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日本结缕草衰老叶片全长cDNA文库构建及酵母单杂交筛选验证 被引量：6
1
作者 滕珂 檀鹏辉 +3 位作者 范希峰 岳跃森 姜红岩 武菊英 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1486-1493,共8页
脱镁叶绿素脱镁叶绿酸水解酶(Pheophytin pheophorbide hydrolase,PPH)是叶绿素降解过程中的一个关键酶,目前有关日本结缕草(Zoysia japonica)PPH基因的上游调控机制仍不是十分清楚,筛选日本结缕草ZjPPH1基因上游转录因子可以为延长绿... 脱镁叶绿素脱镁叶绿酸水解酶(Pheophytin pheophorbide hydrolase,PPH)是叶绿素降解过程中的一个关键酶,目前有关日本结缕草(Zoysia japonica)PPH基因的上游调控机制仍不是十分清楚,筛选日本结缕草ZjPPH1基因上游转录因子可以为延长绿期延缓衰老提供理论依据。本研究利用Clontech的SMRT cDNA合成技术构建一个日本结缕草衰老叶片的高质量全长cDNA文库,其滴度为2.0×106 cfu·mL-1,插入片段平均长度大于1 kb,cDNA片段插入重组率为100%。该文库的完整性较高,可涵盖绝大多数基因信息,为酵母单杂交筛选奠定了基础。利用酵母单杂交技术,筛选到可与ZjPPH1基因启动子片段结合的候选菌落42个,并对20个候选基因进行测序和生物信息学分析,初步筛选到6个参与细胞生长和衰老过程的重要候选基因,为进一步探索ZjPPH1基因在日本结缕草衰老和叶绿素降解中的上游调控机制提供了理论支撑。 展开更多
关键词 日本结缕草 全长CDNA文库 酵母单杂交 脱镁叶绿素脱镁叶绿酸水解酶基因
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木薯干旱胁迫下离区发育相关基因MeAP_(2-2)酵母单杂交文库构建及其上游调控基因的筛选 被引量：4
2
作者 廖文彬 李雅韵 +2 位作者 杨义伶 王斌 彭明 《中国农学通报》 2015年第9期119-127,共9页
为了研究干旱胁迫下调节木薯叶片脱落相关的重要节点基因及其分子调控网络,以‘华南5号’木薯为实验材料,通过采用酵母单杂交筛选系统,将Me AP2-2启动子中激素与胁迫相关的元件串联后整合入酵母染色体,构建诱饵菌株;采用SMART技术进行离... 为了研究干旱胁迫下调节木薯叶片脱落相关的重要节点基因及其分子调控网络,以‘华南5号’木薯为实验材料,通过采用酵母单杂交筛选系统,将Me AP2-2启动子中激素与胁迫相关的元件串联后整合入酵母染色体,构建诱饵菌株;采用SMART技术进行离区c DNA文库的构建,将离区c DNA与p GADT7-Rec表达载体共同转化诱饵菌株,通过同源重组在酵母细胞内筛选Me AP2-2的上游转录调节因子;利用酵母菌落PCR法获得阳性克隆中的c DNA插入片段,测序后在JGI网站进行Blast分析。结果表明,构建的c DNA文库库容为1.5×106,插入片段大小为250-3000 bp。c DNA插入片段经测序和Blast同源性分析和定量PCR分析,筛选出1个metallothionein protein,1个core histone protein,1个heavymetal-associated protein与Me AP2-2相关的调节因子。实验结果证明酵母单杂交文库构建成功,初步筛选获得了调节Me AP2-2的上游调节因子。为研究木薯干旱胁迫下离区发育的信号转导通路奠定了基础。 展开更多
关键词 木薯离区 酵母单杂交 SMART技术 上游调控基因
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酵母单杂交文库构建及巨峰葡萄VvFT基因启动子上游调控因子筛选 被引量：3
3
