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电针调节Wnt/β-catenin信号通路抑制大鼠膝骨关节炎软骨退变的研究 被引量:39
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作者 张媛媛 李西海 吴明霞 《中国针灸》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1081-1086,共6页
目的:基于Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路探讨电针治疗膝骨关节炎(kneeosteoarthritis,KOA)的作用机制。方法:从50只2月龄SPF级雄性SD大鼠中随机抽取10只为假手术组,其余40只采用改良Hulth法复制膝骨关节炎模型,造模4周后随... 目的:基于Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路探讨电针治疗膝骨关节炎(kneeosteoarthritis,KOA)的作用机制。方法:从50只2月龄SPF级雄性SD大鼠中随机抽取10只为假手术组,其余40只采用改良Hulth法复制膝骨关节炎模型,造模4周后随机分为模型组、实验1组、实验2组、实验3组,每组10只。假手术组和模型组不作任何干预,实验1组取双侧"内膝眼""犊鼻"电针干预15min,实验2组取双侧"内膝眼""犊鼻"电针干预30min,实验3组取双侧非经非穴电针干预15min。电针干预每天1次,每周5次,共12周。12周后,取大鼠膝关节软骨组织进行染色,光镜下观察关节软骨组织形态学改变;改良Mankin’s评分评价软骨退变程度;ELISA法检测滑膜组织中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量;Westernblot检测关节软骨组织Wnt-4、β-catenin、基质金属蛋白酶-13(matrixmetalloprotein-13,MMP-13)蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠软骨形态结构紊乱,细胞数量明显减少,基质失染,潮线不完整;Mankin’s评分显著升高(P<0.01);滑膜组织中IL-1β含量显著升高(P<0.01);Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平均显著升高(均P<0.01)。与模型组比较,实验1组、实验2组大鼠软骨形态结构较整齐,细胞数量增多,基质染色加深,潮线较完整;Mankin’s评分显著降低(P<0.01);滑膜组织中IL-1β含量显著降低(P<0.01);Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平均显著降低(均P<0.01)。与模型组比较,实验3组均未见改善。与实验1组比较,实验3组大鼠软骨形态结构紊乱,细胞数量明显减少,基质失染,潮线不完整;Mankin’s评分显著升高(P<0.01);滑膜组织中IL-1β含量显著升高(P<0.01);Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平均显著升高(均P<0.01)。实验2组与实验1组大鼠软骨形态结构相似,Mankin’s评分、滑膜组织中IL-1β含量及Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平比� 展开更多
关键词 膝骨关节炎 电针 wnt-4 β-连环蛋白(β-catenin) 形态学
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独活寄生汤拆方通过Wnt/β-catenin信号通路抑制软骨细胞炎症反应 被引量:12
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作者 李慧 马玉环 +8 位作者 许丽梅 王圣杰 许云腾 何晓娟 贾良良 曾建伟 王丽丽 李西海 叶蕻芝 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2020年第35期5589-5594,共6页
背景:Wnt/β-catenin信号通路在骨关节炎的炎症反应病理过程中扮演着重要角色,而独活寄生汤拆方有效抑制软骨细胞的炎症反应有待进一步深入研究。目的:探讨独活寄生汤拆方是否可以通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制由脂多糖诱导的软... 背景:Wnt/β-catenin信号通路在骨关节炎的炎症反应病理过程中扮演着重要角色,而独活寄生汤拆方有效抑制软骨细胞的炎症反应有待进一步深入研究。目的:探讨独活寄生汤拆方是否可以通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制由脂多糖诱导的软骨细胞炎症反应。方法:①取SD雄性大鼠,采用机械Ⅱ型胶原酶消化法获取膝关节软骨细胞,倒置相差显微镜观察软骨细胞的形态结构,Ⅱ型胶原免疫组化鉴定软骨细胞。②用不同质量浓度的独活寄生汤拆方(300,400,500 mg/L)干预由脂多糖(10μg/L)诱导的软骨细胞炎症模型,干预8 h后,采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定各组软骨细胞培养液中白细胞介素1β、肿瘤坏子因子α水平,确定独活寄生汤拆方干预浓度。③将第2代软骨细胞分为4组:空白组含正常培养液;模型组培养液中含10μg/L脂多糖;独活寄生汤拆方组培养液中含10μg/L脂多糖和400 mg/L独活寄生汤拆方;抑制剂组培养液中含10μg/L脂多糖和10 mg/L Dickkopf-1。干预8 h后,采用Western blot法检测β-catenin、Wnt-4、Frizzled-2、GSK-3β、CKI-ε的蛋白表达量。结果与结论:①软骨细胞鉴定:获取的软骨细胞Ⅱ型胶原免疫组化染色胞浆呈棕黄色,具备软骨细胞典型特征;②ELISA结果显示:模型组培养液中白细胞介素1β和肿瘤坏子因子α水平均高于空白组,400 mg/L独活寄生汤拆方干预后两种炎症因子水平较模型组显著降低,所以确定独活寄生汤拆方干预浓度为400 mg/L;③Western blot结果显示:模型组β-catenin、Wnt-4、Frizzled-2、CKI-ε的蛋白表达量均高于空白组,而GSK-3β蛋白表达量低于空白组;独活寄生汤拆方组和抑制剂组β-catenin、Wnt-4、Frizzled-2、CKI-ε蛋白表达量低于模型组,而GSK-3β蛋白表达量高于模型组。④结果表明:独活寄生汤拆方通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制由脂多糖诱导的软骨细胞炎症反应。 展开更多
