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ZNF750对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响及机制研究
1
作者 王婷 潘紫妍 +4 位作者 刘杰 胡晨煜 魏茜茜 陈雨婷 阿米尔·阿卜力孜 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2024年第16期984-992,共9页
目的探讨锌指蛋白750(ZNF750)在子宫内膜癌细胞的增殖、侵袭和迁移中的作用并筛选其调控的潜在靶基因。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞转染ZNF750过表达质粒(OE-ZNF750组)和... 目的探讨锌指蛋白750(ZNF750)在子宫内膜癌细胞的增殖、侵袭和迁移中的作用并筛选其调控的潜在靶基因。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞转染ZNF750过表达质粒(OE-ZNF750组)和ZNF750干扰片段(si-ZNF750组)后ZNF750的mRNA和蛋白质表达水平;细胞计数试剂盒8(CCK8)检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移能力;基因表达微阵列分析结合生物信息学方法筛选ZNF750调控的候选靶基因。设置对照组(NC组),组间比较采用t检验和非参数检验。结果上调ZNF750基因第72 h,CCK8实验结果显示,与NC组(5.79±0.20)相比,OE-ZNF750组(4.70±0.10)Ishikawa细胞的增殖能力降低,t=10.571,P<0.001;Transwell实验结果显示,NC组细胞侵袭数为(156.44±7.84)个,迁移数为(125.55±19.69)个,OE-ZNF750组细胞侵袭数为(103.44±19.21)个,迁移数为(49.33±14.15)个,差异均有统计学意义,t值分别为7.660和9.428,均P<0.001。下调ZNF750基因第72 h,CCK8实验结果显示,与NC组(5.21±0.07)相比,si-ZNF750组(5.59±0.12)Ishikawa细胞的增殖能力升高,t=-5.876,P<0.001;Transwell实验结果显示,NC组细胞侵袭数为(159.11±32.91)个,迁移数为(84.88±11.47)个,si-ZNF750组细胞侵袭数为(314.77±24.06)个,迁移数为(181.11±18.01)个,差异均有统计学意义,t值分别为-11.454和-13.518,均P<0.001。通过基因表达微阵列分析筛选ZNF750的下游靶基因,结果显示,上调ZNF750后,有414个差异表达基因,下调ZNF750后,有50个差异表达基因,结合生物信息学筛选出与癌症相关的基因有RAC2、KLF4、FN1、IGF2和MAGEA2。qRT-PCR结果显示,上/下调ZNF750后,与NC组相比,KLF4、RAC2、MAGEA2和IGF2的mRNA表达水平显著升高/降低,FN1的mRNA表达水平显著降低/升高,差异均有统计学意义,均P<0.05。结论在子宫内膜癌细胞中,ZNF750作为抑癌基因发挥作用,抑制子宫内膜癌细胞增殖、侵袭和迁移,RAC2、KLF4 展开更多
关键词 锌指蛋白750 子宫内膜癌 增殖 侵袭 迁移
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口腔肿瘤干细胞样细胞中锌指蛋白750的潜在靶蛋白筛选
2
作者 姜博 于水 +3 位作者 杨一昆 徐聪 杨红莉 陈海英 《山东医药》 CAS 2023年第15期38-42,共5页
目的筛选锌指蛋白750(ZNF750)在口腔肿瘤干细胞样细胞(CSC-like cell)中的潜在靶蛋白。方法(1)CSC-like cell的富集:采用肿瘤球形成实验富集口腔鳞癌(OSCC)细胞系TCA-83及CAL-27细胞中CSC-like cell细胞。(2)CSC-like cell细胞中ZNF750... 目的筛选锌指蛋白750(ZNF750)在口腔肿瘤干细胞样细胞(CSC-like cell)中的潜在靶蛋白。方法(1)CSC-like cell的富集:采用肿瘤球形成实验富集口腔鳞癌(OSCC)细胞系TCA-83及CAL-27细胞中CSC-like cell细胞。(2)CSC-like cell细胞中ZNF750潜在靶蛋白筛选:将CSC-like cell分为oe-Con组(转导空载体慢病毒)及oeZNF750组(转导过表达ZNF750慢病毒),采用TMT标记定量蛋白质组学技术筛选两组差异表达蛋白,对差异表达蛋白进行生物信息学分析[GO、KEGG及IPR(结构域)分析],从差异表达蛋白中选择与ZNF750关系密切的候选蛋白[角鲨烯合酶(FDFT1)、与糖代谢相关的糖原合成酶(GYS1)、与核糖体相关的核糖体蛋白RPL15及40S核糖体蛋白RPS7以及具有结构分子活性的角蛋白6A、17(KRT6A、KRT17)]进行实时荧光定量PCR(qPCR)验证。