急性碘过量对大鼠甲状腺钠碘转运体表达的影响 被引量：6

1

作者 张新 李亚明 宗志红 《中国医学影像技术》 CSCD 北大核心 2009年第1期15-17,共3页

目的观察单次大剂量碘对大鼠甲状腺内钠碘转运体(NIS)蛋白表达量的影响,探讨应用99mTcO-4进行甲状腺扫描前是否应对碘的摄入进行限制。方法将SD大鼠分成给碘后1d处死组、给碘后7d处死组和对照组,每组8只;将2000μg碘化钠(NaI)溶于0.5ml... 目的观察单次大剂量碘对大鼠甲状腺内钠碘转运体(NIS)蛋白表达量的影响,探讨应用99mTcO-4进行甲状腺扫描前是否应对碘的摄入进行限制。方法将SD大鼠分成给碘后1d处死组、给碘后7d处死组和对照组,每组8只;将2000μg碘化钠(NaI)溶于0.5ml生理盐水注入前两组大鼠腹腔内,对照组注射等量生理盐水。各组大鼠处死后,取其甲状腺,应用Western免疫印迹方法探测NIS蛋白含量,通过光密度分析方法对信号强度进行半定量分析。结果给碘后1d处死组大鼠甲状腺内NIS蛋白含量明显低于对照组和给碘后7d处死组(P均<0.001),而给碘后7d处死组与对照组间NIS蛋白表达量的差异无统计学意义(P>0.05)。结论单次大剂量碘摄入可降低甲状腺内NIS蛋白的表达量,此效应在给碘1d后明显,7d后可恢复至正常水平。 展开更多

关键词 钠碘转运体 western免疫印迹 放射性核素显像

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口腔鳞癌中LATS2基因mRNA与蛋白表达及其相关性 被引量：5

2

作者 岳增文 曹选平 +2 位作者 刘进忠 王树斌 闫波 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期432-433,共2页

用RT-PCR和Western blot检测57例口腔鳞癌组织及12例正常口腔黏膜组织中LATS2 mRNA和蛋白表达;发现口腔黏膜正常组织中LATS2 mRNA和蛋白的表达率为100%;口腔鳞癌组织中LATS2基因mRNA和蛋白的表达率分别为47.4%(27/57)和42.1%(24/57),二... 用RT-PCR和Western blot检测57例口腔鳞癌组织及12例正常口腔黏膜组织中LATS2 mRNA和蛋白表达;发现口腔黏膜正常组织中LATS2 mRNA和蛋白的表达率为100%;口腔鳞癌组织中LATS2基因mRNA和蛋白的表达率分别为47.4%(27/57)和42.1%(24/57),二者表达具有明显的相关性(P<0.01),均与患者肿瘤的分化程度及淋巴结转移明显相关(P<0.05)。 展开更多

关键词 口腔鳞癌(OSCC) LATS2 RT-PCR western免疫印迹

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bFGF在体外培养的晶状体上皮细胞中的表达及对细胞周期的影响 被引量：3

3

作者 夏朝霞 吴艺 刘奕志 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2005年第2期143-146,共4页

目的　观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在体外培养的不同阶段小鼠晶状体上皮细胞(LECs)中的表达,及其对细胞周期的影响并探讨其机制。方法将昆明健康小鼠的晶状体前囊膜取出,做体外培养并传代。利用免疫组织化学法和Westernblot法检测... 目的　观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在体外培养的不同阶段小鼠晶状体上皮细胞(LECs)中的表达,及其对细胞周期的影响并探讨其机制。方法将昆明健康小鼠的晶状体前囊膜取出,做体外培养并传代。利用免疫组织化学法和Westernblot法检测bFGF在体外培养的不同阶段LECs中的表达情况,并利用流式细胞法检测相应阶段LECs的细胞周期情况。结果bFGF蛋白在LECs的原代、传第1、2代中明显表达,在传第3、4代中表达较弱。这与流式细胞法检测的细胞周期中有丝分裂相所占比例相符。结论bFGF参与LECs的增殖分化过程;并随着传代的递增,其促LECs增殖作用减弱,提示它与临床儿童后发性白内障发生率高有关。 展开更多

关键词 碱性成纤维细胞生长因子 晶状体上皮细胞 western免疫印迹 免疫组织化学

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原发性肝细胞癌中EphA7蛋白的表达及其临床意义 被引量：4

