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木酮糖激酶表达水平对酿酒酵母木糖代谢产物流向的影响 被引量:11
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作者 沈煜 郑华军 +3 位作者 王颖 鲍晓明 曲音波 白凤武 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第8期746-751,共6页
在酿酒酵母中分别引入真菌和细菌的木糖代谢关键酶 ,木糖还原酶基因XYL1、木糖醇脱氢酶基因XYL2和木糖异构酶基因xylA .并在此基础上以共转化策略超表达下游关键酶木酮糖激酶基因XKS1.与亲本菌株相比 ,用pMA91和YEp2 4质粒表达XKS1的重... 在酿酒酵母中分别引入真菌和细菌的木糖代谢关键酶 ,木糖还原酶基因XYL1、木糖醇脱氢酶基因XYL2和木糖异构酶基因xylA .并在此基础上以共转化策略超表达下游关键酶木酮糖激酶基因XKS1.与亲本菌株相比 ,用pMA91和YEp2 4质粒表达XKS1的重组菌株 ,木酮糖激酶 (xylulokinase,XK)活性分别提高了 14和6 7倍 .在限氧条件下 ,重组菌株对木糖和葡萄糖的共发酵结果显示 ,表达XYL1,XYL2以及XKS1的重组菌株HSXY 2 5 1木糖消耗为 12 4 g/L ,提高了 12 0 9% ,乙醇产量达到 9 4 g/L ,提高了 36 % ,副产物木糖醇产量为 0 7g/L ,下降了 84 9% . 展开更多
关键词 木糖 木酮糖激酶 酿酒酵母 代谢产物 乙醇
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不同启动子控制下木酮糖激酶的差异表达及其对酿酒酵母木糖代谢的影响 被引量:9
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作者 彭炳银 陈晓 +1 位作者 沈煜 鲍晓明 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期914-922,共9页
【目的】以不同强度的启动子控制表达木酮糖激酶基因,并研究其引起的不同木酮糖激酶活性水平对木糖利用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)代谢流向的影响。【方法】以酿酒酵母CEN.PK 113-5D为出发菌株,选择酿酒酵母内源启动子TEF1p,PG... 【目的】以不同强度的启动子控制表达木酮糖激酶基因,并研究其引起的不同木酮糖激酶活性水平对木糖利用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)代谢流向的影响。【方法】以酿酒酵母CEN.PK 113-5D为出发菌株,选择酿酒酵母内源启动子TEF1p,PGK1p和HXK2p,利用Cre-loxP无标记同源重组系统,置换染色体上木酮糖激酶基因XKS1的启动子(XKS1p)序列;并通过附加体质粒引入木糖代谢上游途径,构建不同水平表达木酮糖激酶的木糖利用工程菌株;从木酮糖激酶的转录水平、酶活水平、胞内的ATP浓度及木糖代谢等性状,对各菌株进行评价。【结果】转录及酶活测定结果显示,与天然状态相比,所选择的启动子对木酮糖激酶均表现出更强的启动效率。菌株体内表达木酮糖激酶活性水平由高至低的顺序为其基因XKS1在启动子PGK1p、TEF1p、HXK2p和XKS1p控制下。随着木酮糖激酶的活性的提高,胞内的ATP水平下降,而转化木糖生成乙醇的能力上升。最高乙醇产率为0.35 g/g消耗的总糖,此时副产物木糖醇产率最低,为0.18 g/g消耗的木糖。【结论】通过在染色体上置换启动子,提高了木酮糖激酶的表达水平。在一定范围内,木酮糖激酶的高活性有利于木糖向乙醇的转化。 展开更多
关键词 酿酒酵母 启动子 木酮糖激酶 木糖 乙醇
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在酿酒酵母中共表达XYLA和XKS1基因后利用木糖的初步研究 被引量:5
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作者 李永建 严明 +3 位作者 丁莉 许伟 许琳 yh 《生物加工过程》 CAS CSCD 2006年第4期65-69,共5页
为了使酿酒酵母较好地利用木糖产生乙醇,将来自Thermus thermophilus的木糖异构酶基因XYLA和酿酒酵母自身的木酮糖激酶基因XKS1,构建到酵母表达载体pESC-LEU中,导入酿酒酵母YPH499中,同时成功表达了两种酶基因。该菌以木糖为唯一碳源进... 为了使酿酒酵母较好地利用木糖产生乙醇,将来自Thermus thermophilus的木糖异构酶基因XYLA和酿酒酵母自身的木酮糖激酶基因XKS1,构建到酵母表达载体pESC-LEU中,导入酿酒酵母YPH499中,同时成功表达了两种酶基因。该菌以木糖为唯一碳源进行限氧发酵,木糖的利用率为9.64%,为宿主菌的4.17倍,产生2.22 mmol.L-1的乙醇。同时初步探讨了两种酶基因的表达量对酿酒酵母发酵木糖生成乙醇的影响。木糖异构酶对木糖的利用起关键性的作用,木酮糖激酶的过量表达不利于乙醇生成。 展开更多
关键词 木糖异构酶 木酮糖激酶 木糖 酿酒酵母 乙醇
