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我国分离的XJ-90260病毒鉴定为西方马脑炎病毒 被引量：20
1
作者 吕新军 付士红 +4 位作者 杨益良 何海怀 张桂筠 陈相伟 梁国栋 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期307-312,共6页
XJ 90 2 6 0病毒是从新疆乌苏县境内采集的赫坎按蚊中分离到的一株病毒 ,病毒的鉴定结果显示 :XJ 90 2 6 0病毒可引起BHK 2 1细胞病变 ,表现为圆缩 ,脱落 ;可引起Vero细胞病变 ,表现为圆缩 ,破碎 ,脱落 ;可以在C6 / 36细胞中增殖 ,但不... XJ 90 2 6 0病毒是从新疆乌苏县境内采集的赫坎按蚊中分离到的一株病毒 ,病毒的鉴定结果显示 :XJ 90 2 6 0病毒可引起BHK 2 1细胞病变 ,表现为圆缩 ,脱落 ;可引起Vero细胞病变 ,表现为圆缩 ,破碎 ,脱落 ;可以在C6 / 36细胞中增殖 ,但不引起细胞病变。对 3日龄小白鼠 2～ 3天致死 ,对 3周龄小白鼠 3～ 4天致死。该病毒株对酸、乙醚敏感 ,抵抗 5 -氟脱氧尿苷。病毒与甲病毒组特异性免疫腹水起反应 ,与乙型脑炎病毒及布尼亚病毒组特异性免疫腹水不反应。进一步的分子生物学鉴定表明 ,该毒株基因组 3′非编码区 (ntranslatedregion ,UTR)核苷酸序列具有典型的西方马脑炎病毒特征 ,与标准西方马脑炎病毒 (California株 )的同源性为 99%。结果证明 :我国新疆分离的XJ- 90 2 6 0病毒为西方马脑炎病毒。这是我国有关西方马脑炎病毒的首次报导 ,有重要的流行病学意义。我国 9省区 ,886份血清的流行病学调查显示 ,该病毒抗体阳性血清 2 4份 ,阳性率为 2 71%。其中新疆 (8/ 15 7)、河南 (6 /76 )、甘肃 (5 / 94)三省区抗体阳性数较多 ,占总阳性数的 79 2 %(19/ 2 4)。 展开更多
关键词 XJ-90260病毒 鉴定 西方马脑炎病毒 血清流行病学 虫媒病毒
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5种脑炎人兽共患病病毒多重RT-PCR检测方法的建立 被引量：9
2
作者 蔡绪禹 康晓平 +9 位作者 刘洪 李裕昌 孙恩成 王凌凤 杨涛 刘霓红 步志高 李文京 杨银辉 吴东来 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期118-121,共4页
为建立同时检测流行性乙型脑炎病毒(JEV)、森林脑炎病毒(TBEV)、东方马脑炎病毒(EEEV)、西方马脑炎病毒(WEEV)和基孔肯雅病毒(CHIKV)5种人兽共患脑炎病病毒的多重RT-PCR方法,本研究根据GenBank登录的相关病毒基因序列设计特异引物,通过... 为建立同时检测流行性乙型脑炎病毒(JEV)、森林脑炎病毒(TBEV)、东方马脑炎病毒(EEEV)、西方马脑炎病毒(WEEV)和基孔肯雅病毒(CHIKV)5种人兽共患脑炎病病毒的多重RT-PCR方法,本研究根据GenBank登录的相关病毒基因序列设计特异引物,通过优化引物组合及PCR反应条件,建立可同时检测5种病毒的方法,扩增片段长度分别为411 bp(JEV)、945 bp(TBEV)、193 bp(EEEV)、545 bp(WEEV)和769 bp(CHIKV);该方法具有良好的特异性,对病毒核酸最低检测拷贝数分别为7.1×103、3.6×103、2.2×103、5.6×103和5.1×103。该方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便等优点,为以上5种人兽共患脑炎病病毒提供快速检测手段。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎病毒 森林脑炎病毒 东方马脑炎病毒 西方马脑炎病毒 基孔肯雅病毒 多重RT-PCR
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西部马脑炎病毒基因组序列的RT-PCR检测 被引量：2
3
作者 赵月峨 于曼 +3 位作者 秦鄂德 杨保安 吕富双 祝庆余 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2002年第3期200-202,共3页
