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题名新基因ZNFD的克隆及其多克隆抗体的制备
被引量：1
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作者
史群芳
杨世蕊
雷陈
孟祥勋
黄超群
王明华
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机构
苏州大学基础医学与生物科学学院
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出处
《南通大学学报（医学版）》
2008年第3期157-160,164,共5页
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基金
国家自然科学基金资助项目(30700826)
苏州大学医学发展基金资助项目
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文摘
目的:PCR扩增得到新基因ZNFD(Znf domain containing protein),构建pET32a-ZNFD原核表达载体,诱导蛋白表达及制备多克隆抗体。方法:通过PCR的方法克隆新基因ZNFD,选取部分抗原免疫原性较高的部分ORF序列,克隆到原核表达载体pET32a上,利用大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)表达系统表达ZNFD融合蛋白。纯化目的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。通过琼脂糖双向扩散实验和Western blot鉴定其效价和特异性。结果:经测序鉴定已成功克隆ZNFD基因。通过构建原核表达载体pET32a-ZNFD,在大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)中使用IPTG诱导表达,得到相对分子质量约为45 kD的融合蛋白。纯化蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体具有较强的免疫特异性。结论:得到纯化的ZNFD蛋白,制备的多克隆抗体达到了一定的效价,且具有高特异性,为进一步研究ZNFD的功能奠定了实验基础。
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关键词
znfd基因
锌指
原核表达
免疫抗原
多克隆抗体
聚合酶链反应
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Keywords
znfd gene
Zinc finger
Prokaryotic expression
Antigenicity
Polyclonal antibody
Polymerase chain reaction
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分类号
R392
[医药卫生—免疫学]
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