关键词 独活寄生汤拆方 软骨细胞 wnt/Β-CATENIN信号通路 wnt-4 Frizzled-2 β-catenin GSK-3β CKI-ε
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Wnt-4在雌性小鼠生殖管道发育过程中的表达及意义 被引量:2
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作者 胡琳莉 王昕荣 +1 位作者 钱坤 朱桂金 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期85-88,共4页
目的:探讨Wnt-4在子宫发育中的作用。方法:采用PCR方法鉴定孕13d、15d、17d、19d和21d的胎鼠性别,选择雌性胎鼠采用免疫组化SP法检测Wnt-4在苗勒管中部上皮细胞和间充质细胞中的表达。结果:在孕13-21d雌性胎鼠苗勒管中部上皮细胞和间充... 目的:探讨Wnt-4在子宫发育中的作用。方法:采用PCR方法鉴定孕13d、15d、17d、19d和21d的胎鼠性别,选择雌性胎鼠采用免疫组化SP法检测Wnt-4在苗勒管中部上皮细胞和间充质细胞中的表达。结果:在孕13-21d雌性胎鼠苗勒管中部上皮细胞和间充质细胞中Wnt-4均有表达,孕15d左右达到高峰,有显著性差异(P<0.01);但上皮细胞和间充质细胞间的表达差异无显著性(P>0.05)。结论:Wnt-4在雌性小鼠生殖管道形成过程中发挥作用,可能是诱导子宫发育的关键因子,同时本实验方法为雌性生殖管道发育相关因子的研究提供了有效的研究途径。 展开更多
关键词 wnt-4 苗勒管 聚合酶联反应 免疫组化
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WNT4及其抑制因子SFRP1在糖尿病肾病大鼠肾组织中的表达 被引量:14
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作者 孔静 田平平 +6 位作者 李圆圆 石明隽 王圆圆 肖瑛 张帆 郭兵 孙兰 《基础医学与临床》 CSCD 2018年第2期194-199,共6页
目的观察WNT4/β-catenin信号通路及其抑制因子分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)在糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织中的表达变化,探讨其在肾脏纤维化发生发展中的可能作用。方法将大鼠随机分为正常对照(NC)组和DN组,8只/组。尾静脉注射STZ 55 mg/k... 目的观察WNT4/β-catenin信号通路及其抑制因子分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)在糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织中的表达变化,探讨其在肾脏纤维化发生发展中的可能作用。方法将大鼠随机分为正常对照(NC)组和DN组,8只/组。尾静脉注射STZ 55 mg/kg复制IDDM模型。HE、PAS及Masson染色观察肾组织形态学结构和纤维化病变;免疫组织化学法观察WNT4和β-catenin蛋白在肾组织的表达部位;Western blot检测WNT4、SFRP1、β-catenin、p-GSK-3β、GSK-3β、CollagenⅠ、α-SMA和E-cadherin蛋白在肾组织中的表达;Real-time PCR检测WNT4及SFRP1 mRNA在肾组织中的表达。结果与NC组相比,DN组大鼠肾组织纤维化病变明显;WNT4蛋白和mRNA表达显著增多(P<0.05);β-catenin、p-GSK-3β、α-SMA和CollagenⅠ蛋白的表达显著增多(P<0.05);E-cadherin蛋白表达显著减少(P<0.05);SFRP1蛋白和mRNA表达显著下降(P<0.05)。结论在DN发病中,WNT4/β-catenin信号通路异常活化;SFRP1表达减少可能抑制该通路,促进了DN肾纤维化的发生发展。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 wnt4 Β-连环蛋白 分泌型卷曲相关蛋白
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厄贝沙坦对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中Wnt/β-catenin信号途径表达的影响 被引量:13
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作者 闫喆 姚芳 +4 位作者 张丽萍 刘力强 郝军 傅淑霞 段惠军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1630-1634,共5页
目的探讨Wnt/β-catenin信号途径在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的表达及血管紧张素受体拮抗剂(ARB)厄贝沙坦对该途径活性的影响。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞(HKC),分为正常糖组、甘露醇对照组、高糖组、高糖+厄贝沙坦干预组... 目的探讨Wnt/β-catenin信号途径在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的表达及血管紧张素受体拮抗剂(ARB)厄贝沙坦对该途径活性的影响。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞(HKC),分为正常糖组、甘露醇对照组、高糖组、高糖+厄贝沙坦干预组。采用免疫细胞化学观察β-连环蛋白(β-catenin)表达情况;Western印迹检测Wnt4、β-catenin、E-钙粘蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平;逆转录-聚合酶链反应检测Wnt4和β-catenin mRNA表达水平。结果高糖组较正常糖及渗透浓度对照组Wnt4蛋白及mRNA、α-SMA蛋白表达增高,E-cadherin表达降低,β-catenin总蛋白及mRNA水平无明显变化,细胞质及核蛋白表达增强。Wnt4和β-catenin核蛋白表达在高糖诱导24h达高峰;厄贝沙坦下调Wnt4、α-SMA及β-catenin核蛋白表达,升高E-cadherin表达水平。结论Wnt/β-catenin信号途径可能参与了高糖介导的肾小管上皮细胞转分化过程。厄贝沙坦可能通过调节Wnt/β-catenin信号途径活性而抑制该过程。 展开更多
