌种,测定该辅助蛋白作用条件。[方法]从纤维素降解菌的生存环境中,寻找到产纤维素酶辅助蛋白的菌株,通过Sephadex-G75分子筛层析对产纤维素酶辅助蛋白菌株胞外培养液进行蛋白分离纯化,分析辅助蛋白的增效作用,并进一步探讨其增效作用适宜的温度及pH条件。[结果]从纤维素降解菌的生长环境中分离得到80余株菌株,经液体培养、胞外蛋白检测筛选出3株产纤维素酶辅助蛋白的菌株,分别命名为BAP1、BAP2、BAP3。经Sephadex-G75分子筛层析纯化,获得了最大增效率分别为35%,27%及47%的辅助蛋白。测定其中辅助增效作用最明显的BAP3峰2蛋白增效作用条件为温度40~60℃、pH 4.0~6.0。[结论]该研究为通过菌体诱变和培养条件优化等手段获得高效纤维素酶辅助蛋白提供了较好的原始菌株资源。 展开更多
关键词 纤维素酶 纤维素酶辅助蛋白 增效条件
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