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YBX1基因肠道特异性敲低小鼠模型的建立
1
作者
齐心语
侯梦龙
+2 位作者
杨兴珍
周磊
李一星
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第9期1586-1595,共10页
Y-盒结合蛋白1(Y-box binding protein 1,YBX1)是冷休克蛋白超家族的成员,由YBX1基因编码。YBX1在机体多个组织中高度表达,参与多种生理功能的调节。然而目前YBX1在肠道中的作用尚不清楚。本研究先用CCK-8法在细胞水平上检测过表达/抑制...
Y-盒结合蛋白1(Y-box binding protein 1,YBX1)是冷休克蛋白超家族的成员,由YBX1基因编码。YBX1在机体多个组织中高度表达,参与多种生理功能的调节。然而目前YBX1在肠道中的作用尚不清楚。本研究先用CCK-8法在细胞水平上检测过表达/抑制YBX1基因对猪(Sus scrofa)肠上皮细胞IPEC-J2、大鼠(Rattus norvegicus)肠上皮细胞IEC-6增殖的影响。然后利用Cre-loxP基因敲除系统,构建YBX1基因肠道特异性敲低小鼠(Mus musculus)模型。通过YBX1flox/flox小鼠与PVillin-Cre^(+/-)小鼠杂交繁育获得子代小鼠。利用PCR方法鉴定小鼠基因型,采用实时定量PCR技术(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)和Western blot法分别从mRNA水平和蛋白水平检测YBX1基因肠道特异性敲低小鼠和对照小鼠YBX1的表达情况,验证基因敲低的效率。结果表明,过表达/抑制YBX1基因不影响细胞增殖,模型小鼠YBX1的mRNA水平下降为对照鼠的62%,蛋白水平下降为对照鼠的63%,证明YBX1基因肠道特异性敲低小鼠构建成功,为深入研究YBX1在肠道中的功能和作用机制提供稳定可靠的动物模型。
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关键词
ybx
1
基因
肠道组织特异性敲低
C57BL/6J小鼠
原文传递
YBX1截短体抑制髓母细胞瘤DAOY的迁移和干性增殖能力
2
作者
赖俊伟
叶子
+1 位作者
俞婷婷
程雁
《生物技术》
CAS
2024年第3期304-310,352,共8页
[目的]利用CRISPR/Cas9技术构建YBX1基因截短的SHH型髓母细胞瘤DAOY细胞系,探讨截短的YBX1对DAOY细胞迁移和干性增殖的影响。[方法]设计针对YBX1基因的sgRNA序列,并将其插入pX330载体构建sgYBX1表达质粒。DAOY细胞经pX330-sgYBX1和耐青...
[目的]利用CRISPR/Cas9技术构建YBX1基因截短的SHH型髓母细胞瘤DAOY细胞系,探讨截短的YBX1对DAOY细胞迁移和干性增殖的影响。[方法]设计针对YBX1基因的sgRNA序列,并将其插入pX330载体构建sgYBX1表达质粒。DAOY细胞经pX330-sgYBX1和耐青霉素质粒转染,药筛后采用极限稀释法挑取单克隆细胞系,使用测序及蛋白质印迹技术检测YBX1基因编辑的情况,利用免疫荧光实验检测YBX1截短体在DAOY细胞内的定位情况,并通过CCK8、Transwell、克隆形成实验、低黏附板成球实验检测YBX1截短体对DAOY细胞增殖、迁移及干性的影响。[结果]测序结果表明,在DAOYYBX1-trunc细胞系中,YBX1基因编码区缺失144个碱基,导致合成肽段的第21~68氨基酸(位于A/P domain和CSD结构域)缺失。免疫荧光实验结果表明截短的YBX1蛋白定位富集在细胞核内。与未编辑细胞相比,DAOYYBX1-trunc细胞的增殖能力基本不变,但迁移能力减弱了50%,克隆形成能力削减了54%,细胞成球能力削减了68%。[结论]成功构建YBX1蛋白在21~68氨基酸截短的DAOY细胞系,其削弱了DAOY细胞的迁移及干性增殖能力。
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关键词
ybx
1
基因
DAOY
SHH型髓母细胞瘤
冷休克结构域
截短体
细胞定位
迁移
干性增殖
原文传递
题名
YBX1基因肠道特异性敲低小鼠模型的建立
1
作者
齐心语
侯梦龙
杨兴珍
周磊
李一星
机构
广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室
出处
