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慢性束缚应激对小鼠海马N6-甲基腺苷及相关酶表达的影响 被引量：2
1
作者 张圆 时萌萌 +5 位作者 贺嘉贝 吴琼 钟小林 向宇燕 徐杨 何洁 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期142-148,共7页
目的探讨慢性束缚应激对小鼠海马N6-甲基腺苷(m6A)及相关酶表达影响。方法将20只C57BL/6J雄鼠随机分成对照(control)组、慢性束缚应激模型(CRS)组;给予CRS组小鼠3周慢性束缚应激建立小鼠焦虑模型,采用旷场实验和高架十字迷宫实验检测各... 目的探讨慢性束缚应激对小鼠海马N6-甲基腺苷(m6A)及相关酶表达影响。方法将20只C57BL/6J雄鼠随机分成对照(control)组、慢性束缚应激模型(CRS)组;给予CRS组小鼠3周慢性束缚应激建立小鼠焦虑模型,采用旷场实验和高架十字迷宫实验检测各组小鼠焦虑样行为变化;采用免疫组织化学法和m6A RNA甲基化检测试剂盒检测小鼠海马m6A的表达变化;采用Western blotting和Real-time PCR方法分析海马m6A相关酶表达变化。结果1.小鼠焦虑相关行为学检测结果显示,与control组相比,CRS组小鼠在旷场内框停留时间明显下降(P<0.01);高架十字迷宫开放臂探索时间减少(P<0.0001);2.m6A RNA甲基化检测试剂盒检测结果显示,与control组相比,CRS组小鼠海马m6A含量明显减少(P<0.05);免疫组化结果显示,与control组相比,CRS组小鼠海马m6A阳性产物明显减少(P<0.001);3.PCR结果显示,与control组相比,CRS组小鼠海马去甲基化酶间变性淋巴瘤激酯B(AlkB)同源蛋白5(ALKBH5)(P<0.001)、脂肪和肥胖相关蛋白(FTO)表达显著上调(P<0.05);甲基化酶Wilms肿瘤蛋白1相关蛋白(WTAP)(P<0.05)表达显著下调;m6A甲基化结合蛋白YTH结构域家族蛋白3(YTHDF3)(P<0.05)和YTH结构域蛋白2(YTHDC2)(P<0.01)表达显著上调。Western blotting结果显示,与control组相比,CRS组小鼠海马去甲基化酶ALKBH5(P<0.05)、FTO(P<0.05)表达显著上调;甲基化酶WTAP(P<0.01)表达显著下调;m6A甲基化结合蛋白YTHDF3(P<0.01)和YTHDC2(P<0.05)表达显著上调。结论在慢性束缚应激所致小鼠焦虑与海马m6A表达下调有关,其机制可能与m6A甲基化酶WTAP表达下调或去甲基化酶ALKBH5和FTO表达上调相关。 展开更多
关键词 慢性束缚应激 焦虑 N6-甲基腺苷 间变性淋巴瘤激酯B同源蛋白5 脂肪和肥胖相关蛋白 wilms肿瘤蛋白1相关蛋白 免疫印迹法 小鼠
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甲基化转移酶WTAP调节转录激活因子4表达加剧缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤
2
作者 杨娜 曹敏 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期279-285,共7页
目的观察甲基化转移酶Wilms肿瘤蛋白1相关蛋白(WTAP)在缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤中的调节作用及其分子机制。方法①实验一:将H9C2心肌细胞分为空白对照组和H/R模型组。采用H/R诱导H9C2细胞建立心肌缺血/再灌注(I/R)损伤模型;空... 目的观察甲基化转移酶Wilms肿瘤蛋白1相关蛋白(WTAP)在缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤中的调节作用及其分子机制。方法①实验一:将H9C2心肌细胞分为空白对照组和H/R模型组。采用H/R诱导H9C2细胞建立心肌缺血/再灌注(I/R)损伤模型;空白对照组不进行处理。采用N6-甲基腺苷(m6A)RNA甲基化测定试剂盒检测m6A水平;分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测甲基化转移酶〔WTAP、甲基转移酶样蛋白(METTL3、METTL14)〕的基因和蛋白表达水平。