4

作者 张水军 张弓 +3 位作者 赵永福 吴阳 李捷 柴宇霞 《中华外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期53-56,共4页

目的探讨酪氨酸蛋白激酶EphA7蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化和Westernblot方法检测EphA7蛋白在40例原发性肝细胞癌及相应的癌旁肝组织和10例正常肝组织中的表达情况，并分析其与原发性肝细胞癌的临床病... 目的探讨酪氨酸蛋白激酶EphA7蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化和Westernblot方法检测EphA7蛋白在40例原发性肝细胞癌及相应的癌旁肝组织和10例正常肝组织中的表达情况，并分析其与原发性肝细胞癌的临床病理因素之间的关系。结果EphA7蛋白的表达主要位于原发性肝细胞癌细胞或肝细胞的胞质，以及纤维间隔内的血管内皮细胞。原发性肝细胞癌组织、癌旁肝组织及正常肝组织中均有EphA7蛋白的表达，Westernblot分析结果显示EphA7蛋白在肝细胞癌组织（0．58±0．26）中的表达水平高于癌旁肝组织（0．40±0．22，P〈0．05）和正常肝组织（0．32±0．16，P〈0．05），而在癌旁肝组织和正常肝组织中的表达差异无统计学意义（P〉0．05）；EphA7蛋白的表达水平与原发性肝细胞癌细胞的分化程度、门静脉癌栓、淋巴结转移和甲胎蛋白水平等临床病理因素相关（P〈0．05）。结论EphA7蛋白的表达与原发性肝细胞癌的生物学行为密切相关，可能在原发性肝细胞癌的恶性转化、侵袭和转移过程中发挥重要作用。 展开更多

关键词 癌 肝细胞 受体 EPHA7 免疫组化 western免疫印迹

原文传递

结合珠蛋白mRNA及其蛋白在尖锐湿疣皮损中的表达 被引量：3

5

作者 鲁建云 吴志强 +5 位作者 谭丽娜 陈静 向亚平 左成忻 黄进华 蒋先镇 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1020-1025,共6页

目的:从mRNA和蛋白水平检测尖锐湿疣皮损中结合珠蛋白的表达,探讨结合珠蛋白在尖锐湿疣皮损局部免疫异常机制中的作用。方法:采用原位杂交、免疫组织化学技术和Western免疫印迹的方法,检测30例尖锐湿疣患者皮损及20例正常包皮组织中结... 目的:从mRNA和蛋白水平检测尖锐湿疣皮损中结合珠蛋白的表达,探讨结合珠蛋白在尖锐湿疣皮损局部免疫异常机制中的作用。方法:采用原位杂交、免疫组织化学技术和Western免疫印迹的方法,检测30例尖锐湿疣患者皮损及20例正常包皮组织中结合珠蛋白mRNA及其蛋白的表达情况。结果:结合珠蛋白mRNA及其蛋白表达部位主要在表皮的基底层和棘细胞层。结合珠蛋白mRNA在尖锐湿疣皮损组和对照组中原位杂交染色灰度值分别为106.24±5.85和122.72±4.41,差异有统计学意义(P<0.05);结合珠蛋白在尖锐湿疣皮损组和对照组中免疫组化染色灰度值分别为120.24±1.83和128.72±2.41,差异有统计学意义(P<0.05);Western免疫印迹检测结果显示尖锐湿疣皮损组和对照组光密度值分别为0.53±0.11和0.24±0.06,尖锐湿疣皮损组表达较对照组明显升高(P<0.05)。结论:尖锐湿疣皮损表皮细胞中结合珠蛋白mRNA表达增强,合成结合珠蛋白水平升高。尖锐湿疣皮损中结合珠蛋白可能通过抑制朗格汉斯细胞的功能成熟和抑制角质形成细胞的免疫活性参与尖锐湿疣的局部免疫逃逸。 展开更多

关键词 尖锐湿疣 结合珠蛋白 原位杂交 免疫组织化学 western免疫印迹

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1，6-二磷酸果糖对病毒性心肌炎小鼠心肌烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶p22phox亚基蛋白表达的影响 被引量：3

