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家蝇Actin-5 C基因启动子的生物信息学分析及载体构建
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作者 王蓝晨 王昱 +2 位作者 王颖 杨仕赛 朱贵明 《贵州医科大学学报》 CAS 2021年第3期263-268,274,共7页
目的运用生物信息学分析家蝇(Musca domestica L.)肌动蛋白5 C(Actin-5 C)基因,构建Actin-5 C启动子双荧光素酶报告基因表达载体。方法使用伯克利果蝇基因组计划(BDGP)在线分析软件、Promoter 2.0和在线比对启动子网站(FPROM)等多种启... 目的运用生物信息学分析家蝇(Musca domestica L.)肌动蛋白5 C(Actin-5 C)基因,构建Actin-5 C启动子双荧光素酶报告基因表达载体。方法使用伯克利果蝇基因组计划(BDGP)在线分析软件、Promoter 2.0和在线比对启动子网站(FPROM)等多种启动子预测工具,分析、预测家蝇肌动蛋白Actin-5 C基因5′端上游非编码区,根据预测结果构建截短式启动子萤火虫荧光素酶报告基因重组质粒,转染草地贪夜蛾卵巢细胞系sf9细胞,并使用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)进行萤火虫荧光素酶报告基因的检测。结果Actin-5 C基因5′端上游的-2609~-94 bp,预测有启动活性,且分值达0.8分以上,其中-2198~-2148 bp分值最高、达0.98分;在-220 bp和-1444 bp处分别检测到CAAT和TATA盒信号,经比较取最有可能的1156 bp(-1236~-80 bp)、1745 bp(-1825~-80 bp)及2059 bp(-2139~-80 bp)截断启动子片段,构建pGL 3-1156、pGL 3-1745及pGL 3-2059质粒,RT-PCR检测到3种重组质粒中的萤火虫荧光素酶报告基因转录成功。结论生物信息学预测工具研究家蝇Actin-5 C基因启动子可以简化认知基因的过程,根据预测结果构建了家蝇Actin-5 C基因萤火虫荧光素酶报告基因表达载体。 展开更多
关键词 家蝇 计算生物学 逆转录聚合酶链反应 肌动蛋白5 c基因 启动子 重组质粒
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