Western blot检测蛋白表达的方法改进及初步应用 被引量：13

1

作者 张莉萍 蒋纪恺 Joe Tam 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第10期1242-1243,共2页

目的　探讨Western blotting 增强化学发光法 (ECL )在分析细胞周期调控蛋白表达中的应用。方法　采用K562细胞 ,制备细胞核 ,对电泳、封闭、结合、检测等关键步骤进行了实验条件的摸索和改进 ,并对我室研究苦参碱诱导K562细胞分化机制... 目的　探讨Western blotting 增强化学发光法 (ECL )在分析细胞周期调控蛋白表达中的应用。方法　采用K562细胞 ,制备细胞核 ,对电泳、封闭、结合、检测等关键步骤进行了实验条件的摸索和改进 ,并对我室研究苦参碱诱导K562细胞分化机制的细胞周期蛋白的表达进行了分析。结果　 3 0 μg核蛋白质即可检测到K562细胞中 ,均有不同程度的CyclinE、Cdk2、CyclinD1、Cdk5表达。结论　Western blotting ECL法特异性强、灵敏度高 ,是分析蛋白质表达较为理想的方法。 展开更多

关键词 蛋白质 表达 western-blot法

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枸杞多糖干预膝骨关节炎模型兔关节软骨组织CD151和基质金属蛋白酶3的表达 被引量：9

2

作者 赵飞 丁冬 +5 位作者 巩凡 黄永禄 姚占川 李晓亮 罗小军 岳建明 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2020年第17期2648-2653,共6页

背景:有研究表明枸杞多糖具有抗老化、保护神经、抗疲劳、控制血糖、抗氧化及抗肿瘤等作用,其对于膝关节的骨性关节炎可能具有一定的保护作用,但目前还鲜有学者报道,CD151和基质金属蛋白酶3是评价膝关节骨性关节炎常用的因子。目的:观... 背景:有研究表明枸杞多糖具有抗老化、保护神经、抗疲劳、控制血糖、抗氧化及抗肿瘤等作用,其对于膝关节的骨性关节炎可能具有一定的保护作用,但目前还鲜有学者报道,CD151和基质金属蛋白酶3是评价膝关节骨性关节炎常用的因子。目的:观察枸杞多糖对CD151和基质金属蛋白酶3在兔骨性关节炎中表达的影响。方法:健康6月龄大耳白兔64只随机分等为4组:空白组、模型组、枸杞多糖组及生理盐水组。除了空白组外,其他3组均采用Hulth法复制膝骨关节炎模型兔,枸杞多糖组及生理盐水组以常规剂量枸杞多糖及生理盐水灌胃饲养4周。造模后12周取各组患侧关节软骨组织,应用苏木精-伊红染色观察各组关节软骨形态学变化,应用免疫组织化学染色及Western blot法观察CD151和基质金属蛋白酶3在各组关节软骨中的表达水平及空间分布。实验于2014年1月经宁夏人民医院动物伦理委员会批准(批准号:2014-30817)。结果与结论:①免疫组织化学染色和Western blot检测显示,枸杞多糖组关节软骨组织中CD151和基质金属蛋白酶3吸光度值及蛋白表达均低于生理盐水组与模型组(P<0.05);②上述结果证实,在骨性关节炎关节软骨组织中CD151和基质金属蛋白酶3表达增高,枸杞多糖可抑制骨性关节炎中CD151和基质金属蛋白酶3的高表达,从而减缓骨性关节炎的发生。 展开更多

关键词 枸杞多糖 CD151 基质金属蛋白酶3 骨性关节炎 兔 膝关节 免疫荧光染色 western-blot法 苏木精-伊红染色 动物模型

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蓝桉油对单核细胞THP-1核因子-κB核转位活化的影响 被引量：7

3

作者 周建娅 唐法娣 +3 位作者 毛国根 邵杰 王砚 卞如濂 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2003年第4期315-318,326,共5页

