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鸡源抗菌肽Fowlicidin-3表达条件的优化及生物学特性和体内疗效研究 被引量:11
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作者 李荣荣 和祯泉 +2 位作者 吕英军 鲍恩东 陈溥言 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期113-118,共6页
对重组X-33毕赤酵母菌株表达的鸡源Fowlicidin-3抗菌肽的条件进行优化,并研究了表达产物的生物学活性。结果表明:当含有重组酵母菌的BMGY培养基A600值达到5~6时,转接pH 6.0的BMMY培养基,每24 h补加2%甲醇,29℃条件下培养72 h,重组鸡源F... 对重组X-33毕赤酵母菌株表达的鸡源Fowlicidin-3抗菌肽的条件进行优化,并研究了表达产物的生物学活性。结果表明:当含有重组酵母菌的BMGY培养基A600值达到5~6时,转接pH 6.0的BMMY培养基,每24 h补加2%甲醇,29℃条件下培养72 h,重组鸡源Fowlicidin-3抗菌肽获得高效表达,含量达到170 mg.L-1。采用琼脂孔扩散法对该抗菌肽的热稳定性、酸碱稳定性等特性进行分析,结果表明:鸡源Fowlicidin-3抗菌肽具有较强的热、酸稳定性;对致病性大肠杆菌K99、鸡白痢沙门氏菌和金黄色葡萄球菌CowanⅠ的最小抑菌浓度分别为3.12、1.56和1.56μg.mL-1。在对大肠杆菌O1感染雏鸡的体内疗效试验中,鸡源Fowlicidin-3显示出了较好的预防和治疗效果。 展开更多
关键词 Fowlicidin-3 表达优化 生物学特性 x-33 体内疗效
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改构的野生革耳漆酶基因在毕赤酵母中的表达和活性鉴定 被引量:6
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作者 杨建强 刘刚 +2 位作者 汤国营 戴红梅 朱厚础 《生物技术通讯》 CAS 2005年第3期255-258,共4页
在野生革耳漆酶的cDNA序列3'端添加15个核苷酸后得到突变基因lccT。将其克隆入表达载体pPICZαA,重组质粒pPICZαA/lccT经PmeⅠ线性化,电击转化毕赤酵母X-33细胞。经过菌落PCR鉴定的转化子pPICZαA/lccT-X-33在甲醇诱导后分泌表达... 在野生革耳漆酶的cDNA序列3'端添加15个核苷酸后得到突变基因lccT。将其克隆入表达载体pPICZαA,重组质粒pPICZαA/lccT经PmeⅠ线性化,电击转化毕赤酵母X-33细胞。经过菌落PCR鉴定的转化子pPICZαA/lccT-X-33在甲醇诱导后分泌表达活性重组漆酶LCCT,比未添加该段序列的野生革耳漆酶基因lcc在毕赤酵母中表达的活性提高2倍多。其培养液上清经凝胶过滤层析和离子交换层析后,得到了电泳纯的漆酶蛋白,以ABTS为底物在pH4.5时测得比活为3.68U/mg。根据SDS-PAGE测定的重组漆酶LCCT的表观相对分子质量为62600。 展开更多
关键词 毕赤酵母 酶基因 活性鉴定 野生 SDS-PAGE cDNA序列 离子交换层析 凝胶过滤层析 相对分子质量 PCR鉴定 突变基因 表达载体 重组质粒 x-33 电击转化 活性重组 分泌表达 ABTS 核苷酸 漆酶 线性化 PME 转化子 lcc 培养液 酶蛋白
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重组人IL-10在毕赤酵母X-33及SMD1168中表达效率的比较 被引量:2
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作者 陈富超 曹明燕 +2 位作者 罗军敏 封建凯 孙万邦 《遵义医学院学报》 2011年第4期351-353,共3页