关键词 wnt4 Β-连环蛋白 E-钙粘蛋白 Α-平滑肌肌动蛋白 上皮细胞转分化 厄贝沙坦
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肾衰方及其拆方对肾间质纤维化Wnt4、β-catenin蛋白表达的影响 被引量:11
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作者 沈金峰 罗富里 +1 位作者 黄伟 晏子友 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第24期4050-4055,共6页
目的观察中药肾衰方及其拆方对大鼠肾间质纤维化肾组织Wnt4、β-catenin蛋白表达的影响。方法将72只大鼠随机分为:假手术组、模型组、肾衰方组、祛邪方组、补虚方组、贝那普利组,采用单侧输尿管梗阻动物模型,术后7、14 d分别观察检测24 ... 目的观察中药肾衰方及其拆方对大鼠肾间质纤维化肾组织Wnt4、β-catenin蛋白表达的影响。方法将72只大鼠随机分为:假手术组、模型组、肾衰方组、祛邪方组、补虚方组、贝那普利组,采用单侧输尿管梗阻动物模型,术后7、14 d分别观察检测24 h尿蛋白定量、血清肌酐、尿素氮水平以及梗阻侧大鼠肾组织Wnt4、β-catenin含量的表达。结果 7、14 d时模型组大鼠24 h尿蛋白定量、血尿素氮、血清肌酐、Wnt4、β-catenin水平均高于假手术组(P <0.05),与模型组比较,经肾衰方、祛邪方、补虚方和贝那普利治疗后24 h尿蛋白定量、血尿素氮、血清肌酐、Wnt4、β-catenin水平明显降低(P <0.05),第14 d肾衰方优于其拆方(祛邪方、补虚方)及贝那普利(P <0.05)。结论肾衰方及其拆方可能是通过抑制Wnt4、β-catenin蛋白的表达,减轻肾间质的纤维化,改善肾功能,从而延缓慢性肾脏病进展,且肾间质纤维化中医为本虚标实之证。 展开更多
关键词 肾衰方 wnt4 Β-CATENIN 肾间质纤维化
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Wnt/β-catenin信号途径在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用 被引量:10
7
作者 闫喆 姚芳 +3 位作者 段惠军 谭会斌 张春霞 邢玲玲 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2009年第4期396-400,共5页
目的探讨Wnt/β-catenin信号途径在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞(HKC),分为正常糖组、甘露醇对照组及高糖组。采用免疫细胞化学观察β-连环蛋白(β-catenin)表达情况;Westernblot检测Wnt4、... 目的探讨Wnt/β-catenin信号途径在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞(HKC),分为正常糖组、甘露醇对照组及高糖组。采用免疫细胞化学观察β-连环蛋白(β-catenin)表达情况;Westernblot检测Wnt4、β-catenin、E-钙粘蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平;逆转录-聚合酶链反应检测Wnt4和β-cateninmRNA表达水平。结果高糖组较正常糖及渗透浓度对照组Wnt4蛋白及mRNA、α-SMA蛋白表达增高,E-cadherin表达降低,β-catenin总蛋白及mRNA水平无明显变化,细胞浆及核内蛋白表达增强。高糖刺激肾小管上皮细胞Wnt4及核β-catenin蛋白表达呈时间依赖性,于高糖刺激后12h增强,24h达到高峰。结论Wnt/β-catenin信号通路可能参与了高糖介导的肾小管上皮细胞转分化过程。 展开更多
关键词 wnt4 Β连环蛋白 E-钙粘蛋白 Α-平滑肌肌动蛋白 上皮细胞转分化
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厚壳贻贝Wnt4基因时空表达 被引量:9
8
作者 徐跃峰 李一峰 +2 位作者 梁箫 陈芋如 杨金龙 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1567-1575,共9页
为探究Wnt4基因在厚壳贻贝幼虫发育阶段和组织生长过程中的作用,通过RACE技术克隆了厚壳贻贝Wnt4基因c DNA全长序列,该序列全长3342 bp,开放阅读框为1074 bp,编码357个氨基酸。该序列与人、小鼠、海胆、栉孔扇贝和长牡蛎等物种的同源性... 为探究Wnt4基因在厚壳贻贝幼虫发育阶段和组织生长过程中的作用,通过RACE技术克隆了厚壳贻贝Wnt4基因c DNA全长序列,该序列全长3342 bp,开放阅读框为1074 bp,编码357个氨基酸。该序列与人、小鼠、海胆、栉孔扇贝和长牡蛎等物种的同源性分别为61%、61%、60%、71%和76%。通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)分析Wnt4基因在厚壳贻贝成体多个组织中(外套膜、闭壳肌、鳃、雌雄性腺、足和消化腺)均有表达,其中在外套膜中表达量最高,推测可能与贝壳形成有关;Wnt4基因在厚壳贻贝幼虫发育阶段高表达主要集中在壳顶期,并推测Wnt4基因可能参与了贝壳形态结构发生转变的过程以及某些器官的形成与发育。本研究为进一步开展双壳贝类Wnt基因家族的功能研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 厚壳贻贝 wnt4 基因克隆 表达分析