目的 :探讨蓝桉油对人单核细胞 THP- 1细胞株核因子 - κB(NF- κB)核转位活化的影响。方法 :蓝桉油 (1、10、10 0 mg/L,30 min)预处理 THP- 1细胞 ,经脂多糖 (L PS,1mg/L,30 min)刺激后 ,采用间接免疫荧光细胞化学法结合激光扫描共聚... 目的 :探讨蓝桉油对人单核细胞 THP- 1细胞株核因子 - κB(NF- κB)核转位活化的影响。方法 :蓝桉油 (1、10、10 0 mg/L,30 min)预处理 THP- 1细胞 ,经脂多糖 (L PS,1mg/L,30 min)刺激后 ,采用间接免疫荧光细胞化学法结合激光扫描共聚焦显微镜 ,测定 THP- 1细胞 NF- κB p6 5亚基 (NF- κB/p6 5 )定位 ;Western- blot法分析细胞核内NF- κB/p6 5水平。结果 :免疫荧光分析显示 ,正常细胞 NF- κB/p6 5荧光标记主要分布于胞浆区 ,核区很少 ,L PS刺激后 NF- κB/p6 5荧光标记浓集于核区 ,胞浆区少见 ;但经蓝桉油 (10 0 mg/L)预处理后 ,LPS刺激的 THP- 1细胞NF- κB/p6 5荧光标记则主要位于胞浆区 ;Western- blot分析显示 ,在正常 THP- 1细胞核蛋白中有低水平的 NF- κB/p6 5表达 ,经 L PS刺激 ,核内 NF- κB/p6 5表达明显增高 ;蓝桉油预处理后 ,可以抑制 LPS诱导的核内 NF- κB/p6 5高水平表达 ,且呈剂量依赖关系。结论 :蓝桉油预处理阻止了 LPS诱导的 NF- κB/p6 5核转位 ,从而抑制了其活性功能的发挥。蓝桉油可抑制 LPS刺激引起的 NF- κB核转位活化。 展开更多

关键词 脂多糖类 核因子-ΚB 单核细胞 蓝桉油 显微镜检查 共焦 THP一1细胞株 western-blot法

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端粒酶活性表达及p53异常在非小细胞肺癌中表达及临床意义 被引量：4

4

作者 韦尉东 黄植蕃 +3 位作者 戎铁华 吴一龙 杨名添 梁启万 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第3期301-304,共4页

目的：研究端粒酶活性及 p53异常在非小细胞肺癌 (nonsmall cell lung cancer, NSCLC)中的表达及其相互关系。方法：用端粒重复扩增（ telomeric repeat amplification protocol, TRAP）法检测 NSCLC组织、癌旁非癌肺组织、肺良性病变... 目的：研究端粒酶活性及 p53异常在非小细胞肺癌 (nonsmall cell lung cancer, NSCLC)中的表达及其相互关系。方法：用端粒重复扩增（ telomeric repeat amplification protocol, TRAP）法检测 NSCLC组织、癌旁非癌肺组织、肺良性病变组织端粒酶活性，用 Western blot印迹法检测 NSCLC组织 p53蛋白表达。结果：端粒酶活性表达率为： NSCLC 93.02％ (80/86)，癌旁非癌肺组织 9.33％ (7/75)，肺良性病变组织 27.27％ (3/11)， NSCLC组织端粒酶活性表达率显著高于癌旁非癌肺组织及肺良性病变，端粒酶活性表达率在不同组织类型、细胞分化、肿瘤大小、病理分期间差别不显著； NSCLC p53异常为 51.42％（ 36／ 70）， p53异常在Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期之间，Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级之间差异有统计学意义；端粒酶活性表达与 p53异常无显著关联（ P >0.05）；结论： NSCLC标记物中，端粒酶活性表达较 p53敏感， p53对 NSCLC分期分级有帮助，端粒酶活性表达与 p53异常在 NSCLC发生发展中可能是两个独立的因素。 展开更多

关键词 端粒酶 重复扩增法 P53 western-blot法 非小细胞肺癌

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分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组卡介苗菌株的筛选 被引量：5

5

作者 师长宏 徐志凯 +3 位作者 朱德生 李元 柏银兰 薛莹 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期254-257,共4页