目的研究重组人IL-10(rhIL-10)在两株毕赤酵母X-33和SMD1168的表达水平,为rhIL-10的表达选择合适的表达菌株。方法以0.5%甲醇分别诱导毕赤酵母X-33和SMD1168表达rhIL-10,用SDS-PAGE和WesternBlot分析和鉴定rhIL-10,用ELISA法测定培养液r... 目的研究重组人IL-10(rhIL-10)在两株毕赤酵母X-33和SMD1168的表达水平,为rhIL-10的表达选择合适的表达菌株。方法以0.5%甲醇分别诱导毕赤酵母X-33和SMD1168表达rhIL-10,用SDS-PAGE和WesternBlot分析和鉴定rhIL-10,用ELISA法测定培养液rhIL-10含量,用Bradford法测定培养液总蛋白含量并计算rhIL-10占总蛋白的比例。比较同等培养条件下两株酵母表达rhIL-10和总蛋白的水平。结果 SDS-PAGE和Western Blot均检测到42kD左右的蛋白条带;rhIL-10在X-33中的表达量平均达20.00mg/L,在SMD1168中的表达量平均达1.90mg/L,在两株不同酵母中的表达量有显著性差异(P<0.05);同时段的X-33培养液中总蛋白质含量平均为50.00mg/L,rhIL-10占总蛋白的40.00%;SMD1168培养液中总蛋白质含量平均为48.23mg/L,rhIL-10占总蛋白的4.00%。结论 rhIL-10在不同的毕赤酵母表达效率有差异,X-33较1168更适于rhIL-10的表达。 展开更多
关键词 重组人IL-10 x-33 SMD1168 表达
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美国X-33空天飞行器项目回顾与总结 被引量:3
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作者 牛文 李文杰 叶蕾 《飞航导弹》 北大核心 2014年第7期13-17,共5页
X-33是美国在1996—2001年研制的一种亚轨道可重复使用空天飞行器验证机,主要目的是降低全尺寸可重复使用飞行器的研制和使用风险。尽管X-33最终下马,但其研究过程中不乏成功之处。结合NASA肯尼迪航天中心2011年发表的对X-33空天飞行器... X-33是美国在1996—2001年研制的一种亚轨道可重复使用空天飞行器验证机,主要目的是降低全尺寸可重复使用飞行器的研制和使用风险。尽管X-33最终下马,但其研究过程中不乏成功之处。结合NASA肯尼迪航天中心2011年发表的对X-33空天飞行器项目的总结,全面展示了美、欧等西方国家对空天飞行器的研发现状。 展开更多
关键词 空天飞行 x-33 验证机 美国
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空间作战飞行器正悄悄走来
5
作者 丁邦昕 《国防科技》 2003年第8期11-13,共3页
空间作战飞行器(Space Operations Vehicle,SOV)是目前世界上部分国家正在发展的一种尖端空间武器。它是一种迅速穿越大气层,往返于地球与外层空间,并能在空间长期驻留和进行机动,可重复使用的空间作战与航天运输的两用飞行器。既... 空间作战飞行器(Space Operations Vehicle,SOV)是目前世界上部分国家正在发展的一种尖端空间武器。它是一种迅速穿越大气层,往返于地球与外层空间,并能在空间长期驻留和进行机动,可重复使用的空间作战与航天运输的两用飞行器。既可在空间又可大气层内执行攻击、运输、空间回收、侦察等多项军事任务。在空间活动相当于航天飞机,在大气层活动相当于高性能战斗机,在未来空间对抗中具有十分重要的作用。 展开更多
关键词 空间作战飞行器 空间武器 x-33 美国 太空轰炸机 “冒险星”计划 “超级x”飞行器
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X-33贮箱的强度仍存在问题
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《863航天技术通讯》 1999年第7期43-45,共3页
关键词 x-33 单级入轨运载器 强度 液氢贮箱 可重复
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51区迁移之谜
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作者 吴再丰 《飞碟探索》 2011年第4期17-19,共3页
在51区外试飞秘密航空武器 提起51区,大多人都知道这是美国秘密航空武器的试飞基地,随着基地上空不准飞机飞越,使它变得更加神秘。但是最近传出试飞基地从51区搬家的说法。以《大众机械师》杂志为例,在封面上赫然写着“新51区”字... 在51区外试飞秘密航空武器 提起51区,大多人都知道这是美国秘密航空武器的试飞基地,随着基地上空不准飞机飞越,使它变得更加神秘。但是最近传出试飞基地从51区搬家的说法。以《大众机械师》杂志为例,在封面上赫然写着“新51区”字样,读了内容才知道说的是新航天飞机X-33的开发。这种航天飞机能够垂直上升, 展开更多