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寄生曲霉CICC40365利用木糖产L-苹果酸的发酵条件优化 被引量:6
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作者 吴悦 潘丽军 +1 位作者 李兴江 姜绍通 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1052-1062,共11页
【目的】为提高L-苹果酸产量及木糖利用率,以寄生曲霉(Aspergillus parasiticus CICC40365)为菌种,木糖为碳源,对其发酵工艺及木糖代谢途径进行初步研究。【方法】采用单因素试验和响应曲面法(Box-Behnken设计)对培养基和发酵条件进行... 【目的】为提高L-苹果酸产量及木糖利用率,以寄生曲霉(Aspergillus parasiticus CICC40365)为菌种,木糖为碳源,对其发酵工艺及木糖代谢途径进行初步研究。【方法】采用单因素试验和响应曲面法(Box-Behnken设计)对培养基和发酵条件进行优化。【结果】获得最佳培养基配方为:木糖100.0 g/L、硫酸铵2.0 g/L、酵母浸粉3.0 g/L、硫酸镁0.20 g/L、硫酸锰0.15 g/L、硫酸亚铁0.08 g/L、碳酸钙80.00 g/L,L-苹果酸的产量为53.58 g/L,较优化前提高40.5%。发酵条件较好组合为:接种量为8%(体积比)、摇瓶装液量60 mL/250 mL、发酵温度32°C、摇床转速170 r/min、发酵周期8 d,L-苹果酸的产量为55.47 g/L。Mg2+、Mn2+对木糖代谢中相关酶的影响研究结果表明,木酮糖激酶在该菌株代谢木糖过程中起着重要作用。【结论】寄生曲霉CICC40365能够较好地利用木糖发酵产L-苹果酸,其产量及木糖的利用效率均得到提高。 展开更多
关键词 寄生曲霉 木糖 L-苹果酸 响应曲面法 木酮糖激酶
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Fermentation of xylose to produce ethanol by recombinant Saccharomyces cerevisiae strain containing XYLA and XKS1 被引量:4
5
作者 LIUXiaolin JIANGNing HEPeng LUDajun SHENAn 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2005年第7期652-657,共6页
Fermentation of the pentose sugar xylose to produce ethanol using lignocellulosic biomass would make bioethanol production economically more competitive. Sac- charomyce cerevisise, an efficient ethanol producer, canno... Fermentation of the pentose sugar xylose to produce ethanol using lignocellulosic biomass would make bioethanol production economically more competitive. Sac- charomyce cerevisise, an efficient ethanol producer, cannot utilize xylose because it lacks the ability to convert xylose to its isomer xylulose. In this study, XYLA gene encoding xylose isomerase (XI) from Thermoanaerobacter tengcongensis MB4T and XKS1 gene encoding xylulokinase (XK) from Pichia stipitis were cloned and functionally coexpressed in Saccharomyces cerevisiae EF-326 to construct a recombinant xylose-utilizing strain. The resulting strain S. cerevisiae EF 1014 not only grew on xylose as sole carbon source, but also produced ethanol under anaerobic conditions. Fermentations performed with different xylose concentrations at different temperatures demonstrated that the highest ethanol produc- tivity was 0.11 g/g xylose when xylose concentration was pro- vided at 50 g/L. Under this condition, 28.4% of xylose was consumed and 1.54 g/L xylitol was formed. An increasing fermentation temperature from 30℃ to 37℃ did not im- prove ethanol yield. 展开更多
