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朊蛋白病诊断标志分子14-3-3Zeta基因亚克隆及其表达 被引量：4
1
作者 沈继龙 SG CHEN 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第5期8-10,共3页
目的　为了制备朊蛋白病特异性实验诊断的标志物及为探讨 14- 3 - 3在神经细胞功能调节中的作用创造条件。方法　根据 14- 3- 3Zeta亚型基因序列设计引物 ,扩增DNA片段 ,经酶切纯化后连接到pCYB3表达载体 ,转化大肠杆菌BL2 1菌株 ,用培... 目的　为了制备朊蛋白病特异性实验诊断的标志物及为探讨 14- 3 - 3在神经细胞功能调节中的作用创造条件。方法　根据 14- 3- 3Zeta亚型基因序列设计引物 ,扩增DNA片段 ,经酶切纯化后连接到pCYB3表达载体 ,转化大肠杆菌BL2 1菌株 ,用培养基筛选 ,经管状凝胶电泳纯化融合蛋白。结果与结论　获取了 14- 3- 3/pCYB3阳性重组体 ,经IPTG诱导及免疫印迹 -增强化学发光 (Westernblot-ECL)鉴定 ,表达出 14- 3- 3/intein -CBD融合蛋白 ,分子量为 82 7kDa . 展开更多
关键词 14-3-3蛋白质 朊蛋白病 zeta基因亚克隆
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重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用 被引量：3
2
作者 钟政荣 沈继龙 +4 位作者 汪学龙 胡元生 沈继录 王家传 李小月 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第4期316-318,共3页
目的制备重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体(McAb),并检测14-3-3蛋白在人体组织器官的分布。方法将筛选出分泌抗人14-3-3zeta的杂交瘤细胞注射入BALB/c小鼠腹腔,制备腹水McAb,用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法纯化,并鉴定其效价、纯度、浓度、特... 目的制备重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体(McAb),并检测14-3-3蛋白在人体组织器官的分布。方法将筛选出分泌抗人14-3-3zeta的杂交瘤细胞注射入BALB/c小鼠腹腔,制备腹水McAb,用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法纯化,并鉴定其效价、纯度、浓度、特异性以及与天然抗原的亲和力,再用此单抗检测14-3-3蛋白在人体组织器官的分布。结果腹水及纯化后的单克隆抗体的效价分别为1∶107和1∶106。纯化后的纯度达97%,浓度为5mg/ml,能识别天然的人14-3-3蛋白,并能有效地识别兔和鼠脑组织的14-3-3蛋白。在人脑、肾、肺、肝、胃、卵巢、乳腺、结肠、胰腺等组织器官中,均检出14-3-3蛋白。结论已成功制备出重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体,并应用于实际检测,为研究14-3-3蛋白在机体生理和病理情况下的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体 制备 鉴定 分布 作用机制
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