关键词 迁移 航天飞机 航空武器 x-33 试飞 机械师
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太空遨游的妙计之一
8
作者 张生 《飞碟探索》 2009年第10期10-12,共3页
最为突出的发射器是X-33,它由位于加利福尼亚州帕姆代尔的洛克希德·马丁公司的臭鼬工程队研制,是NASA意图把发射成本削减到1/10的联合项目的一部分。X-33是一个大约有实验用航天器一半大小、用以测试一种直线喷管技术以及其他... 最为突出的发射器是X-33,它由位于加利福尼亚州帕姆代尔的洛克希德·马丁公司的臭鼬工程队研制,是NASA意图把发射成本削减到1/10的联合项目的一部分。X-33是一个大约有实验用航天器一半大小、用以测试一种直线喷管技术以及其他各种技术的发射器。在理论上,直线喷管能够通过一个可以自动适应不断变化气压的发动机,来推动一个完全可以重复使用并且垂直起飞飞入轨道的航天器。 展开更多
关键词 太空 加利福尼亚州 x-33 马丁公司 洛克希德 发射成本 NASA 垂直起飞
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漫漫太空之路——受挫的美国下一代航天飞机开发计划
9
作者 范一超 《世界科学》 2003年第3期9-11,共3页
2001年3月1日,美国航空航天局(NASA)正式宣布中止下一代航天飞机X—33样机的开发计划。为开发X—33,美国政府耗时五年,并投入资金10亿美元。促使美国政府痛下决心的主要原因在于计划进展缓慢、开发成本过高。
关键词 美国 航天飞机 x-33 设计 航天计划
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极大螺旋藻藻蓝蛋白基因在巴斯德毕赤酵母X-33中表达的研究 被引量:3
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作者 于平 岑沛霖 +2 位作者 励建荣 张燕萍 秦松 《科技通报》 北大核心 2004年第1期21-23,27,共4页
通过PCR技术克隆了极大螺旋藻藻蓝蛋白基因,构建了克隆载体和表达载体,并将该基因导入巴斯德毕赤酵母X 33基因组,筛选了能够有效表达藻蓝蛋白基因的毕赤酵母工程菌株PC8,从而为发酵法生产藻蓝蛋白奠定了基础.
关键词 基因工程 甲基营养型毕赤酵母 极大螺旋藻 藻蓝蛋白基因 基因表达 PCR技术 x-33基因
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番鸭细小病毒VP2基因在毕赤酵母中的表达及表达产物的鉴定 被引量:3
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作者 娄华 白挨泉 +3 位作者 顾万军 陆英杰 贺东升 刘福安 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期202-206,共5页
通过DNA重组技术,将克隆到的MDPV_Q和MDPV_26的VP2基因片段,经两种限制性核酸内切酶SacII和Kp nI的酶切,将酶切产物再克隆到表达载体pPICZαA中,得到表达重组质粒pPICZαA_M_QVP2和pPICZαA_M_26VP2。将这两种表达重组质粒分别转... 通过DNA重组技术,将克隆到的MDPV_Q和MDPV_26的VP2基因片段,经两种限制性核酸内切酶SacII和Kp nI的酶切,将酶切产物再克隆到表达载体pPICZαA中,得到表达重组质粒pPICZαA_M_QVP2和pPICZαA_M_26VP2。将这两种表达重组质粒分别转化到毕赤酵母(PichiaPastorisX_33)中进行表达,经甲醇诱导和SDS_PAGE分析结果表明,MDPV_QVP2和MDPV_26VP2基因片段的表达产物大小约为73kD,与理论预计相符。此外,本研究还意外地发现,重组质粒转化到酵母菌进行表达,在表达VP2结构蛋白的同时,还表达了一条大小约为60kD的蛋白条带。 展开更多
关键词 番鸭细小病毒 毕赤酵母x-33 表达 VP2基因
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毕赤酵母X-33OCH1基因敲除菌株的构建及其表达低糖基化蛋白GM-CSF 被引量:3
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作者 张大成 许永利 +2 位作者 辛鑫 朱瑞宇 金坚 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期622-629,共8页