从与ZNF750关系密切的候选蛋白中选择FDFT1(与类固醇生物合成有关兼具酶转运活性)作为兴趣蛋白,采用qPCR检测CSC-like cell、口腔鳞癌(OSCC)细胞、正常口腔上皮细胞中FDFT1 mRNA的相对表达量,蛋白质印迹法检测过表达或敲减ZNF750基因的CSC-like cell中FDFT1蛋白相对表达量。结果(1)转导过表达ZNF750基因的CSC-like cell细胞中差异表达蛋白的筛选结果:与oe-Con组相比,oe-ZNF750组中差异表达蛋白共26个,其中上调9个,下调17个。(2)差异表达蛋白生信分析结果及其中与ZNF750关系密切的差异表达蛋白验证结果:GO分析结果显示,差异表达蛋白主要位于细胞内和细胞内非膜结合细胞器,参与生物合成及生物大分子的合成过程;涉及的生物功能包含结构分子活性、糖原合成酶活性、糖脂转运及糖脂结合功能;KEGG信号通路分析结果显示,差异表达蛋白显著富集在类固醇生物合成及糖代谢过程中;IPR分析证明富集的结构域包含糖脂转移蛋白结构域。qPCR结果显示,ZNF750可降低FDFT1、GYS1、RPL15、RPS7、KRT6A、KRT17基因的表达(P均<0.05)。(3)CSC-like 展开更多
关键词 锌指蛋白750 角鲨烯合酶 胆固醇代谢 肿瘤干细胞 蛋白组学测序技术 同位素标记定量技术 口腔鳞癌
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野生型ZNF750负调控E2F2转录活性抑制CAL-27细胞增殖迁移的机制
3
作者 徐聪 杨红莉 +2 位作者 杨一昆 潘丽 陈海英 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2022年第13期966-975,共10页
目的 研究锌指蛋白750(ZNF750)调控E2F转录因子2(E2F2)抑制口腔鳞癌CAL-27细胞增殖、迁移的作用及机制。方法 采用BrdU染色研究ZNF750对CAL-27细胞周期的影响;蛋白质印迹法检测细胞周期依赖性蛋白激酶CDK4、CDK6、活化Caspase-3及E2F2... 目的 研究锌指蛋白750(ZNF750)调控E2F转录因子2(E2F2)抑制口腔鳞癌CAL-27细胞增殖、迁移的作用及机制。方法 采用BrdU染色研究ZNF750对CAL-27细胞周期的影响;蛋白质印迹法检测细胞周期依赖性蛋白激酶CDK4、CDK6、活化Caspase-3及E2F2蛋白的表达;Calcein AM与EthD-1共染研究ZNF750对CAL-27失巢凋亡的影响;肿瘤悬浮成球及Transwell实验研究ZNF750对CAL-27细胞自我更新及侵袭迁移的影响;分析E2F2对CAL-27细胞生物学功能的影响。双荧光素酶报告基因分析ZNF750对系列E2F2启动子截短体的荧光素酶活性的影响;双荧光素酶报告基因实验、CCK-8及细胞划痕实验分别研究野生型及突变型ZNF750对E2F2荧光素酶活性、细胞活性及迁移的影响。结果 与oe-Con相比,过表达ZNF750可使细胞周期阻滞于G期[(50.07±5.74)%,P=0.010]、S期细胞减少[(32.15±2.47)%,P=0.003],抑制CDK4(0.19±0.01,P<0.001)、CDK6(0.27±0.00,P<0.001)表达;促进活化Caspase-3(0.92±0.02,P<0.001)蛋白表达,促进CAL-27细胞失巢凋亡,并抑制细胞的自我更新(8.67±1.15,P=0.009)、侵袭(80.60±2.52,P<0.001)及迁移(52.33±3.51,P<0.001)。然而,干扰ZNF750基因则引起相反的变化。ZNF750的潜在调控靶标E2F2则可促进CAL-27细胞肿瘤球形成,细胞侵袭、迁移增强,而降低细胞的失巢凋亡。荧光素酶报告基因结果显示,ZNF750可抑制E2F2的荧光素酶活性(0.375±0.031,P=0.007),尤其是Z+ET8(-154→+100)截短体组(0.057±0.007,P<0.001)的活性;在蛋白水平也证实,ZNF750可抑制E2F2蛋白表达(0.26±0.14,P=0.003)。此外,突变ZNF750模序(C2H2和PLNLS)则丧失了其对E2F2的调控及对CAL-27细胞活性、细胞迁移的抑制作用。结论 ZNF750主要通过C2H2和PLNLS模序负调控E2F2的表达抑制CAL-27细胞的增殖与迁移。 展开更多
关键词 锌指蛋白750 口腔鳞状细胞癌 E2F转录因子2 细胞增殖 细胞迁移
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