目的 :建立敏感、特异的西部马脑炎 (westernequineencephalitis,WEE)病毒RT_PCR检测方法。方法 :首先采用逆转录法将病毒基因组RNA逆转录为cDNA ,然后以此cDNA为模板 ,进行PCR扩增。并对PCR扩增过程中的模板量、循环数、Mg2 + 浓度、... 目的 :建立敏感、特异的西部马脑炎 (westernequineencephalitis,WEE)病毒RT_PCR检测方法。方法 :首先采用逆转录法将病毒基因组RNA逆转录为cDNA ,然后以此cDNA为模板 ,进行PCR扩增。并对PCR扩增过程中的模板量、循环数、Mg2 + 浓度、退火温度和延伸时间等条件进行优化 ,以提高检测的特异性和敏感性。结果 :采用经优化的条件进行PCR扩增获得了约 35 0bp的单一DNA片段 ,其大小与预期的相一致 ,且可自 0 .1TCID50 的病毒液中检测出WEE病毒基因组序列。结论 :所建立的RT_PCR方法可自病毒感染的小鼠脑组织和传代细胞中检测WEE病毒的基因组RNA。 展开更多
关键词 西部马脑炎病毒 RT-PCR 基因组RNA
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西方马脑炎病毒抗体快速检测试纸条的研制 被引量：1
4
作者 王林林 杨宇 +2 位作者 王旺 王振东 王静 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS CSCD 2011年第5期421-423,共3页
目的研制一种快速检测西方马脑炎病毒(WEEV)抗体的试纸条。方法利用胶体金标记和免疫层析技术,用25 nm胶体金标记葡萄球菌A蛋白,并用硝酸纤维膜包被WEEV抗原及羊抗兔IgG作为检测带和质控带,研制出WEEV抗体快速检测试纸条。对该试纸条的... 目的研制一种快速检测西方马脑炎病毒(WEEV)抗体的试纸条。方法利用胶体金标记和免疫层析技术,用25 nm胶体金标记葡萄球菌A蛋白,并用硝酸纤维膜包被WEEV抗原及羊抗兔IgG作为检测带和质控带,研制出WEEV抗体快速检测试纸条。对该试纸条的敏感性、特异性和稳定性做出评价,并拟合检测曲线进行半定量检测。在健康人血清、兔血清和鼠血清中添加WEEV抗体模拟污染样品,评价该方法的检测能力。结果该试纸条可在20 min内完成定性和半定量检测,灵敏度为120 ng/ml,模拟样品的检测灵敏度也相同。线性范围120～1200 ng/ml。对发病症状相似以及近缘的其他病毒进行检测,均无非特异反应。试纸条在37℃下保存1个月,检测结果不变。结论该试纸条具有快速、简便、灵敏、特异、稳定的特点,适用于现场检测。 展开更多
关键词 西方马脑炎病毒 免疫层析技术 胶体金试纸 定性检测 定量检测
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实验感染来亨鸡及蚊虫体内西方马脑炎病毒RT-PCR检测 被引量：1
5
作者 汪中明 赵彤言 +1 位作者 吴渊明 董言德 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2007年第4期213-217,共5页
本研究建立了西方马脑炎病毒的RT-PCR检测方法,应用于实验感染西方马脑炎病毒的来亨鸡血液及蚊虫样本中的病毒核酸检测。结果从感染病毒的来亨鸡血液及蚊虫样本中均能扩增出与预期分子量一致的特异性条带,经序列测定证明,与西方马脑炎71... 本研究建立了西方马脑炎病毒的RT-PCR检测方法,应用于实验感染西方马脑炎病毒的来亨鸡血液及蚊虫样本中的病毒核酸检测。结果从感染病毒的来亨鸡血液及蚊虫样本中均能扩增出与预期分子量一致的特异性条带,经序列测定证明,与西方马脑炎71V-1658(NC-003908)病毒株核酸序列有较高的同源性。表明所建立的RT-PCR检测方法能够快速敏感地检测出实验感染来亨鸡血液样本及蚊虫体内西方马脑炎病毒。 展开更多
关键词 西方马脑炎病毒 RT-PCR 蚊虫 来亨鸡
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西方马脑炎病毒TaqMan MGB荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：1
6
作者 郑小龙 王群 +3 位作者 邓明俊 张晓文 孙明君 朱来华 《动物医学进展》 北大核心 2016年第1期6-10,共5页
通过RT-PCR从西方马脑炎病毒(WEEV)中扩增得到1 317bp特异的保守序列,将其克隆到pMD-20T载体中,进行体外转录,制备标准品cRNA。以10倍比稀释的cRNA为模板,进行TaqMan MGB荧光定量RT-PCR扩增并制作标准曲线,建立了WEEV荧光定量RT-PCR检... 通过RT-PCR从西方马脑炎病毒(WEEV)中扩增得到1 317bp特异的保守序列,将其克隆到pMD-20T载体中,进行体外转录,制备标准品cRNA。以10倍比稀释的cRNA为模板,进行TaqMan MGB荧光定量RT-PCR扩增并制作标准曲线,建立了WEEV荧光定量RT-PCR检测方法。对建立的方法进行了特异性和敏感性试验。结果表明,建立的荧光定量RT-PCR方法最低可检测10拷贝的cRNA;且与马鼻肺炎病毒(EHV-1)、马动脉炎病毒(EAV)、马流感病毒(EIV,H3N8)、西尼罗病毒(WNV)、东方马脑炎病毒(EEEV)和日本脑炎病毒(JEV)不发生交叉反应。与常规RT-PCR相比,该方法更加快速,特异性和敏感性更高,灵敏度为常规RT-PCR方法的100倍。 展开更多