【目的】酵母表达外源糖蛋白时会对蛋白进行过度N-糖基化修饰,产生高甘露糖型糖链,影响蛋白的活性,其中α-1,6-甘露糖转移酶(och1p)在这一过程中起着关键作用。通过敲除毕赤酵母X-33的α-1,6甘露糖转移酶(och1p)基因,获得一个对糖蛋白... 【目的】酵母表达外源糖蛋白时会对蛋白进行过度N-糖基化修饰,产生高甘露糖型糖链,影响蛋白的活性,其中α-1,6-甘露糖转移酶(och1p)在这一过程中起着关键作用。通过敲除毕赤酵母X-33的α-1,6甘露糖转移酶(och1p)基因,获得一个对糖蛋白进行低糖基化修饰的毕赤酵母表达系统。【方法】采用双交换同源重组敲除目的基因的方法,首先敲除毕赤酵母X-33的URA3基因,获得一个尿嘧啶营养缺陷型的X-33(ura3-)菌株;然后用URA3基因作为选择标记,敲除X-33(ura3-)的α-1,6甘露糖转移酶(och1p)基因,获得OCH1基因敲除的X-33(och1-)菌株。用X-33(och1-)菌表达糖蛋白GM-CSF,分析GM-CSF蛋白糖链的变化。【结果】首次成功敲除了X-33的URA3和OCH1基因,与野生型相比,X-33(och1-)菌表达的GM-CSF蛋白过度糖基化修饰程度明显降低。【结论】X-33(och1-)菌株的构建提供了一个对蛋白低N-糖基化修饰的毕赤酵母表达系统,也为进一步的糖基化改造提供了良好的基础。 展开更多
关键词 N-糖基化 毕赤酵母x-33 基因敲除 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)
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毕赤酵母X-33糖基化突变菌株的生理特性 被引量:2
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作者 许永利 张大成 +2 位作者 朱瑞宇 陈蕴 金坚 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第4期439-442,共4页
目的研究毕赤酵母X-33野生型菌株(wX-33)和X-33α-1,6甘露糖基转移酶(Och1p)突变株(och1 mX-33)的生理特性,为och1mX-33株进一步糖基化的研究奠定基础。方法绘制wX-33和och1 mX-33菌株的生长曲线,进行温度敏感性及刚果红敏感性试验,美... 目的研究毕赤酵母X-33野生型菌株(wX-33)和X-33α-1,6甘露糖基转移酶(Och1p)突变株(och1 mX-33)的生理特性,为och1mX-33株进一步糖基化的研究奠定基础。方法绘制wX-33和och1 mX-33菌株的生长曲线,进行温度敏感性及刚果红敏感性试验,美蓝染色观察其形态变化,并检测细胞的存活率。结果与wX-33株比较,och1 mX-33株生长缓慢,生物量减少;对温度、刚果红敏感性增强;存在细胞壁分裂缺陷;在不适温度下,细胞存活率降低。结论糖基化突变可影响毕赤酵母X-33对温度、刚果红的敏感性,使其细胞壁层甘露糖含量降低,并可使och1 mX-33株的生理特性发生很大变化。 展开更多
关键词 毕赤酵母x-33 och1突变 糖基化 生长表型
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β-1,3-1,4-葡聚糖酶在毕赤酵母中的克隆与表达 被引量:2
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作者 陈龙军 陈济琛 +2 位作者 陈亚兰 林戎斌 林新坚 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期170-174,共5页
β-1,3-1,4-D-葡聚糖酶是一类专一性降解β-1,3-1,4-葡糖苷键中的β-1,4-糖苷键,产生小分子还原糖的水解酶,广泛应用于啤酒工业和饲料工业中。本研究根据毕赤酵母密码子偏好性优化β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因序列,采用PCR法将其插入毕赤酵... β-1,3-1,4-D-葡聚糖酶是一类专一性降解β-1,3-1,4-葡糖苷键中的β-1,4-糖苷键,产生小分子还原糖的水解酶,广泛应用于啤酒工业和饲料工业中。本研究根据毕赤酵母密码子偏好性优化β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因序列,采用PCR法将其插入毕赤酵母表达载体pPICZαA,经SacI线性化后电击整合入毕赤酵母X-33基因组,构建重组酵母;经菌落PCR验证和摇瓶筛选,获得一株X-33/pPICZαA-bgl,甲醇诱导96h后,酶活力达308.5U/mL,经SDS-PAGE电泳,实际蛋白分子量约为33ku。β-1,3-1,4-D-葡聚糖酶最适反应pH为5.0,最适反应温度为50℃。 展开更多