关键词 木糖异构酶 乙醇 重组细胞 XYLA基因 编码 木酮糖激酶
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木酮糖激酶基因整合表达载体构建及在酿酒酵母中的过表达 被引量:4
6
作者 葛菁萍 曹喜生 +2 位作者 宋刚 凌宏志 平文祥 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期762-767,共6页
【目的】以载体p406ADH1为构建骨架,构建一个酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)工业菌株的整合表达载体。【方法】通过酶切连接的方式,将4个元件片段:作为筛选标记的G418抗性基因KanR,用于基因表达的ADH1终止子片段,酿酒酵母W5自身木... 【目的】以载体p406ADH1为构建骨架,构建一个酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)工业菌株的整合表达载体。【方法】通过酶切连接的方式,将4个元件片段:作为筛选标记的G418抗性基因KanR,用于基因表达的ADH1终止子片段,酿酒酵母W5自身木酮糖激酶基因,18S rDNA介导的同源整合区,插入到骨架质粒p406ADH1中,得到多拷贝整合表达载体pCXS-RKTr。将该载体线性转化酿酒酵母后,对转化子中木酮糖激酶酶活进行测定,检测其表达情况。【结果】重组质粒在酿酒酵母体内实现了木酮糖激酶的高水平稳定表达,其酶活力是初始菌株的2.87倍。【结论】本实验构建了一个酿酒酵母工业菌株整合表达载体,并用此载体过表达了其自身的木酮糖激酶基因。该重组质粒载体的构建可以有效解决酿酒酵母中自身木酮糖激酶酶活较低的情况,这为利用木糖高产乙醇酿酒酵母基因工程菌株的构建和其它酵母重组质粒载体的构建奠定基础。 展开更多
关键词 酿酒酵母 同源整合 载体构建 整合表达 木酮糖激酶
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提高木糖代谢能力的酿酒酵母Y5-X3的初步构建 被引量:3
7
作者 张洁宁 田沈 杨秀山 《可再生能源》 CAS 北大核心 2012年第4期47-51,共5页
为获得能够发酵木糖和葡萄糖的新菌种,文中采用实验室专利菌株Saccharomyces cerevisiae Y5为宿主菌,分别采用热带假丝酵母(Candida tropicalis)和休哈塔假丝酵母(Candida shehatae)作为木糖代谢关键酶XYL1,XYL2的来源,利用酵母整合载体... 为获得能够发酵木糖和葡萄糖的新菌种,文中采用实验室专利菌株Saccharomyces cerevisiae Y5为宿主菌,分别采用热带假丝酵母(Candida tropicalis)和休哈塔假丝酵母(Candida shehatae)作为木糖代谢关键酶XYL1,XYL2的来源,利用酵母整合载体将XYL1,XYL2基因导入S.cerevisiae Y5基因组,同时超表达S.cerevisiae Y5内源木酮糖激酶基因XKS1,获得了酿酒酵母新菌种S.cerevisiae Y5-X3。结果表明,S.cere-visiae Y5-X3在摇瓶共发酵3%葡萄糖和2%木糖时能够利用木糖产乙醇,木糖消耗量和乙醇产量分别比宿主菌提高102.93%和12.54%,发酵2%木糖时木糖的消耗量是宿主菌的2.7倍。XKS1基因的超表达促进了木糖代谢,大大减少了木糖醇积累,提高了乙醇产量。 展开更多
关键词 酿酒酵母 木糖 乙醇 木酮糖激酶
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在酿酒酵母中共表达sXYLA和XKS1及木糖发酵的初步研究 被引量:1
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作者 张清 严明 +3 位作者 李永建 李艳 来灿钢 许琳 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期41-45,共5页
为改善重组酵母发酵木糖生产乙醇的能力,将定点突变改造后的Thermus thermophilus木糖异构酶基因sXYLA克隆到酵母表达载体pYX212并用于转化酸酒酵母Saccharomyces cerevisiae YPH499进行表达研究。酶活检测表明,改造后的木糖异构酶活性... 为改善重组酵母发酵木糖生产乙醇的能力,将定点突变改造后的Thermus thermophilus木糖异构酶基因sXYLA克隆到酵母表达载体pYX212并用于转化酸酒酵母Saccharomyces cerevisiae YPH499进行表达研究。酶活检测表明,改造后的木糖异构酶活性是未改造的1.91倍。在此基础上将改造后具有良好特性的木糖异构酶基因sXYLA和来自酸酒酵母的木酮糖激酶基因XKS1耦联,构楚得到重组表达质粒pYX-sXYLA- XKS1,在酿酒酵母YPH499中实现组成型共表达。结果表明,在84 h时重组菌发酵液酶活达到最高,木糖异构酶为0.624 U/mg蛋白,木酮糖激酶为0.688 U/mg蛋白。以葡萄糖和木糖为混合碳源初步进行半通氧发酵,代谢产物分析表明酸酒酵母重组菌木糖的消耗为4.75 g/L,乙醇的产量为0.839 g/L,分别比出发菌提高20.9%和14.8%,为酿酒酵母利用木糖发酵乙醇奠定基础。 展开更多