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益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾间质Wnt与NF-κB影响的研究 被引量:6
9
作者 韩凤梅 方敬爱 +2 位作者 张晓东 孙艳艳 刘文媛 《中国中西医结合肾病杂志》 2012年第6期487-490,I0004,共5页
目的:观察益肾胶囊对糖尿病肾病(DN)大鼠模型肾间质Wnt4、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(PGSK-3β)及核因子-κB(NF-κB)表达水平的影响。方法:健康雄性Wistar大鼠32只,体重(200±20g),随机选取8只作为正常组,其余予腹腔注射链脲佐菌素... 目的:观察益肾胶囊对糖尿病肾病(DN)大鼠模型肾间质Wnt4、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(PGSK-3β)及核因子-κB(NF-κB)表达水平的影响。方法:健康雄性Wistar大鼠32只,体重(200±20g),随机选取8只作为正常组,其余予腹腔注射链脲佐菌素,制备糖尿病肾病动物模型,造模成功后随机分成4组:模型组(n=8),益肾胶囊组(n=8)和氯沙坦组(n=8)。连续给药12周。12周末,检测各组大鼠24h尿蛋白定量,血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),取肾组织行HE染色、免疫组化。光镜下观察肾间质病理变化情况,用免疫组化法检测Wnt4、PGSK-3β与NF-κB表达水平,行实时荧光定量(FQ-PCR)法测定肾组织中Wnt4、NF-κBmRNA的表达。结果:12周末,与正常组比较,模型组大鼠24h尿蛋白定量、血Scr、BUN明显增加,肾间质Wnt4、PGSK-3β与NF-κB表达水平明显升高,肾组织Wnt4、NF-κBmRNA表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,益肾胶囊治疗组大鼠24h尿蛋白定量、血Scr、BUN明显减少,肾间质Wnt4、PGSK-3β与NF-κB表达水平明显降低,肾组织Wnt4、NF-κBmRNA表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。氯沙坦治疗组与益肾胶囊治疗组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:益肾胶囊可能通过调节DN肾间质Wnt4、PGSK-3β、NF-κB的表达,影响了NF-κB和Wnt通道的信号转导,延缓了DN的进展。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 益肾胶囊 wnt4 PGSK-3β NF-ΚB
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自主跑轮运动上调成年小鼠海马齿状回区细胞增殖及BDNF、IGF1和WNT4的表达水平 被引量:8
10
作者 俞嘉玲 马黎 +1 位作者 马兰 陶冶铮 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期559-568,共10页
成年海马神经发生在调控学习记忆和情感过程中有重要作用。外界刺激因素,如自主运动能影响成年海马神经发生过程。自主运动能显著增强海马齿状回区的细胞增殖,并使新生神经元增多,但其具体机制仍不是十分清楚。本研究采用跑轮实验这种... 成年海马神经发生在调控学习记忆和情感过程中有重要作用。外界刺激因素,如自主运动能影响成年海马神经发生过程。自主运动能显著增强海马齿状回区的细胞增殖,并使新生神经元增多,但其具体机制仍不是十分清楚。本研究采用跑轮实验这种啮齿动物自主运动模型,使两月龄的C57BL/6成年小鼠跑轮15天后,用BrdU掺入实验观察海马齿状回区的细胞增殖情况。采用逆转录实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马齿状回区、阿蒙角区和皮层区成年神经发生相关因子的mRNA和蛋白表达水平。结果显示,自主跑轮运动15天后的成年小鼠海马齿状回区增殖细胞数目显著上调;齿状回区Bdnf、Igf1的mRNA和蛋白表达水平显著升高,Wnt4的mRNA表达水平显著升高,提示15天自主运动可能通过特异地增加海马齿状回区BDNF、IGF1和WNT4的表达产生上调成年海马神经发生的作用。 展开更多
关键词 自主运动 成年海马神经发生 BDNF IGF1 wnt4
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前癃通胶囊对前列腺增生大鼠前列腺组织TFF2、Wnt4、Wnt6的影响 被引量:3
11
作者 朱文雄 袁轶峰 +4 位作者 陈立蔓 张熙 刘涛 李博 陈其华 《湖南中医药大学学报》 CAS 2022年第5期743-747,共5页
目的观察前癃通胶囊对前列腺增生大鼠前列腺组织三叶因子2(trefoil factor 2,TFF2)、Wnt4、Wnt6的影响及其作用机制。方法取12只大鼠作为空白对照组。另取60只大鼠行去势手术,术后随机均分为前癃通高、中、低剂量组和癃闭舒组、模型对照... 目的观察前癃通胶囊对前列腺增生大鼠前列腺组织三叶因子2(trefoil factor 2,TFF2)、Wnt4、Wnt6的影响及其作用机制。方法取12只大鼠作为空白对照组。另取60只大鼠行去势手术,术后随机均分为前癃通高、中、低剂量组和癃闭舒组、模型对照组,于术后第8天开始皮下注射丙酸睾酮,每次1 mg/300 g,1次/d,连续30 d,建立前列腺增生大鼠模型。造模的同时,进行灌胃干预,每次1 mL/100 g,1次/d,持续30 d。前癃通低、中、高剂量组前癃通药液56.25、112.5、225.0 mg/mL;癃闭舒组给予癃闭舒药液168.75 mg/mL;空白对照组、模型对照组给予蒸馏水。末次给药结束后24 h,比较各组体质量及前列腺湿质量、体积、指数;采用HE染色法观察前列腺组织;采用Western blot检测各组大鼠前列腺组织中TFF2、Wnt4、Wnt6蛋白表达情况。结果空白对照组前列腺腔平滑圆润,上皮低柱状,管腔内见淡粉染均质状物,间质内几乎没有血管充血、炎性细胞浸润;模型对照组前列腺腔明显扩张,腺上皮呈高柱状,腔内充满粉色浓染均质状物,有明显的炎性细胞浸润;前癃通各剂量组和癃闭舒组前列腺组织病理改变较模型对照组有不同程度的改善,腔内均质状物颜色变浅,上皮低柱状,未见明显炎性细胞浸润。其中,前癃通高剂量组与癃闭舒组改善效果更为明显。模型对照组TFF2、Wnt4、Wnt6蛋白表达水平、前列腺湿质量、体积、指数均明显大于空白对照组(P<0.05,P<0.01)。前癃通中、高剂量组及癃闭舒组TFF2、Wnt4、Wnt6蛋白表达水平、前列腺湿质量、体积、指数均明显小于模型对照组(P<0.05,P<0.01)。前癃通低剂量组前列腺湿质量、体积、指数均明显大于癃闭舒组(P<0.05,P<0.01)。前癃通中、高剂量组Wnt4、Wnt6蛋白表达水平、前列腺湿质量、体积、指数及前癃通高剂量组TFF2蛋白表达水平均明显小于前癃通低剂量组(P<0.05,P<0.01)。前癃通高剂量 展开更多