关键词 西方马脑炎病毒 TAQMAN MGB 荧光定量RT-PCR
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小鼠抗西方马脑炎病毒E2蛋白胞外区(E2ecto)单克隆抗体的制备
7
作者 武福星 董阳超 +6 位作者 张剑 薛潘 袁若栋 陈洋 元航 李宝莉 雷迎峰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期62-68,共7页
目的制备针对西方马脑炎病毒(WEEV)E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto)的小鼠特异性单克隆抗体(mAb)。方法构建表达WEEV E2ecto的原核表达质粒pET-28a-WEEV E2ecto,转化BL21(DE3)感受态细胞后,IPTG诱导表达,主要为包涵体形式。包涵体纯化后,通... 目的制备针对西方马脑炎病毒(WEEV)E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto)的小鼠特异性单克隆抗体(mAb)。方法构建表达WEEV E2ecto的原核表达质粒pET-28a-WEEV E2ecto,转化BL21(DE3)感受态细胞后,IPTG诱导表达,主要为包涵体形式。包涵体纯化后,通过变性、复性、超滤等制备得到E2ecto蛋白;以QuickAntibody-Mouse5W为佐剂,将E2ecto蛋白肌肉免疫BALB/c小鼠,间隔21 d加强1次。免疫后35 d,取效价超过1×104的小鼠腹腔接种1次E2ecto蛋白,3 d后取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。通过有限稀释法筛选稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞,接种小鼠腹腔后制备腹水;利用ELISA检测抗体亚型及腹水中抗体效价的水平;将真核表达质粒pCAGGS-WEEV-CE3E2E1转染BHK-21细胞,通过免疫荧光法(IFA)鉴定上述mAb的生物学活性;利用东方马脑炎病毒(EEEV)、委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)的E2ecto蛋白进行ELISA鉴定上述抗体的特异性。结果成功表达及复性获得了纯化的WEEV E2ecto蛋白;制备了3G6G10、3D7G2、3B9E8、3D5B7四株mAb,其亚型分别为IgG2c(κ)、IgM(κ)、IgM(κ)、IgG1(κ);3G6G10、3B9E8、3D7G2腹水抗体效价均为105,3D5B7达到107;该4株抗体与VEEV和EEEV等其他脑炎甲病毒无交叉反应。结论成功制备了4株特异性结合WEEVE2ecto的小鼠mAb。 展开更多
关键词 西方马脑炎病毒(WEEV) E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto) 原核表达 单克隆抗体(mAb)
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西部马脑炎病毒基因组序列的半套式RT-PCR检测
8
作者 赵月峨 于曼 +4 位作者 邓永强 杨保安 吕富双 祝庆余 秦鄂德 《微生物学免疫学进展》 2003年第1期7-10,共4页
为进一步提高RT PCR检测西部马脑炎病毒 (WEE)病毒基因组方法的敏感性 ,采用半套式PCR扩增病毒基因组特异序列。首先采用逆转录法将病毒基因组RNA逆转录为cDNA ,然后以此cDNA为模板 ,进行扩增。对扩增后电泳检查无可见DNA条带的产物进... 为进一步提高RT PCR检测西部马脑炎病毒 (WEE)病毒基因组方法的敏感性 ,采用半套式PCR扩增病毒基因组特异序列。首先采用逆转录法将病毒基因组RNA逆转录为cDNA ,然后以此cDNA为模板 ,进行扩增。对扩增后电泳检查无可见DNA条带的产物进行半套式PCR ;与此同时对扩增的循环数、Mg++浓度和退火温度等条件进行了优化 ,以进一步提高扩增的特异性。结果第一轮PCR未扩出特异性片段的WEE病毒稀释度 ,其半套式扩增出特定大小的DNA产物 ;同时优化的条件提高了扩增产物的特异性。扩增产物约为 190bp的单一DNA片段 ,其大小与预期的相一致。结果表明采用半套式RT PCR方法检测WEE病毒的基因组序列的敏感性可提高 10 展开更多
关键词 西部马脑炎病毒 半套式RT-PCR 基因组序列
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