6

作者 高新宇 杨奕 +8 位作者 娄序笙 余首先 刘春南 曹妍 赵晓宇 孙鹤 张礼 尹新华 赵德超 《中华地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期50-53,共4页

目的观察1，6-二磷酸果糖（FDP）对病毒性心肌炎小鼠心肌还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶p22phox亚基蛋白表达的影响，探讨FDP对病毒性心肌炎的保护作用。方法4周龄雌性BALB／c小鼠30只，体质量（12±2）g。按体质... 目的观察1，6-二磷酸果糖（FDP）对病毒性心肌炎小鼠心肌还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶p22phox亚基蛋白表达的影响，探讨FDP对病毒性心肌炎的保护作用。方法4周龄雌性BALB／c小鼠30只，体质量（12±2）g。按体质量将小鼠随机分为病毒组和治疗组，每组15只。两组小鼠同时1次性腹腔注射柯萨奇B3病毒（CVB3）0．1ml，治疗组在注射CVB3后的第1天，每日腹腔注射1次FDP，连续注射7d，注射剂量为300mg／kg。在注射结束后的第4、8、2l天，两组分别各处死5只小鼠，取心脏做心肌病理检查，Western免疫印迹法检测病毒性心肌炎小鼠心肌细胞内NADPH氧化酶p22phox亚基蛋白表达，图像分析系统测量p22phox亚基蛋白阳性表达区域平均吸光度∽）值，并进行定量分析。结果感染后第4天，光镜下病毒组小鼠心肌间可见少量炎症细胞浸润，心肌细胞肿胀；治疗组小鼠心肌间仅有少量炎性细胞浸润。感染后第8天，病毒组小鼠心肌出现坏死性崩解，大量炎症细胞浸润；治疗组小鼠心肌间可见稀疏的散在炎性细胞浸润。感染后第21天，病毒组小鼠心肌坏死灶中有慢性炎症细胞浸润，出现结缔组织增生；治疗组小鼠心肌可见少量慢性炎症细胞浸润。病毒组在第8天炎症浸润最严重。在病毒感染后第4、8、21天，治疗组心肌病变积分[（0．88±0．23）、（2．20±0．24）、（1．56±0．17）分]低于病毒组[（1．32±0．12）、（3．0±0．25）、（2．04±0．17）分，t值分别为3．793、5．1645、4．457，P均〈0．01]。Western免疫印迹法分析结果显示，在病毒感染后第4、8、21天，治疗组NADPH氧化酶p22phox亚基蛋白表达（0．776±0．017、0．751±0．018、0．689±0．034）明显低于病毒组（1．052±0．015、0．952±0．019、0．907±0．025，t值分别为3．391、6．716、2．750，P均〈0．0l或〈0．05）。结论FDP 展开更多

关键词 1 6-二磷酸果糖 病毒性心肌炎 NADPH氧化酶 western免疫印迹

原文传递

中枢神经系统损伤过程中Nogo-A降解片段的检测 被引量：3

7

作者 郑春霞 金卫林 鞠躬 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期458-460,共3页

目的　观察大鼠脊髓横断、脑缺血和海人藻酸 (KA)注射所致的脑损伤模型Nogo A的降解情况 ,以推测Nogo A降解片段产生的机制和可能的作用。　方法　制作大鼠脊髓横断、脑缺血和KA注射所致的脑损伤模型 ,Western免疫印迹方法检测Nogo A降... 目的　观察大鼠脊髓横断、脑缺血和海人藻酸 (KA)注射所致的脑损伤模型Nogo A的降解情况 ,以推测Nogo A降解片段产生的机制和可能的作用。　方法　制作大鼠脊髓横断、脑缺血和KA注射所致的脑损伤模型 ,Western免疫印迹方法检测Nogo A降解片段。　结果　大鼠脊髓横断和脑缺血模型均检测到Nogo A降解片段 ,而KA注射所致的脑损伤模型未发现Nogo A降解片段。　结论　CNS机械性和缺血性损伤可能通过某些机制导致Nogo A发生降解。 展开更多

关键词 NOGO-A 损伤 缺血 western免疫印迹 大鼠

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对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒衣壳蛋白基因的克隆表达及抗体制备 被引量：2

8

作者 彭小莉 刘棠 +5 位作者 徐维佳 王群力 陈伟玲 陈双雅 王景明 谢明星 《台湾海峡》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期37-42,共6页