关键词 毕赤酵母x-33 β-1 3-1 4-葡聚糖酶 诱导
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BPI_(23)-haFGF融合蛋白在毕赤酵母X-33中的分泌表达及活性鉴定 被引量:1
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作者 马艳 朱家勇 +2 位作者 金小宝 彭海英 王艳 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第2期379-384,共6页
将BPI23-haFGF融合基因克隆到酵母表达载体pPICZαA中,构建出含BPI23-haFGF融合基因的重组质粒pPICZαA-BPI23-haFGF。通过电击将经SacⅠ酶切线性化的pPICZαA-BPI23-haFGF质粒转化到巴斯德毕赤酵母X-33菌中,并通过抗性与表型筛选、PCR... 将BPI23-haFGF融合基因克隆到酵母表达载体pPICZαA中,构建出含BPI23-haFGF融合基因的重组质粒pPICZαA-BPI23-haFGF。通过电击将经SacⅠ酶切线性化的pPICZαA-BPI23-haFGF质粒转化到巴斯德毕赤酵母X-33菌中,并通过抗性与表型筛选、PCR鉴定获得高效的工程菌。收集表达上清进行SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明,在43KD有与预期大小相符的条带,占上清总蛋白的50%以上。亲和层析纯化后的融合蛋白BPI23-haFGF纯度约90%,体外活性实验结果,纯化产物具有杀死革兰氏阴性菌及促进NIH3T3细胞增殖的双重功能。 展开更多
关键词 BPI23-haFGF融合基因 毕赤酵母x-33 分泌表达 活性鉴定
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X-33出师未捷身先死 被引量:1
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作者 赵颖 《太空探索》 2001年第5期34-35,共2页
2001年3月1日,美国航宇局向外界正式宣布了不再继续向X-33和X-34计划拨款的消息。至此,美国于5年前提出的单级入轨可重复使用运载器研制计划最终流产。据称,美国航宇局与洛克希德·马丁公司共同签署的X-33计划合作协议将于3月底到期... 2001年3月1日,美国航宇局向外界正式宣布了不再继续向X-33和X-34计划拨款的消息。至此,美国于5年前提出的单级入轨可重复使用运载器研制计划最终流产。据称,美国航宇局与洛克希德·马丁公司共同签署的X-33计划合作协议将于3月底到期,而X-34计划也已在3月2日结束。 美国航宇局表示。 展开更多
关键词 x-33计划 可重复使用航天器计划 美国 运载器
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毕赤酵母不对称合成阿托伐他汀中间体 被引量:1
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作者 周剑平 任宇红 +2 位作者 张敏洁 孙晓锋 魏东芝 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期579-583,共5页
阿托伐他汀可通过抑制HMG-CoA还原酶与底物的结合来抑制胆固醇的合成,而(R)-3-羟基-5-邻苯二甲酰亚胺基戊酸乙酯是阿托伐他汀合成的重要中间体。通过对实验室保藏菌种进行筛选,得到一株巴氏毕赤酵母X-33可将5-邻苯二甲酰亚胺-3-氧代戊... 阿托伐他汀可通过抑制HMG-CoA还原酶与底物的结合来抑制胆固醇的合成,而(R)-3-羟基-5-邻苯二甲酰亚胺基戊酸乙酯是阿托伐他汀合成的重要中间体。通过对实验室保藏菌种进行筛选,得到一株巴氏毕赤酵母X-33可将5-邻苯二甲酰亚胺-3-氧代戊酸乙酯还原为(R)-3-羟基-5-邻苯二甲酰亚胺基戊酸乙酯。在磷酸盐缓冲液体系中考察了初始底物浓度、反应时间、辅助底物、葡萄糖添加量、pH、温度等因素对产物收率和对映体选择性的影响,获得了较佳的反应条件。选择底物投料量为7 g/L时,当菌体浓度120 g/L,葡萄糖添加量120 g/L,pH 6.5,温度35℃,反应时间12 h,产物(R)-3-羟基-5-邻苯二甲酰亚胺基戊酸乙酯的收率可达到93.12%,对映体过量值可达到98.55%。 展开更多
