期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到2篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
鼠伤寒沙门菌修饰酶YdiU的表达、纯化及晶体培养 被引量：2
1
作者 马玥 杨银龙 +5 位作者 岳盈盈 宋楠楠 王玮玮 贾海红 李翠玲 李冰清 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第11期1241-1244,1249,共5页
目的采用大肠埃希菌原核表达体系表达并纯化YdiU蛋白,筛选蛋白质晶体,为其结构和酶活测定等研究奠定基础。方法以生物信息学预测为基础,使用PCR方法从沙门菌基因组中调取ydiU基因,构建ydiU-pGl01重组质粒,转化入大肠埃希菌BL21(DE3)中,... 目的采用大肠埃希菌原核表达体系表达并纯化YdiU蛋白,筛选蛋白质晶体,为其结构和酶活测定等研究奠定基础。方法以生物信息学预测为基础,使用PCR方法从沙门菌基因组中调取ydiU基因,构建ydiU-pGl01重组质粒,转化入大肠埃希菌BL21(DE3)中,诱导蛋白表达。并使用镍离子亲和层析柱和阴离子交换柱对YdiU蛋白进行纯化。纯化后YdiU蛋白利用16种晶体筛选试剂盒在悬滴条件下进行晶体培养。结果成功构建重组表达质粒ydiU-pGl01。IPTG诱导后,YdiU蛋白在大肠埃希菌BL21(DE3)菌株中大量表达,并多以可溶形式存在。经镍离子亲和层析和阴离子交换法纯化后得到纯度较高的蛋白溶液,浓度为3.6 mg/ml,相对分子质量约51×10^3。纯化的YdiU蛋白在0.5 mol/L Potassium thiocyanate条件下长出蛋白晶体。结论采用大肠埃希菌表达系统可表达可溶性YdiU蛋白,YdiU蛋白在阴离子交换柱上表现为峰型对称的单峰,纯度较高,可用于蛋白质晶体的筛选,为进一步解析YdiU的结构和功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 ydiu蛋白 AMPylation修饰 表达纯化 晶体培养
原文传递
鼠伤寒沙门菌ydiU基因敲除株的构建及其在压力培养条件下的生长特性研究 被引量：2
2
作者 宋楠楠 杜忠君 +4 位作者 岳盈盈 于功昌 贾强 李冰清 邵华 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第12期1415-1419,1428,共6页
目的构建鼠伤寒沙门菌ydiU基因敲除株,并比较敲除株与野生株在不同生存压力条件培养基中的生长曲线,为进一步研究ydiU基因及其编码蛋白YdiU的功能奠定基础。方法以鼠伤寒沙门菌ATCC14028株作为母本PCR扩增含有ydiU基因上下游同源臂和氯... 目的构建鼠伤寒沙门菌ydiU基因敲除株,并比较敲除株与野生株在不同生存压力条件培养基中的生长曲线,为进一步研究ydiU基因及其编码蛋白YdiU的功能奠定基础。方法以鼠伤寒沙门菌ATCC14028株作为母本PCR扩增含有ydiU基因上下游同源臂和氯霉素抗性片段的线性打靶基因,通过同源重组操作得到ydiU基因敲除株ATCC14028AydiUo分别测定敲除株与与野生株在营养限制、氧化应激、缺铁、高盐,高糖、低PH和阿嗥等压力培养基中的生长曲线,并对两株细菌的生长特性进行比较。结果经PCR内、外侧鉴定及测序鉴定表明ydiU基因敲除株构建成功。敲除株和野生株在LB培养基中培养6 h即对数生长期后期时平均A600值分别为0.805和0.894,而在培养时间9h即平台期前期时检测平均值分别为1.022和1.220。两个生长关键期的细菌生长速度均表现为敲除株略为缓慢,但两株菌最终在平台期后期达到相同A值。在限制营养培养基(M9)中,敲除株增殖速度落后于野生株细菌,敲除株培养时间6 h、9 h和22 h的平均Ago。值分别为0.511.0.590和0.693,相同培养时间野生株平均值为0.595.0.719和0.8450以上数据表明在营养匮乏的生存压力下,ydiU基因对于细菌的生存和增殖具有关键作用。敲除株与野生株在培养基中活性氧增高、高糖、低PH、高眄|喙浓度等压力下生长速度和状态也有不同,提示ydiU基因在细菌的各种压力应激中可能发挥重要作用。结论成功构建了ydiU基因敲除株ATCC14028AydiU,其在多种压力培养基中显示出与野生株不同的生长特性,为进一步探究YdiU蛋白的功能提供了良好的基础和思路。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 ydiu基因 敲除株 压力应激 生长曲线
原文传递
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部