作者 黄桂媛 张瑛 +4 位作者 林玲 韩佳宇 时晓芳 曹雄军 郭荣荣 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期2875-2883,共9页
【目的】利用酵母单杂交文库筛选巨峰葡萄VvFT基因启动子上游调控因子,挖掘参与调控葡萄开花时间的因子,为揭示花期转变代谢通路和定向改良葡萄品种提供理论参考。【方法】利用PlantCARE分析预测VvFT基因启动子顺式作用元件,并以VvFT基... 【目的】利用酵母单杂交文库筛选巨峰葡萄VvFT基因启动子上游调控因子,挖掘参与调控葡萄开花时间的因子,为揭示花期转变代谢通路和定向改良葡萄品种提供理论参考。【方法】利用PlantCARE分析预测VvFT基因启动子顺式作用元件,并以VvFT基因启动子为诱饵,利用酵母单杂交文库筛选技术,筛选作用在VvFT基因启动子上游的调控因子。【结果】葡萄VvFT基因启动子区域存在13种启动子顺式作用元件,包括A-box、CAAT-box和TATA-box组成型调控元件;光响应调控元件ATC-motif、Box 4、G-Box和GT1-motif;茉莉酸甲酯(MeJA)响应调控元件CGTCA-motif和TGACG-motif;干旱诱导的MYB结合位点元件MBS;玉米蛋白代谢必需的调控元件O2-site;参与生物钟控制的调控元件circadian;厌氧诱导必需调控元件ARE。以VvFT基因启动子为诱饵,筛选获得34条表达序列标签(EST),其中有21条为未知功能,有13条在植物生长、抗逆防御、信号转导、转录调控、蛋白酶等方面均有已知或预测的功能,包括转录抑制因子ft41、GRF1互作因子ft44、NAP1相关蛋白ft64及ft70分子伴侣DnaJ10。酵母单杂交点对点验证结果表明VvDnaJ10和VvFT基因启动子之间有相互作用。【结论】通过酵母单杂交文库筛选获取13条候选EST,虽然大部分EST功能预测分析结果与VvFT调控开花时间无明显的直接关系,但研究结果为进一步探索VvFT转录或表达水平控制葡萄开花时间的分子机制提供侯选基因。 展开更多
关键词 葡萄 VvFT基因 启动子 酵母单杂交文库 调控因子 筛选
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水稻幼苗酵母单杂文库构建及LAZY1上游调控因子筛选 被引量：1
4
作者 黄小龙 孙贵连 +1 位作者 马丹丹 闫慧清 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期126-135,共10页
LAZY1通过促进生长素的横向极性运输来调控水稻分蘖角,形成紧密直立的株型,从而提高水稻产量。为了研究LAZY1表达的分子调控机制,本研究利用酵母单杂筛库技术筛选水稻LAZY1的上游调控因子。首先以水稻粳稻品种日本晴基因组DNA为材料,经... LAZY1通过促进生长素的横向极性运输来调控水稻分蘖角,形成紧密直立的株型,从而提高水稻产量。为了研究LAZY1表达的分子调控机制,本研究利用酵母单杂筛库技术筛选水稻LAZY1的上游调控因子。首先以水稻粳稻品种日本晴基因组DNA为材料,经PCR扩增得到LAZY1的启动子序列,接着连接到pHIS2构建诱饵载体,并转化到AH109酵母菌株得到pHIS2-LAZY1诱饵菌。同时以萌发3 d的日本晴幼苗为材料,采用SMART技术构建cDNA文库,再将纯化的cDNA文库和pGADT7-Rec共转化酵母菌株Y187获得酵母单杂文库菌,接着将上述诱饵菌和文库菌进行接合完成酵母单杂筛库,共筛选得到21个候选的上游调控因子,进一步对其中的转录因子多蛋白桥梁因子OsMBF1进行双荧光素酶实验验证,结果显示OsMBF1可在体内促进LAZY1的转录。本研究得到LAZY1的上游正调控因子OsMBF1,为揭示LAZY1介导的生长素极性运输和分蘖角决定的调控网络提供了理论基础,将有助于揭示水稻由散生变为直立生长的奥秘,具有重要的理论和实践意义。 展开更多
关键词 水稻 LAZY1 酵母单杂筛库 转录因子
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