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第9期1586-1595,共10页
基金
国家重点研发计划项目(2023YFE0100800)
广西杰出青年科学基金项目(2020GXNSFFA297008)共同资助。
文摘
Y-盒结合蛋白1(Y-box binding protein 1,YBX1)是冷休克蛋白超家族的成员,由YBX1基因编码。YBX1在机体多个组织中高度表达,参与多种生理功能的调节。然而目前YBX1在肠道中的作用尚不清楚。本研究先用CCK-8法在细胞水平上检测过表达/抑制YBX1基因对猪(Sus scrofa)肠上皮细胞IPEC-J2、大鼠(Rattus norvegicus)肠上皮细胞IEC-6增殖的影响。然后利用Cre-loxP基因敲除系统,构建YBX1基因肠道特异性敲低小鼠(Mus musculus)模型。通过YBX1flox/flox小鼠与PVillin-Cre^(+/-)小鼠杂交繁育获得子代小鼠。利用PCR方法鉴定小鼠基因型,采用实时定量PCR技术(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)和Western blot法分别从mRNA水平和蛋白水平检测YBX1基因肠道特异性敲低小鼠和对照小鼠YBX1的表达情况,验证基因敲低的效率。结果表明,过表达/抑制YBX1基因不影响细胞增殖,模型小鼠YBX1的mRNA水平下降为对照鼠的62%,蛋白水平下降为对照鼠的63%,证明YBX1基因肠道特异性敲低小鼠构建成功,为深入研究YBX1在肠道中的功能和作用机制提供稳定可靠的动物模型。
关键词
ybx
1
基因
肠道组织特异性敲低
C57BL/6J小鼠
Keywords
ybx
1
gene
Intestine
tissue
specificity
knockdown
C57BL/6J
mouse
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
YBX1截短体抑制髓母细胞瘤DAOY的迁移和干性增殖能力
2
作者
赖俊伟
叶子
俞婷婷
程雁
机构
南京医科大学医学遗传学系
出处
《生物技术》
CAS
2024年第3期304-310,352,共8页
基金
国家自然科学基金面上项目(81261120386)。
文摘
[目的]利用CRISPR/Cas9技术构建YBX1基因截短的SHH型髓母细胞瘤DAOY细胞系,探讨截短的YBX1对DAOY细胞迁移和干性增殖的影响。[方法]设计针对YBX1基因的sgRNA序列,并将其插入pX330载体构建sgYBX1表达质粒。DAOY细胞经pX330-sgYBX1和耐青霉素质粒转染,药筛后采用极限稀释法挑取单克隆细胞系,使用测序及蛋白质印迹技术检测YBX1基因编辑的情况,利用免疫荧光实验检测YBX1截短体在DAOY细胞内的定位情况,并通过CCK8、Transwell、克隆形成实验、低黏附板成球实验检测YBX1截短体对DAOY细胞增殖、迁移及干性的影响。[结果]测序结果表明,在DAOYYBX1-trunc细胞系中,YBX1基因编码区缺失144个碱基,导致合成肽段的第21~68氨基酸(位于A/P domain和CSD结构域)缺失。免疫荧光实验结果表明截短的YBX1蛋白定位富集在细胞核内。与未编辑细胞相比,DAOYYBX1-trunc细胞的增殖能力基本不变,但迁移能力减弱了50%,克隆形成能力削减了54%,细胞成球能力削减了68%。[结论]成功构建YBX1蛋白在21~68氨基酸截短的DAOY细胞系,其削弱了DAOY细胞的迁移及干性增殖能力。
关键词
ybx
1
基因
DAOY
SHH型髓母细胞瘤
冷休克结构域
截短体
细胞定位
迁移
干性增殖
Keywords
ybx
I
gene
DAOY
SHH-medulloblastoma
cold
shock
domain
truncation
cellular
location
migration
stem-like
proliferation
分类号
Q23 [生物学—细胞生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
YBX1基因肠道特异性敲低小鼠模型的建立
齐心语
侯梦龙
杨兴珍
周磊
李一星
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
原文传递
2
YBX1截短体抑制髓母细胞瘤DAOY的迁移和干性增殖能力
赖俊伟
叶子
俞婷婷
程雁
《生物技术》
CAS
2024
0
原文传递
已选择
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