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人乳铁蛋白乳腺特异性表达载体的构建 被引量：1
1
作者 曹访 宋成义 +3 位作者 吴晗 谢飞 陈国宏 王杏龙 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第9期3535-3537,3539,共4页
[目的]以小鼠基因组为模板克隆乳清酸蛋白(whey acidic protein gene,WAP)5′和3′调控区,并构建人乳铁蛋白(Human Lactoferrin,hLTF)乳腺特异性表达载体。[方法]以高保真PCR技术扩增WAP5′和WAP3′长度分别为3.5 kb和4.6 kb的DNA片段,... [目的]以小鼠基因组为模板克隆乳清酸蛋白(whey acidic protein gene,WAP)5′和3′调控区,并构建人乳铁蛋白(Human Lactoferrin,hLTF)乳腺特异性表达载体。[方法]以高保真PCR技术扩增WAP5′和WAP3′长度分别为3.5 kb和4.6 kb的DNA片段,并克隆测序,应用体外连接技术连接pcDNA3.0、WAP5′、WAP3′和hLTF,转化连接产物,以限制性内切酶酶切、PCR验证和琼脂糖电泳鉴定阳性克隆。[结果]内切酶酶切及PCR鉴定结果显示,WAP5′和WAP3′基因克隆成功,其hLTF乳腺特异性表达载体构建正确。[结论]成功克隆WAP5′和WAP3′调控区;成功构建了hLTF乳腺特异性表达载体pW2-hLTF。 展开更多
关键词 人乳铁蛋白 乳清酸蛋白 表达载体 克隆
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人蛋白C转基因小鼠的建立及乳腺表达
2
作者 赵宝全 章金刚 +6 位作者 董朝辉 贾莉玮 沈永才 吕茂民 姚站馨 李伟静 孙曼霁 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第4期291-293,共3页
目的为了获得乳腺定位表达人蛋白C(hPC)的转基因动物。方法采用分步克隆的方法,构建大鼠乳清酸蛋白(WAP)启动子调控的人蛋白C质粒,命名为pWPC。将该质粒系统鉴定后,用PvuⅠ+SmaⅠ双酶切,回收4·6kb的片段(WAP-hPC-PolyA)。通过显微... 目的为了获得乳腺定位表达人蛋白C(hPC)的转基因动物。方法采用分步克隆的方法,构建大鼠乳清酸蛋白(WAP)启动子调控的人蛋白C质粒,命名为pWPC。将该质粒系统鉴定后,用PvuⅠ+SmaⅠ双酶切,回收4·6kb的片段(WAP-hPC-PolyA)。通过显微注射技术,将其注入昆明小鼠受精卵雄原核内;共注受精卵810枚,存活640枚,移植给28只假孕母鼠,怀孕的18只母鼠共产仔81只。结果提取鼠尾基因组DNA进行PCR检测,34只阳性,再经Southernblot检测,其中20只整合阳性;将7只整合阳性母鼠传代,产仔7日后收集乳汁,进行ELISA检测,结果均有表达。结论已成功建立了人蛋白C转基因鼠乳腺生物反应器,为hPC乳腺表达研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人蛋白C 转基因小鼠 乳腺生物反应器 乳清酸蛋白
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乳清酸蛋白基因调控序列的鉴定及转基因小鼠乳腺表达G-CSF载体的构建
3
作者 卢一凡 邓继先 +1 位作者 肖成祖 马清钧 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期441-444,共4页
乳清酸蛋白基因经亚克隆、酶切鉴定，并对该基因５′区进行克隆和序列分析，在核实序列正确后，构建了以其为调控序列、指导人Ｇ－ＣＳＦ基因的真核表达质粒，以用于转基因动物乳腺表达研究。
关键词 乳清酸蛋白 序列分析 表达载体 调控序列 构建
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