本文根据GenBank登录的对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的全基因组序列(NC-002190),设计出主要结构蛋白基因的相应引物,从厦门发病的对虾中,提取DNA,以此为模板,利用PCR扩增目的基因.再将目的基因分别与pGEX-6p1载体和pET-28a... 本文根据GenBank登录的对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的全基因组序列(NC-002190),设计出主要结构蛋白基因的相应引物,从厦门发病的对虾中,提取DNA,以此为模板,利用PCR扩增目的基因.再将目的基因分别与pGEX-6p1载体和pET-28a载体连接,构建重组表达载体pGEX-IV、pET-IV,重组子经酶切和测序鉴定后导入表达型大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测,大小约为62KDa和41KDa,与预测大小一致.将pET-IV表达重组蛋白经纯化,免疫小鼠,W estern免疫印迹反应结果表明其抗体均可与pGEX-IV和pET-IV表达的蛋白发生特异性反应.本研究的结果为对虾IHHNV的快速检测及其免疫提供了研究基础. 展开更多

关键词 传染性皮下及造血组织坏死病毒 衣壳蛋白 基因克隆及表达 蛋白质纯化 western免疫印迹 对虾

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不同类群寄生蜂卵黄蛋白的检测和免疫相关性分析 被引量：2

9

作者 董胜张 叶恭银 胡萃 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1024-1027,共4页

为了探讨寄生蜂种类与卵内蛋白质存在与否及免疫相关性,采用蛋白质电泳和Western免疫印迹的方法对7科12种寄生蜂卵内蛋白进行了检测和分析。结果表明:小蜂科和姬蜂科寄生蜂与其他昆虫一样,卵内含有分子量约为200kD的卵黄原蛋白;而茧蜂... 为了探讨寄生蜂种类与卵内蛋白质存在与否及免疫相关性,采用蛋白质电泳和Western免疫印迹的方法对7科12种寄生蜂卵内蛋白进行了检测和分析。结果表明:小蜂科和姬蜂科寄生蜂与其他昆虫一样,卵内含有分子量约为200kD的卵黄原蛋白;而茧蜂科寄生蜂不含有卵黄原蛋白,但存在分子量为40～80kD的多肽,且在所有供试的寄生蜂卵内均存在一个分子量约为62kD的多肽。 展开更多

关键词 寄生蜂 卵黄蛋白 卵黄原蛋白 免疫相关性 western免疫印迹

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小鼠原始生殖细胞定向分化为神经样细胞的研究 被引量：1

10

作者 孙燕 《海南医学院学报》 CAS 2009年第7期705-707,共3页

目的:探讨微囊对原始生殖细胞(PGCs)定向分化为神经样细胞的诱导效果。方法:用原代PGCs经悬浮培养获取类胚体(EBs);将孕13d胎鼠的大脑半球取出,将其中的神经干细胞(NSCs)作为包在微囊里的成分。待EBs贴壁后将含有NSCs的微囊放入其中,同... 目的:探讨微囊对原始生殖细胞(PGCs)定向分化为神经样细胞的诱导效果。方法:用原代PGCs经悬浮培养获取类胚体(EBs);将孕13d胎鼠的大脑半球取出,将其中的神经干细胞(NSCs)作为包在微囊里的成分。待EBs贴壁后将含有NSCs的微囊放入其中,同时另外孔板中放入等量的EBs让其自然分化。将微囊诱导分化出的细胞进行NESTIN、NSE和GFAP免疫染色鉴定。结果:用微囊诱导定向分化为神经样细胞的比例显著高于自然分化的比例。结论:悬浮培养可使PGCs形成EBs,将EBs贴壁培养可自发分化形成内、中和外三个胚层的细胞,即上皮样细胞、成纤维样细胞和神经样细胞。通过微囊的诱导方法可以使EGs定向分化为神经样细胞。 展开更多

关键词 原始生殖细胞 细胞分化 western免疫印迹 神经干细胞 小鼠

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地奥司明对肾缺血/再灌注大鼠肾组织PECAM-1表达的影响 被引量：1