关键词 木糖异构酶 木酮糖激酶 酿酒酵母 木糖 乙醇
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戴尔根霉发酵麸皮酶解液制备富马酸的研究 被引量:1
9
作者 李硕 潘丽军 +6 位作者 吴悦 李兴江 杨英 郭娜 张轶 刘亚 姜绍通 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期719-730,共12页
拟通过根霉菌发酵小麦麸皮纤维质实现其高效生物转化制备富马酸的目标。在单因素试验研究基础上,对发酵工艺进行响应曲面法优化,并开展代谢机理初步探索。通过单因素试验确定了酵母浸粉、硫酸镁及硫酸锰质量浓度为主要影响因素,响应曲... 拟通过根霉菌发酵小麦麸皮纤维质实现其高效生物转化制备富马酸的目标。在单因素试验研究基础上,对发酵工艺进行响应曲面法优化,并开展代谢机理初步探索。通过单因素试验确定了酵母浸粉、硫酸镁及硫酸锰质量浓度为主要影响因素,响应曲面研究结果显示:当发酵水解液总糖浓度80.0g/L、硫酸铵2.00g/L、酵母浸粉0.29g/L、硫酸镁0.26g/L、硫酸锰0.07g/L、硫酸亚铁0.05g/L时,富马酸产量最高,其值为27.423g/L。对戴尔根霉Rhizopus delemar CICC41341的木糖代谢途径的初步分析结果表明木酮糖激酶为该菌株木糖代谢的关键限速酶。论文研究结果可为纤维质糖液工业发酵制备平台有机酸提供一定支持。 展开更多
关键词 响应面法 木酮糖激酶
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木酮糖激酶基因rs17118多态性与中国汉族人群冠心病发病风险的关联性研究
10
作者 张艳炜 韩京军 +2 位作者 张磊 李海洲 许英杰 《中国心血管杂志》 2021年第5期443-447,共5页
目的探讨木酮糖激酶rs17118多态性与冠心病发病风险的关联性。方法纳入2016年6月至2018年2月在深圳市中山大学附属第八医院诊治的、资料完整并成功完成基因分型的患者。按照1∶1的比例,选择年龄、性别匹配的冠心病患者(病例组)和健康体... 目的探讨木酮糖激酶rs17118多态性与冠心病发病风险的关联性。方法纳入2016年6月至2018年2月在深圳市中山大学附属第八医院诊治的、资料完整并成功完成基因分型的患者。按照1∶1的比例,选择年龄、性别匹配的冠心病患者(病例组)和健康体检者(对照组)各597例,采用Taqman探针荧光定量PCR技术检测rs17118 C/A基因型分布情况,应用多因素logistic回归分析各位点多态性与冠心病的关联性。结果病例组CA基因型(44.6%比38.5%,χ^(2)=4.536,P=0.038)以及CA+AA基因型(51.6%比45.7%,χ^(2)=4.008,P=0.045)分布频率均高于对照组。多变量logistic回归分析显示,校正传统危险因素后,CA基因型携带者冠心病发病风险是CC基因型携带者的1.41倍(95%CI:1.03~1.94,P=0.034)。病例组中,AA基因型携带者低密度脂蛋白胆固醇[(2.31±0.82)mmol/L]和总胆固醇[(3.93±1.22)mmol/L]水平明显低于CC基因型[(2.61±0.86)mmol/L、(4.40±1.19)mmol/L,P=0.050、0.035]和CA基因型[(2.68±0.82)mmol/L、(4.49±1.22)mmol/L,P=0.016、0.012],CA+AA基因型携带者高密度脂蛋白胆固醇水平也明显低于CC基因型携带者[(1.05±0.26)mmol/L比(1.10±0.31)mmol/L,P=0.035]。结论木酮糖激酶基因可能通过调整脂质代谢,影响冠状动脉粥样硬化的形成和发展,进而改变个体的疾病遗传易感性,rs17118多态性与中国汉族人群冠心病发病风险有关。 展开更多
关键词 木酮糖激酶 冠心病 基因多态性 危险因素
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XYLB基因rs17118多态性与中国汉族人群缺血性卒中关联研究
11
作者 李山山 张艳炜 +2 位作者 黄素丽 谢昌辉 程锦泉 《国际脑血管病杂志》 2016年第10期898-901,共4页