关键词 前列腺增生 前癃通胶囊 wnt 三叶因子2 wnt4 wnt6
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益气养血方对膝骨关节炎模型大鼠血清Wnt4和WIF1的影响 被引量:7
12
作者 李翠葳 郑喜 +4 位作者 李兆福 祁燕 万春平 李小丝 管政 《风湿病与关节炎》 2017年第6期5-10,共6页
目的:探讨益气养血方对膝骨关节炎大鼠血清Wnt4、WIF1水平及膝关节软骨组织的影响,揭示其治疗骨关节炎的部分机制。方法:将70只SD大鼠随机分为益气养血方低、中、高剂量组,阳性对照组,模型对照组,空白对照组及假手术组,每组10只。除空... 目的:探讨益气养血方对膝骨关节炎大鼠血清Wnt4、WIF1水平及膝关节软骨组织的影响,揭示其治疗骨关节炎的部分机制。方法:将70只SD大鼠随机分为益气养血方低、中、高剂量组,阳性对照组,模型对照组,空白对照组及假手术组,每组10只。除空白对照组和假手术组外,其余各组大鼠采用改良Hulth法构建膝骨关节炎模型;假手术组仅切开关节囊,不切断韧带和半月板。造模成功后,益气养血方低、中、高剂量组分别予益气养血方1.89 g·kg^(-1)·d^(-1)、3.78 g·kg^(-1)·d^(-1)、7.56 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,阳性对照组给予双氯芬酸钠肠溶片混悬液4 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,模型对照组、假手术组给予生理盐水2.5 mL·d^(-1)灌胃,空白对照组不予任何药物。给药8周后,腹主动脉取血,检测血清中Wnt4、WIF1的含量;取右膝关节,HE染色,并进行病理评分。结果:与模型对照组比较,益气养血方各剂量组及阳性对照组病理评分降低(P<0.05);与空白对照组、假手术组比较,模型对照组大鼠血清中Wnt4水平升高、WIF1水平降低(P<0.05);与模型对照组比较,益气养血方中、高剂量组大鼠血清中Wnt4水平降低,WIF1水平升高(P<0.05或P<0.01);与阳性对照组比较,益气养血方中、高剂量对WIF1的上调作用更为明显(P<0.05)。结论:益气养血方能延缓骨关节炎软骨退变,保护关节软骨,其机制可能与下调Wnt4的表达,上调WIF1的水平,抑制关节软骨退变相关。 展开更多
关键词 骨关节炎 益气养血方 软骨形态 wnt4 WIF1
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日本血吸虫信号转导蛋白Sjwnt-4基因的克隆、表达及功能分析 被引量:6
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作者 陶丽红 姚利晓 +6 位作者 傅志强 冯新港 刘金明 石耀军 苑纯秀 蔡幼民 林矫矫 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期392-397,共6页
由Wnt基因家族产物与其它相关基因产物构成的Wnt信号通路,是细胞发育和生长调节的一个关键途径,对动物的发育特别是生殖系统的发育起重要的调节作用。在人类和小鼠中,Wnt4蛋白是性腺分化过程中主要调节因子,在胚胎发育中起着关键作用。... 由Wnt基因家族产物与其它相关基因产物构成的Wnt信号通路,是细胞发育和生长调节的一个关键途径,对动物的发育特别是生殖系统的发育起重要的调节作用。在人类和小鼠中,Wnt4蛋白是性腺分化过程中主要调节因子,在胚胎发育中起着关键作用。利用RACE技术从日本血吸虫19d童虫中首次扩增到一个Wnt家族基因,序列分析表明该基因的完整编码框含1311bp,编码436个氨基酸,理论分子量49.6kD。同源性分析结果表明,该基因的氨基酸序列具有典型Wnt家族蛋白特征,与日本三角涡虫、人Wnt4的氨基酸序列相似性分别达43%、37%,推测为血吸虫的Wnt4基因,命名为Sjwnt4(GenBank登陆号DQ643829)。实时定量PCR分析显示该基因在14d童虫、19d童虫、31d虫体、44d雌虫及44d雄虫中均有表达,其中19d童虫中的表达量明显高于其它发育阶段,44d雌虫中的表达量明显高于雄虫。构建了该基因的原核表达载体pGEX-4T-2-Sjwnt4,应用大肠杆菌系统进行了表达,表达蛋白以包涵体形式存在,Western印迹显示表达产物能被日本血吸虫成虫粗抗原免疫血清所识别。Sjwnt4基因及其表达产物的获得,为探索Wnt信号通路对血吸虫发育、生殖的调节提供了重要基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 信号转导 wnt4 发育 差异表达
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Wnt信号通路在氟中毒肾脏中表达及其意义 被引量:7
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作者 张颖 于燕妮 范彬 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期590-593,共4页