11

作者 袁铭 韩勇 +4 位作者 肖漓 许晓光 高钰 钱叶勇 石炳毅 《解放军医学院学报》 CAS 2013年第9期985-988,共4页

目的观察地奥司明(diosmin,DOSM)对肾缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)大鼠肾组织PECAM-1表达水平的影响,并探讨其对肾脏的保护机制。方法 150只SD大鼠随机分成3组:假手术(sham operation,SO)组、肾缺血/再灌注模型组(I/R)和地奥... 目的观察地奥司明(diosmin,DOSM)对肾缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)大鼠肾组织PECAM-1表达水平的影响,并探讨其对肾脏的保护机制。方法 150只SD大鼠随机分成3组:假手术(sham operation,SO)组、肾缺血/再灌注模型组(I/R)和地奥司明+肾缺血/再灌注模型组(DOSM+I/R)。在再灌注不同时间点分别采用免疫组化及Western免疫印迹方法测定肾脏组织中PECAM-1的表达水平。结果在1 h、6 h、12 h、24 h和48 h不同时间点的肾组织中,I/R和DOSM+I/R两组PECAM-1的表达水平均随时间逐渐上调,并于48 h达最高。而在DOSM组显著低于I/R组(P<0.05或P<0.01)。Western免疫印迹与免疫组织化学检测结果基本一致。结论 DOSM可显著降低肾I/R病理过程中PECAM-1的表达,有助于减轻I/R时炎性细胞的浸润,从而减轻缺血再灌注损伤,保护肾功能。 展开更多

关键词 地奥司明 肾缺血 再灌注 血小板内皮细胞黏附分子-1 免疫组化 western免疫印迹

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MCP-1 mRNA及其蛋白在尖锐湿疣表皮中的表达 被引量：1

12

作者 鲁建云 吴志强 +5 位作者 谭丽娜 向亚平 陈静 左成忻 黄进华 蒋先镇 《岭南皮肤性病科杂志》 2008年第3期117-120,共4页

目的:从mRNA和蛋白水平检测尖锐湿疣表皮中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达,探讨其在尖锐湿疣皮损局部免疫异常机制的作用。方法:采用原位杂交、免疫组化和Western免疫印迹的方法,检测30例尖锐湿疣表皮及20例正常包皮表皮中MCP-1 mRNA... 目的:从mRNA和蛋白水平检测尖锐湿疣表皮中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达,探讨其在尖锐湿疣皮损局部免疫异常机制的作用。方法:采用原位杂交、免疫组化和Western免疫印迹的方法,检测30例尖锐湿疣表皮及20例正常包皮表皮中MCP-1 mRNA及其蛋白的表达水平。结果:MCP-1 mRNA及其蛋白表达部位主要在表皮基底层。MCP-1 mRNA在尖锐湿疣皮损组和对照组中原位杂交染色阳性单位值分别为10.7±5.1和11.2±4.6,差异无统计学意义(t=-8.70,P>0.05);MCP-1蛋白在尖锐湿疣皮损组和对照组中免疫组化染色阳性单位值分别为10.9±5.1和11.5±4.9,差异无统计学意义(t=-0.981,P>0.05);Western免疫检测结果显示尖锐湿疣皮损组和对照组表达的结合珠蛋白平均光密度值分别为0.18±0.06和0.20±0.06,两者差异无统计学意义(t=-0.721,P>0.05)。结论:尖锐湿疣患者皮损MCP-1无论是其mRNA水平还是蛋白水平均表达微弱,可能是导致尖锐湿疣免疫微环境异常的原因之一。 展开更多

关键词 尖锐湿疣 单核细胞趋化蛋白-1 原位杂交 免疫组化 western免疫印迹

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蛋白激酶C对转录延伸正调节因子b(P-TEFb)的影响 被引量：1

13

作者 任浙丹 黄迎彬 +3 位作者 杨洁 赵长宏 田平平 吴传芳 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期1204-1208,共5页