目的验证木酮糖激酶(xylulokinasehomolog,XYLB)基因rsl7118多态性与中国汉族人群缺血性卒中发病风险的关联性。方法采用病例对照研究设计,病例组为首发缺血性卒中患者,对照组为医院体检者,采用Taqman探针荧光定量聚合酶链反应技... 目的验证木酮糖激酶(xylulokinasehomolog,XYLB)基因rsl7118多态性与中国汉族人群缺血性卒中发病风险的关联性。方法采用病例对照研究设计,病例组为首发缺血性卒中患者,对照组为医院体检者,采用Taqman探针荧光定量聚合酶链反应技术检测rsl7118C/A多态性的基因型分布。结果共纳入475例缺血性卒中患者和483例对照者。病例组高血压(67.9%对22.2%;z。=292.982,P〈0.001)、糖尿病(24.2%对7.3%;X2=25.864,P〈0.001)的患者比例以及三酰甘油[(1.649±1.126)mmol/L对(1.157±1.480)mmol/L);t=3.592,P〈0.001]和低密度脂蛋白胆固醇[(3.499±1.163)mmol/L对(3.105±0.627)mmol/L;t=-6.227,P〈0.001]水平显著高于对照组,但总胆固醇水平显著低于对照组[(5.144±1.296)mmol/L对(5.491±1.335)mmol/L;t=4.650,P〈0.001]。病例组AA基因型(11.4%对7.5%;X2=6.136,P=0.016)以及A等位基因(32.3%对26.4%;X2=8.093,P=0.005)频率均显著高于对照组。多变量logistic回归分析显示,在校正传统危险因素后,AA基因型携带者的缺血性卒中患病风险是CC基因型携带者的1.971倍(优势比1.971,95%可信区间1.040~3.736;P=0.038)。结论XYLB基因rsl87118C/A多态性与中国汉族人群缺血性卒中的发病风险有关。 展开更多
关键词 卒中 脑缺血 磷酸转移酶类(醇族体) 多态现象 遗传学 疾病遗传易感性 汉族 危险因素 木酮糖激酶
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多基因串联发酵木糖产乙醇重组菌株构建初探
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作者 陆亮 刘敏 +4 位作者 叶凯 茆军 于孟斌 陈高云 涂振东 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期900-908,共9页
【目的】解决酿酒酵母不能发酵或利用木糖的问题,以期选育出高效转化秸秆生产乙醇的菌株。【方法】将来自近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)的木糖还原酶基因(xyl1),热带假丝酵母(Candida tropicalis)的木糖醇脱氢酶基因(xyl2),树... 【目的】解决酿酒酵母不能发酵或利用木糖的问题,以期选育出高效转化秸秆生产乙醇的菌株。【方法】将来自近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)的木糖还原酶基因(xyl1),热带假丝酵母(Candida tropicalis)的木糖醇脱氢酶基因(xyl2),树干毕赤酵母(Pichia stipitis)的木酮糖激酶基因(xks1),以及酿酒酵母内源的转醛酶基因(tal1)和转酮酶基因(tkl1),通过串联共表达的方法构建到表达载体pAUR123上,构建了一株重组酿酒酵母。【结果】经过酶活性分析和Western blot蛋白免疫实验,证明转化子pAUR123-XL成功导入酿酒酵母并得到表达。以木糖为唯一碳源进行限氧发酵,能稳定利用木糖,木糖发酵结果表明:木糖的利用率为79.5%,乙醇产率为31%。【结论】构建的重组菌株能较好的利用木糖,为进一步的乙醇发酵提供了依据。 展开更多
关键词 木糖还原酶 木糖醇脱氢酶 木酮糖激酶 转醛酶 转酮酶
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酿酒酵母工业菌株中XI木糖代谢途径的建立 被引量:22
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作者 沈煜 王颖 +3 位作者 史文龙 刘向勇 鲍晓明 曲音波 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期69-73,共5页
根据代谢工程原理,采取多拷贝整合策略,利用整合载体pYMIKP,将来自嗜热细菌Thermusthermophilus的木糖异构酶(XI)基因xylA和酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)自身的木酮糖激酶(XK)基因XKS1,插入酿酒酵母工业菌株NAN-27的染色体中,得... 根据代谢工程原理,采取多拷贝整合策略,利用整合载体pYMIKP,将来自嗜热细菌Thermusthermophilus的木糖异构酶(XI)基因xylA和酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)自身的木酮糖激酶(XK)基因XKS1,插入酿酒酵母工业菌株NAN-27的染色体中,得到工程菌株NAN-114。酶活测定结果显示,NAN-114中XI和XK的活性均高于出发菌株NAN-27,表明外源蛋白在酿酒酵母工业菌株中得到活性表达。对木糖、葡萄糖共发酵摇瓶实验结果表明,工程菌NAN-114消耗木糖4.6g/L,产生乙醇6.9g/L,较出发菌株分别提高了43.8%和9.5%。首次在酿酒酵母工业菌株中建立了XI路径的木糖代谢途径。 展开更多
关键词 木糖 酿酒酵母 乙醇 木糖异构酶 木酮糖激酶 工程菌株 代谢途径 工业 整合载体 活性表达
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