关键词 毕赤酵母 不对称还原 5-邻苯二甲酰亚胺-3-氧代戊酸乙酯 (R)-3-羟基-5-邻苯二甲酰亚胺基戊酸乙酯
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指状青霉cyt b_5和cyt b_5r基因克隆及与cyp51A的共表达
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作者 秦婷婷 耿辉 +3 位作者 王胜强 牛玉慧 伍志 刘德立 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期179-188,共10页
为探究指状青霉细胞色素b5(Cyt b5)与细胞色素b5还原酶(Cyt b5r)在细胞色素P450 CYP51A电子传递方面的功用,研究了指状青霉CYP51A与Cyt b5-Cyt b5r共表达机制;并检测了其对于cyp51A基因表达水平的影响。通过转录组分析筛选并PCR克隆获得... 为探究指状青霉细胞色素b5(Cyt b5)与细胞色素b5还原酶(Cyt b5r)在细胞色素P450 CYP51A电子传递方面的功用,研究了指状青霉CYP51A与Cyt b5-Cyt b5r共表达机制;并检测了其对于cyp51A基因表达水平的影响。通过转录组分析筛选并PCR克隆获得了cyt b5与cyt b5r基因,分别命名为HS-Pdcyt b5和HS-Pdcyt b5r。以多基因串联克隆载体p PICZαA为骨架构建了指状青霉共表达质粒ppbr A(p PIC-Pdcyp51A-cyt b5-cyt b5r);电转化法将重组质粒ppbr A导入毕赤酵母X-33中。q RT-PCR分析结果显示,CYP51A与Cyt b5-Cyt b5r共表达后,其基因表达水平升高54%-97%,并维持较长时间(48-72 h)。表明Cyt b5-Cyt b5r系统可将电子高效转移给CYP51A,从而增强cyp51A基因的转录表达。从指状青霉中克隆表达HS-Pd Cyt b5和HS-Pd Cyt b5r蛋白,并通过共表达的方式研究cyp51A基因的功能尚为首次报道。 展开更多
关键词 指状青霉CYP51A 共表达 细胞色素B5 细胞色素b5还原酶 毕赤酵母x-33
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命运多舛的航天飞机
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作者 Rebecca Grant 梁宏涛 徐玉光 《航空世界》 2002年第1期10-11,共2页
航天飞机成为空军装备的长远梦想已经有40多年的时间了,用的航天飞机能够减少发射费千克公斤载荷的发射费用从4500美元减少到450美元.并为空军提供更为灵活的与太空接触的手段,并能针对敌人的反通路策略提供最根本的对抗措施。
关键词 航天飞机 空军装备 x系列飞行器 x-33计划
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类升力体外形俯仰阻尼特性数值研究 被引量:1
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作者 刘伟 牟斌 《空气动力学学报》 CSCD 北大核心 2001年第3期331-337,共7页
采用有限差分方法求解薄层近似的非定常Navier Stokes方程 ,定常流场采用交替方向隐式分解的NND格式 ,非定常流场采用四步Runge Kutta方法 ,在保证时、空二阶精度前提下引入变系数残值光顺技术提高非定常流场计算效率 ,复杂带翼外形的... 采用有限差分方法求解薄层近似的非定常Navier Stokes方程 ,定常流场采用交替方向隐式分解的NND格式 ,非定常流场采用四步Runge Kutta方法 ,在保证时、空二阶精度前提下引入变系数残值光顺技术提高非定常流场计算效率 ,复杂带翼外形的空间网格通过求解抛物化的椭圆型方程生成。 展开更多
关键词 Navier-Stokes方程 非定常流动 数值模拟 俯仰阻尼导数 类升力体外形 动导数 Etkin理论 可重复使用运载器 RLV x-33缩比验证机 飞机
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