本文探讨了PKC的4种亚型α、βⅡ、γ和λ对P-TEFb各蛋白组分的表达影响.成功构建了带有HA标签的pcDNA3.1-PKC的各亚型真核表达载体,并转染HEK293细胞株,用Western bolt检测其表达情况,发现这四种PKC亚型在细胞中表达良好。将PKCβⅡ或... 本文探讨了PKC的4种亚型α、βⅡ、γ和λ对P-TEFb各蛋白组分的表达影响.成功构建了带有HA标签的pcDNA3.1-PKC的各亚型真核表达载体,并转染HEK293细胞株,用Western bolt检测其表达情况,发现这四种PKC亚型在细胞中表达良好。将PKCβⅡ或者PKCλ转染进入HEK293细胞株,发现其可使CDK9和Cyclin T蛋白表达量升高;但在细胞中高表达PKCα和PKCγ,对P-TEFb各组分表达量没有影响.表明PKC可通过提高P-TEFb的组分表达量,从而上调某些基因的表达. 展开更多

关键词 蛋白激酶C(PKC) 转录调控 western免疫印迹 转录延伸正调节因子b(P—TEFb)

原文传递

妊娠中期因子在牙周炎治疗前后的表达情况

14

作者 王丽 焦晓辉 李晓红 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2012年第3期150-153,共4页

目的:研究妊娠中期因子(midkine,MK)在牙周炎治疗前后的表达情况。方法:取雄性Wist-ar大鼠50只,随机抽取10只用于正常对照,另40只采用结扎法建立牙周炎模型后,再次分为炎症组、恢复组,炎症组不作任何处理立即处死并取材;恢复组进行牙周... 目的:研究妊娠中期因子(midkine,MK)在牙周炎治疗前后的表达情况。方法:取雄性Wist-ar大鼠50只,随机抽取10只用于正常对照,另40只采用结扎法建立牙周炎模型后,再次分为炎症组、恢复组,炎症组不作任何处理立即处死并取材;恢复组进行牙周基础治疗,于术后6周处死,取材,应用免疫组织化学、Western免疫印迹方法分别检测MK蛋白表达的情况。结果:MK阳性产物位于牙龈上皮、沟内上皮和结合上皮细胞胞浆中,呈棕黄色颗粒,偶见胞核中亦有表达。炎症组MK的表达主要集中于棘细胞层和颗粒细胞层,表达量为弱阳性和中强阳性;恢复组中MK的表达主要集中于棘细胞层和基底细胞层,表达量为强阳性和中强阳性;对照组中MK的表达较少。Western免疫印迹显示:MK在恢复组中的表达量明显高于炎症组,差异有统计学意义(P<0.05),与免疫组织化学检测结果基本一致。结论:MK同时具有致炎和促进组织修复的功能,在牙周炎治疗前以参与致炎为主,治疗后以促进组织修复为主。 展开更多

关键词 妊娠中期因子midkine(MK) 牙周炎 免疫组化 western免疫印迹

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苏尼替尼对HeLa细胞中的CDK4的影响

15

作者 郑昆 张元新 +1 位作者 展瑞岩 李世军 《吉林师范大学学报（自然科学版）》 2013年第1期84-86,共3页

以不同浓度的Sutent作用于HeLa细胞,采用MTT法检测Sutent对HeLa细胞增殖的影响.流式细胞术检测Sutent对HeLa细胞周期的影响;Western免疫印迹检测不同浓度的Sutent对HeLa细胞中CDK4蛋白表达的变化;探讨苏尼替尼(Sutent)对HeLa细胞中CDK4... 以不同浓度的Sutent作用于HeLa细胞,采用MTT法检测Sutent对HeLa细胞增殖的影响.流式细胞术检测Sutent对HeLa细胞周期的影响;Western免疫印迹检测不同浓度的Sutent对HeLa细胞中CDK4蛋白表达的变化;探讨苏尼替尼(Sutent)对HeLa细胞中CDK4的影响.结果表明Sutent能够抑制HeLa细胞的增殖,引起HeLa细胞发生G2期周期阻滞,并且呈浓度依赖性降低HeLa细胞中CDK4蛋白表达量.显示了Sutent作为多靶点药物在药物研发中具有潜在的重要的研究价值. 展开更多