目的观察Wnt/β-catenin信号通路及其相关信号分子蛋白及mRNA表达水平在实验性氟中毒大鼠肾组织中的变化,探讨氟中毒发病机制。方法选择健康成年SD大鼠36只,雌雄各半,随机分为:对照组(饮水含氟量<1 mg/L),低、高氟组(饮水加氟量5、50... 目的观察Wnt/β-catenin信号通路及其相关信号分子蛋白及mRNA表达水平在实验性氟中毒大鼠肾组织中的变化,探讨氟中毒发病机制。方法选择健康成年SD大鼠36只,雌雄各半,随机分为:对照组(饮水含氟量<1 mg/L),低、高氟组(饮水加氟量5、50 mg/L),每组12只,观察大鼠氟斑牙发生情况,测定尿氟、骨氟含量及肾功能变化;光镜观察肾组织病理形态学变化;采用实时荧光定量PCR和免疫组化方法检测肾组织中Wnt4、β-连环蛋白(β-catenin)、E-粘钙蛋白(E-cadherin)蛋白及mRNA表达。结果低氟组大鼠氟斑牙检出率为75%(9/12),高氟组为91.7%(11/12),与对照组比较,染氟组大鼠尿氟、骨氟含量随染氟浓度增加而逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05);染氟组大鼠血清肌酐及尿素氮明显高于对照组(均P<0.05);光镜观察染氟组大鼠肾小管上皮细胞明显水肿、渗出、坏死,细胞间界限不清,且随着染氟浓度增高,损伤加重;低、高氟组大鼠肾组织中Wnt4、β-catenin、E-cadherin蛋白表达分别为[(7.78±1.17)、(6.66±0.59)、(3.23±0.82)]和[(17.46±3.18)、(12.46±0.89)、(1.23±0.35)],mRNA表达分别为[(3.01±0.81)、(1.86±0.43)、(0.276±0.12)]和[(5.79±0.86)、(5.84±1.19)、(0.12±0.46)],与对照组比较,氟中毒组大鼠肾组织中Wnt4、β-catenin蛋白和mRNA表达升高,而E-cadherin蛋白及mRNA表达降低。结论慢性氟中毒时,氟通过刺激Wnt信号通路中Wnt4、β-catenin过表达、E-cadherin低表达,导致肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT)。 展开更多
关键词 wnt4 β-连环蛋白(β-catenin) E-粘钙蛋白(E-cadherin) 氟中毒 肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT)
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内异康复片对EMT大鼠VEGF、MMP-9、HGF及Wnt4、Wnt5α的调控机制研究 被引量:5
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作者 黄映红 徐晓娟 +3 位作者 秦旭华 王张 王秋香 李宛静 《新中医》 CAS 2016年第9期217-221,共5页
目的:分析内异康复片对子宫内膜异位症(EMT)大鼠异位内膜黏附、浸润及增生的调控作用,并探讨其作用机制。方法:建立子宫内膜异位症大鼠模型,随机分为模型对照组、阳性对照组、中药低、中、高剂量组,每组10只。治疗3周后,测量各组大鼠异... 目的:分析内异康复片对子宫内膜异位症(EMT)大鼠异位内膜黏附、浸润及增生的调控作用,并探讨其作用机制。方法:建立子宫内膜异位症大鼠模型,随机分为模型对照组、阳性对照组、中药低、中、高剂量组,每组10只。治疗3周后,测量各组大鼠异位内膜体积;另取模型动物的异位内膜组织,分离异位内膜细胞,体外培养,设空白对照组、阳性对照组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,每组4个复孔。采用ELISA法测定血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)、肝细胞生长因子(HGF)含量;Western Blot检测Wnt4、Wnt5α的表达。结果:动物实验结果:与模型对照组比较,中药各剂量组、阳性对照组的异位内膜体积显著缩小,异位内膜厚度变薄,腺体面积减少,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05);中药高剂量组、阳性对照组的腺体数目显著少于模型对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);中药高剂量组VEGF、MMP-9含量显著低于模型对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞实验结果:中药低、中、高各剂量组培养上清液的VEGF含量显著低于空白对照组,中药高剂量组MMP-9含量显著低于空白对照组,中药高剂量组和阳性对照组Wnt4、Wnt5α表达水平均显著低于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:内异康复片治疗EMT的机理可能与抑制异位内膜细胞分泌VEGF、MMP-9,以及调节Wnt信号转导通路有关。 展开更多
关键词 内异康复片 EMT模型大鼠 血管内皮生长因子(VEGF) 基质金属蛋白酶-9(MMP-9) 肝细胞生长因子(HGF) wnt4 wnt 动物实验
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补骨脂素对环磷酰胺抑制小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的恢复作用
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作者 王成龙 杨志烈 +10 位作者 常君丽 赵永见 赵东峰 戴薇薇 吴宏进 张婕 王利波 谢颖 唐德志 王拥军 杨燕萍 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第1期16-23,共8页