②实验二:将H9C2心肌细胞分为空白对照组、H/R+sh-NC组、H/R+sh-WTAP组。H/R+sh-WTAP组转染sh-WTAP以敲降WTAP表达,其余各组制模方法同实验一。转染48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western blotting检测WTAP、活化天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、活化多聚二磷酸腺苷酸核糖聚合酶(PARP)、转录激活因子4(ATF4)、蛋白激酶RNA样内质网激酶(PERK)、磷酸化PERK(p-PERK)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的蛋白表达水平;采用免疫荧光染色观察ATF4阳性表达情况。③实验三:将H9C2心肌细胞分为空白对照组、H/R+sh-NC组、H/R+sh-WTAP和H/R+sh-WTAP+ATF4组。H/R+sh-WTAP+ATF4组用过表达质粒ATF4转染H9C2心肌细胞,其余各组制模方法同实验二。采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western blotting检测ATF4、CHOP、活化caspase-3和活化PARP的蛋白表达水平。结果①实验一:H/R模型组m6A甲基化水平较空白对照组显著上调。RT-qPCR检测结果显示,H/R模型组METTL3、METTL14和WTAP基因表达水平均较空白对照组显著上调,以WTAP上调最显著;Western blotting检测结果呈相同趋势。提示甲基化转移酶WTAP的表达水平在H/R诱导的心肌细胞中显著上调。②实验二:H/R+sh-WTAP组细胞凋亡水平较H/R+sh-NC组明显减少〔(14.16±1.58)%比(24.51±2.38)%,P<0.05〕。Western blo 展开更多
关键词 甲基转移酶 wilms肿瘤蛋白1相关蛋白 细胞凋亡 内质网应激 缺氧/复氧
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敲低m6A甲基转移酶WTAP对皮肤鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响
3
作者 黄志顺 霍然 《山东医药》 CAS 2023年第17期33-37,共5页
目的通过敲低N6-甲基腺嘌呤(m6A)甲基转移酶Wilms肿瘤蛋白1相关蛋白(WTAP)在皮肤鳞癌(cSCC)细胞中的表达,探讨WTAP对cSCC细胞增殖,迁移和侵袭能力的影响。方法选取人cSCC细胞A431、SCL-1及正常人表皮角质形成细胞HaCaT,Western blottin... 目的通过敲低N6-甲基腺嘌呤(m6A)甲基转移酶Wilms肿瘤蛋白1相关蛋白(WTAP)在皮肤鳞癌(cSCC)细胞中的表达,探讨WTAP对cSCC细胞增殖,迁移和侵袭能力的影响。方法选取人cSCC细胞A431、SCL-1及正常人表皮角质形成细胞HaCaT,Western blotting法及qRT-PCR法分别检测各细胞中WTAP蛋白及mRNA表达。选取WTAP蛋白及mRNA表达最高的A431细胞转染WTAP敲低慢病毒shWTAP-1、shWTAP-2、shWTAP-3及阴性对照慢病毒shNC,使用qRT-PCR与Western blotting验证转染效率。选取敲低差异最显著的shWTAP-3转染细胞作为WTAP敲低组,shNC转染细胞作为对照组。采用比色法检测细胞m6A表达,CCK-8法及克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果WTAP敲低组m6A表达低于对照组,各时点细胞OD值均低于对照组,克隆形成数少于对照组,穿膜细胞数、细胞迁移率低于对照组(P均<0.05)。结论敲低WTAP可抑制cSCC细胞的增殖、侵袭和迁移,该作用可能通过下调m6A表达来实现。 展开更多
关键词 wilms肿瘤蛋白1相关蛋白 N6-甲基腺嘌呤 细胞增殖 细胞侵袭 细胞迁移 皮肤鳞状细胞癌
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