关键词 苏尼替尼 CDK4 细胞增殖 细胞周期 western免疫印迹

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第一类整合酶表达载体的构建及鉴定

16

作者 顿博影 曾冰冰 +1 位作者 闫鹤 石磊 《现代食品科技》 EI CAS 2008年第1期11-13,共3页

Inti1基因是编码整合酶的基因,采用PCR方法对Inti1基因片断进行扩增,扩增子采用Ned1和BamH1双酶切,并克隆到pET19b载体上。把构建好的载体转化至E.coli BL21(DE3)中,在IPTG下进行诱导表达。经SDS-PAGE电泳鉴定以及使用特异性抗His-整合... Inti1基因是编码整合酶的基因,采用PCR方法对Inti1基因片断进行扩增,扩增子采用Ned1和BamH1双酶切,并克隆到pET19b载体上。把构建好的载体转化至E.coli BL21(DE3)中,在IPTG下进行诱导表达。经SDS-PAGE电泳鉴定以及使用特异性抗His-整合酶单克隆抗体的Western-Bloting证明该重组E.coli BL21(DE3)-Inti1在IPTG诱导下可表达整合酶,此为整合酶表达调控研究奠定了基础。 展开更多

关键词 整合酶 Inti1 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 western免疫印迹 食品

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FKBP38的原核表达、抗体制备及其应用

17

作者 刘安玲 赵莉 +4 位作者 Ma Dong-zhu 贾春宏 李明 温芝华 叶永斌 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1226-1229,共4页

目的构建人FKBP38 N-末端及C-末端原核表达载体并使其在大肠杆菌中高效表达,纯化基因表达产物,制备兔多克隆抗体并对该抗体用于Western免疫印迹、免疫荧光及免疫组织化学检测进行评价,为研究FKBP38的功能奠定基础。方法以人FKBP38 cDNA... 目的构建人FKBP38 N-末端及C-末端原核表达载体并使其在大肠杆菌中高效表达,纯化基因表达产物,制备兔多克隆抗体并对该抗体用于Western免疫印迹、免疫荧光及免疫组织化学检测进行评价,为研究FKBP38的功能奠定基础。方法以人FKBP38 cDNA为模板,根据人FKBP38全长cDNA系列,设计PCR引物分别扩增N-末端(1-207aa)及C-末端(209-387aa),将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体pGEX-6P1中,经BamH I/Sal I双酶切鉴定。GST-FKBP38-N及GST-FKBP38-C融合蛋白在硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下在大肠杆菌BL21中得到表达。利用谷胱甘肽亲和层析纯化融合蛋白,用纯化的GST-FKBP38-N融合蛋白及GST-FKBP38-C融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体并进行纯化。使用纯化的抗FKBP38多抗以Western免疫印迹、免疫荧光及免疫组织化学检测FKBP38的表达与细胞内的定位。结果成功构建FKBP38 N-末端及C-末端原核表达载体,表达并纯化了GST-FKBP38-N融合蛋白及GST-FKBP38-C融合蛋白,制备并纯化了FKBP38特异性抗体。该抗体用于Western免疫印迹检测FKBP38在不同细胞株中的表达,特异性强、效价高;用于免疫荧光检测FKBP38在细胞内主要定位于线粒体上;用于免疫组织化学检测FKBP38在乳腺组织细胞呈现胞浆阳性。结论 FKBP38特异性抗体制备成功,该抗体可用于FKBP38的免疫印迹、免疫荧光及免疫组织化学检测,为深入研究FKBP38的功能奠定基础。 展开更多

关键词 FKBP38 多克隆抗体 western免疫印迹 免疫荧光 免疫组织化学

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反义c-myc基因转染抑制人晶状体上皮细胞增殖的研究 被引量：4

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作者 孙洁 谢立信 +1 位作者 王瑶 刘廷 《中华眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期161-165,共5页