背景:补骨脂素具有很强的抗骨质疏松活性,可能对化疗导致的骨质疏松具有恢复作用。目的:探讨补骨脂素对环磷酰胺抑制小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的恢复作用及机制。方法:分离培养C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞,以MTT法检测补骨脂素对... 背景:补骨脂素具有很强的抗骨质疏松活性,可能对化疗导致的骨质疏松具有恢复作用。目的:探讨补骨脂素对环磷酰胺抑制小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的恢复作用及机制。方法:分离培养C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞,以MTT法检测补骨脂素对骨髓间充质干细胞活力的影响,以成骨诱导结合碱性磷酸酶染色确定补骨脂素对环磷酰胺抑制骨髓间充质干细胞成骨分化恢复作用的最佳剂量。采用RT-qPCR法检测补骨脂素干预不同时间点成骨分化标志基因Runx2、ALP、Osteocalcin、骨保护素及Wnt/β-catenin信号通路相关基因Wnt1、Wnt4、Wnt10b、β-catenin、c-MYC的mRNA表达;采用Western blot法检测补骨脂素干预不同时间点成骨特异性转录因子Runx2及Wnt/β-catenin信号通路相关基因Activeβ-catenin、DKK1、c-MYC、Cyclin D1的蛋白表达。结果与结论:(1)不同浓度补骨脂素对骨髓间充质干细胞活力没有显著影响;200μmol/L补骨脂素干预后对环磷酰胺诱导骨髓间充质干细胞成骨分化抑制的恢复作用最佳;(2)补骨脂素可以逆转环磷酰胺条件培养基导致的骨髓间充质干细胞成骨标志基因Runx2、ALP、Osteocalcin、骨保护素mRNA表达和Runx2蛋白表达的降低;(3)补骨脂素可以逆转环磷酰胺条件培养基导致的骨髓间充质干细胞Wnt/β-catenin通路相关基因Wnt4、β-catenin、c-MYC mRNA表达和Activeβ-catenin、c-MYC、Cyclin D1蛋白表达的降低以及DKK1蛋白表达的升高;(4)结果表明,环磷酰胺能抑制小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化,补骨脂素对其具有恢复作用,且200μmol/L补骨脂素干预效果最佳,而这种保护作用可能与补骨脂素激活Wnt4/β-catenin信号通路有关。 展开更多
关键词 环磷酰胺 骨髓间充质干细胞 成骨分化 补骨脂素 wnt4 Β-CATENIN
miR-27a靶向调控SFRP1对结直肠癌生物学行为的影响
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作者 司马学琴 苏延停 曾智 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第3期418-423,共6页
目的探讨miR-27a在结直肠癌中的表达,并分析其靶向调控分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)对人结直肠癌细胞HCT116生物学行为的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中miR-27a和SFRP1 mRNA的表达情况;Western blo... 目的探讨miR-27a在结直肠癌中的表达,并分析其靶向调控分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)对人结直肠癌细胞HCT116生物学行为的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中miR-27a和SFRP1 mRNA的表达情况;Western blot检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中SFRP1蛋白表达水平;运用TargetScan预测软件及双荧光素酶报告基因实验检测miR-27a对SFRP1的靶向调控作用;将miR27a模拟物(miR-27a mimic)、miR-27a抑制物(miR-27a inhibitor)及阴性对照(NC)转染至HCT116细胞中;采用qRT-PCR测定各组细胞中miR-27a和SFRP1 mRNA的表达水平;运用四唑盐(MTT)比色法检测各组细胞增殖情况;Transwell实验评估各组细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测各组细胞中SFRP1、Wnt/β-catenin信号通路中的关键因子Wnt4和β-catenin的蛋白表达水平。结果与癌旁正常组织相比,miR-27a在结直肠癌组织中高表达,而SFRP1在结直肠癌组织中低表达(P<0.05);TargetScan预测软件和双荧光素酶报告基因实验表明miR-27a靶向调控SFRP1;与NC组相比,miR-27a mimic组miR-27a表达水平升高,细胞增殖、侵袭和迁移能力增强,SFRP1蛋白表达降低,Wnt4和β-catenin蛋白表达增加(P<0.05);与miR-27a mimic组相比,miR-27a inhibitor组细胞内miR-27a表达下降,细胞增殖、侵袭和迁移能力降低,SFRP1蛋白表达增加,Wnt4和β-catenin蛋白表达降低(P<0.05)。结论miR-27a能够靶向调控SFRP1,通过上调SFRP1,阻断下游的Wnt/β-catenin信号通路,抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移等生物学过程,从而发挥抑癌作用。为临床治疗提供了新方向。 展开更多
关键词 miR-27a SFRP1 结直肠癌 wnt4 Β-CATENIN
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肾病Ⅰ号方对单侧输尿管梗阻大鼠Wnt通路Wnt4和β-catenin表达的影响 被引量:6
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作者 林文博 程锦国 +2 位作者 陈建欧 武亚丹 李晓 《中国中医急症》 2017年第11期1938-1942,共5页