目的探讨腺病毒介导的反义c-myc基因(Ad-AS-myc)转染对人晶状体上皮细胞(HLEC)系B3(HLE-B3)增殖、凋亡及细胞周期的影响. 方法将Ad-AS-myc转染HLE-B3,观察细胞形态变化;采用生长曲线法、噻唑蓝比色法分析细胞增殖改变;使用流式细胞仪测... 目的探讨腺病毒介导的反义c-myc基因(Ad-AS-myc)转染对人晶状体上皮细胞(HLEC)系B3(HLE-B3)增殖、凋亡及细胞周期的影响. 方法将Ad-AS-myc转染HLE-B3,观察细胞形态变化;采用生长曲线法、噻唑蓝比色法分析细胞增殖改变;使用流式细胞仪测定细胞凋亡变化、分析细胞周期改变(DNA倍体法);采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法、Western免疫印迹法检测细胞c-myc mRNA及其蛋白产物表达的变化. 结果 Ad-AS-myc成功转染后,HLE-B3逐渐变圆、脱壁.转染后24～96 h细胞的增殖受到抑制,与相应对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);凋亡细胞比例(转染48 h为18.33%,转染96 h为26.93%)明显升高,与相应对照组(48 h为3.19%,96 h为1.75%)比较,差异均有统计学意义(P<0.01);细胞出现G1期阻滞现象,表现为G1期细胞比例[转染48 h为(60.50±7.59)%,转染96 h为(81.90±8.60)%]增加和S期细胞比例[转染48 h为(28.40±3.38)%,转染96 h为(16.75±8.97)%]下降,与相应对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);RT-PCR法和Western免疫印迹法检测发现c-myc mRNA及其蛋白产物水平特异性下调. 结论 Ad-AS-myc可成功转染HLE-B3,并特异性抑制c-myc基因的表达,诱发细胞G1期阻滞,有效抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡.(中华眼科杂志,2005,41:161-165) 展开更多

关键词 反义C-MYC 基因转染 人晶状体上皮细胞增殖 RT-PCR法 western免疫印迹法 白内障

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乳腺癌缺失基因1在子宫内膜癌中的表达及意义 被引量：3

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作者 林丽 孙春霞 +1 位作者 卢晓芬 吴洪英 《中国综合临床》 2015年第1期78-80,共3页

目的检测乳腺癌缺失基因1（deletedinbreastcancer1，DBCl）在子宫内膜腺癌组织中的表达情况，探讨其在肿瘤发展过程中的作用。方法收集山东省聊城市人民医院28例子宫内膜腺癌患者手术切除的新鲜子宫内膜癌组织及癌旁正常子宫内膜组织... 目的检测乳腺癌缺失基因1（deletedinbreastcancer1，DBCl）在子宫内膜腺癌组织中的表达情况，探讨其在肿瘤发展过程中的作用。方法收集山东省聊城市人民医院28例子宫内膜腺癌患者手术切除的新鲜子宫内膜癌组织及癌旁正常子宫内膜组织，所有患者术前均未应用放疗、化疗等治疗，采用荧光定量PCR和Western免疫印迹技术检测DBC1在子宫内膜腺癌组织及其癌旁正常子宫内膜组织中的表达情况。结果荧光定量PCR结果显示子宫内膜腺癌组织中DBC1 mRNA的表达量与癌旁正常组织相比，其相对表达量为3．05，二者比较差异有统计学意义（P〈0．05）；Western免疫印迹结果显示子宫内膜癌组织及癌旁正常组织中DBC1蛋白质的表达与内参基因B-actin相比，二者的相对表达量分别为1．01±0．08；0．66±0．14，二者比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论DBC1在子宫内膜腺癌中过表达，可能在疾病发展过程中作为促癌基因发挥作用。 展开更多

关键词 乳腺癌缺失基因1 子宫内膜癌 荧光定量PCR技术 western免疫印迹技术

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基质分解素1在实验性肝纤维化过程中的酶原表达变化

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作者 王宇 高毅 蒋晓青 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2003年第6期356-357,共2页

研究实验性肝纤维化过程中基质分解素 - 1(MMP - 3)酶原蛋白表达的动态变化。建立四氯化碳中毒性大鼠肝纤维化模型 ,采用半定量Western免疫印迹方法 ,对肝纤维化不同阶段肝内MMP - 3的酶原蛋白的表达水平进行了检测。在正常大鼠肝组织中... 研究实验性肝纤维化过程中基质分解素 - 1(MMP - 3)酶原蛋白表达的动态变化。建立四氯化碳中毒性大鼠肝纤维化模型 ,采用半定量Western免疫印迹方法 ,对肝纤维化不同阶段肝内MMP - 3的酶原蛋白的表达水平进行了检测。在正常大鼠肝组织中有MMP - 3的酶原表达。在肝纤维化发生发展过程中MMP - 3酶原蛋白表达水平逐渐增强 ,至肝纤维化中期到达最高峰 ,到肝纤维化晚期及肝硬化阶段其表达较中期下降 ,但仍高于正常对照水平。MMP - 3在肝纤维化的发生。 展开更多

关键词 基质分解素1 实验性肝纤维化 酶原表达 western免疫印迹方法

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