目的研究肾病Ⅰ号方对Wnt通路中Wnt4和β-catenin表达的影响及肾病Ⅰ号方抗肾纤维化的机理。方法雄性SPF级SD大鼠108只,随机分为假手术组、模型组、西药组(盐酸贝那普利)、肾病Ⅰ号方高、中、低剂量组,每组18只。假手术组仅游离左侧输尿... 目的研究肾病Ⅰ号方对Wnt通路中Wnt4和β-catenin表达的影响及肾病Ⅰ号方抗肾纤维化的机理。方法雄性SPF级SD大鼠108只,随机分为假手术组、模型组、西药组(盐酸贝那普利)、肾病Ⅰ号方高、中、低剂量组,每组18只。假手术组仅游离左侧输尿管,其余5组行左侧输尿管结扎术,于术后第2天灌胃。各组分别于灌胃后第7、14、21天随机选取6只大鼠留取24 h尿液,检测24 h尿蛋白(24 h UP);心脏取血,检测血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN);处死大鼠,取肾脏组织行Masson染色,光学显微镜下观察肾脏组织病理改变;免疫组化方法观察Wnt4和β-catenin在肾间质的阳性表达情况。结果模型组和给药组大鼠血Scr和BUN较假手术组显著升高(P<0.05),24 h UP无统计学差异(P>0.05),Masson染色示蓝色胶原组织增多,Wnt4和β-catenin表达增加(P<0.05)。西药组和肾病Ⅰ号方高、中、低剂量组大鼠血Scr和BUN较模型组显著降低(P<0.05),24 h UP差异无统计学意义(P>0.05),Masson染色示蓝色胶原组织减少,Wnt4和β-catenin表达降低(P<0.05)。与西药组比较,肾病Ⅰ号方高、中、低剂量组大鼠各检测指标无统计学差异(P>0.05)。结论肾病Ⅰ号方可保护肾小管,并可能通过降低肾小管上皮细胞中Wnt4和β-catenin的表达,减少细胞外基质堆积,从而达到抗肾纤维化的作用。 展开更多
关键词 肾病Ⅰ号方 单侧输尿管梗阻 肾纤维化 wnt4 β-catenin
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三角帆蚌中WNT4基因克隆及表达分析 被引量:5
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作者 刘斐斐 崔晓羽 +3 位作者 董赛赛 段胜华 汪桂玲 李家乐 《上海海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期801-810,共10页
为进一步了解WNT4在三角帆蚌性别决定过程中的作用,通过RACE(Rapid-amplification of cDNA ends)技术克隆获得了三角帆蚌WNT4基因的全长cDNA,共1560 bp,其中5′-UTR 396 bp、3′-UTR 24 bp,开放阅读框(ORF)为1140 bp,可以编码379个氨基... 为进一步了解WNT4在三角帆蚌性别决定过程中的作用,通过RACE(Rapid-amplification of cDNA ends)技术克隆获得了三角帆蚌WNT4基因的全长cDNA,共1560 bp,其中5′-UTR 396 bp、3′-UTR 24 bp,开放阅读框(ORF)为1140 bp,可以编码379个氨基酸,且该序列含有WNT家族特有结构域。对WNT4的氨基酸序列进行同源性分析后,发现该基因在物种间的进化关系和结构功能具保守性。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析发现WNT4基因在三角帆蚌雌雄多个组织(外套膜、闭壳肌、鳃、性腺、斧足和肝)中均有表达,表明其参与了多样的生物学过程,在鳃、斧足和肝中表达量较高,在性腺、闭壳肌和斧足中雌雄间有显著性差异,且雌性三角帆蚌的性腺、闭壳肌表达量显著高于雄性。原位杂交结果显示,WNT4在雌性三角帆蚌的卵母细胞上有明显的杂交信号,推测WNT4基因与性别决定相关。 展开更多
关键词 三角帆蚌 性别决定 wnt4 QRT-PCR 原位杂交
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WNT4基因沉默对PAX2诱导肾小管上皮细胞间充质转分化的影响 被引量:5
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作者 李里 南晓娟 吴玉斌 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期720-725,I0002,I0003,共8页
目的:观察体外转染配对盒基因2(PAX2)对WNT4通路的激活作用及WNT4通路对PAX2诱导转分化的作用,探讨PAX2转分化机制。方法:应用脂质体介导将重组质粒pEGFP-PAX2转染入体外培养的大鼠肾小管上皮细胞,经G418筛选,建立稳定表达PAX2细胞系。... 目的:观察体外转染配对盒基因2(PAX2)对WNT4通路的激活作用及WNT4通路对PAX2诱导转分化的作用,探讨PAX2转分化机制。方法:应用脂质体介导将重组质粒pEGFP-PAX2转染入体外培养的大鼠肾小管上皮细胞,经G418筛选,建立稳定表达PAX2细胞系。细胞分为稳定转染PAX2组、空载组和对照组。Western blotting法和实时荧光定量(Real-time)PCR法检测各组细胞WNT4和β-catenin表达。应用靶向WNT4基因的siRNA沉默稳定转染PAX2细胞的WNT4,应用荧光显微镜观察转染效率,进行沉默鉴定筛选出最佳干扰链。将最佳干扰链WNT4siRNA转染至稳定转染PAX2细胞。在沉默24、48、72和96h应用Westernblotting法和Real-time PCR法检测β-catenin、正常肾小管上皮细胞表型标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)和成纤维细胞表型标志物α-肌动蛋白(α-SMA)表达,同时筛选出沉默最佳时间点。应用免疫组织化学染色法检测沉默最佳时间点组E-cadherin和α-SMA蛋白表达。结果:Western blotting和Real-time PCR检测,稳定转染PAX2细胞组WNT4和β-catenin蛋白及mRNA表达水平较空载组和对照组明显增加(P<0.05)。阴性siRNA转染入稳定转染PAX2细胞24h后荧光显微镜观察,转染效率为47.46%±4.48%。3条WNT4干扰链分别转染至稳定转染PAX2细胞,Real-time PCR和Western blotting结果显示第3干扰链沉默效果最佳,WNT4mRNA表达抑制率为66.9%±3.8%(P<0.05);WNT4蛋白表达抑制率为63.7%±2.5%(P<0.05)。将最佳干扰链转染至稳定转染PAX2细胞,干扰24、48、72和96h后,各时间点细胞中的β-catenin mRNA及蛋白表达水平较对照组下调,72h组下调明显(P<0.05);各时间点细胞中E-cadherin mRNA及蛋白表达水平较对照组明显上调,72h组上调明显(P<0.05);各时间点细胞中α-SMA mRNA及蛋白表达水平较对照组明显下调,72h下调明显(P<0.05)。结论:PAX2转染至肾小管上皮细胞后激活了WNT4通路,PAX2在体外诱导正常肾小管上皮细胞间充质转分化可能� 展开更多
关键词 wnt4 配对盒基因2 肾小管上皮细胞 转分化 RNA干扰
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