目的筛选获得分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组卡介苗(BCG)菌株。方法采用多聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌毒株H37Rv中扩增出热休克蛋白60(Hsp60)基因及其信号肽序列αss,将测序正确的hsp60和αss基因分别克隆入大肠杆菌(E.co... 目的筛选获得分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组卡介苗(BCG)菌株。方法采用多聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌毒株H37Rv中扩增出热休克蛋白60(Hsp60)基因及其信号肽序列αss,将测序正确的hsp60和αss基因分别克隆入大肠杆菌(E.coli.)BCG穿梭载体pOLYG中,构建分枝杆菌分泌表达载体pDE22,按相应的酶切位点将ag85b和esat6按照不同的连接方式联合克隆入pDE22载体,分别命名为pDE22Ag85B ESAT6和pDE22ESAT6Ag85B,将纯化的重组质粒电穿入BCG,经潮霉素抗性筛选和PCR的方法鉴定出含目的基因的重组BCG阳性克隆。收集重组BCG的培养上清液,经浓缩和透析后,进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和固相化蛋白质免疫学测定(Western blot法)分析。结果两株重组BCG菌株的培养上清液分泌表达相对分子质量约37000的蛋白,且分别可与抗Ag85B和抗ESAT6蛋白免疫小鼠的血清有相应的结合条带。结论分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组BCG菌株构建成功,有望为结核病的预防提供有效的疫苗。 展开更多

关键词 AG85B 融合蛋白 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 重组卡介苗 western-blot法 菌株 聚合酶链反应(PCR) 卡介苗(BCG) 重组BCG ESAT6蛋白 培养上清液 结核分枝杆菌 分泌表达载体 相对分子质量 信号肽序列 热休克蛋白 H37RV

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钙调神经磷酸酶在高血压心肌肥厚中的表达 被引量：4

6

作者 刘志云 魏美芳 《中国当代医药》 2010年第29期6-8,共3页

目的:探讨钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)在高血压心肌肥厚中的作用,并测定其在高血压心肌肥厚大鼠中的表达。方法:SD雄性大鼠,随机分为3组,手术组、假手术组及对照组。手术组采用不完全结扎腹主动脉方法建立高血压心肌肥厚模型。5周... 目的:探讨钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)在高血压心肌肥厚中的作用,并测定其在高血压心肌肥厚大鼠中的表达。方法:SD雄性大鼠,随机分为3组,手术组、假手术组及对照组。手术组采用不完全结扎腹主动脉方法建立高血压心肌肥厚模型。5周后提取大鼠左室心肌蛋白并定量,western-blot法测定Calcineurin蛋白表达水平。结果:术后5周,手术组、假手术组、对照组大鼠体重相似,手术组心肌细胞平均直径比假手术组及对照组显著增高(P<0.01),术后5周CaN蛋白表达手术组是对照组的1.62倍。结论:心肌肥厚大鼠CaN的蛋白表达明显增高,CaN参与了心肌肥厚的发病过程。 展开更多

关键词 钙调神经磷酸酶 高血压心肌肥厚 western-blot法

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中风醒脑液对体外培养缺血再灌注PC-12细胞GAP-43和NF蛋白表达的影响 被引量：4

7

作者 李艳青 谢荃 张晓云 《辽宁中医杂志》 CAS 2012年第5期938-939,共2页

目的:研究中风醒脑液对体外培养缺血再灌注PC-12细胞GAP-43和NF蛋白表达的影响,观察中药有效组分作用于神经细胞生长过程中,相关基因的表达变化,探讨中风醒脑液促神经生长的分子生物学机制。方法:采用western-blot法检测神经生长相关蛋... 目的:研究中风醒脑液对体外培养缺血再灌注PC-12细胞GAP-43和NF蛋白表达的影响,观察中药有效组分作用于神经细胞生长过程中,相关基因的表达变化,探讨中风醒脑液促神经生长的分子生物学机制。方法:采用western-blot法检测神经生长相关蛋白GAP-43和神经丝蛋白NF的表达变化。结果:中风醒脑液可使PC-12细胞GAP-43和NF的表达量增加。结论:中风醒脑液可作用于体外培养的神经细胞.使神经生长相关蛋白表达上调。 展开更多

关键词 中风醒脑液 缺血再灌注 GAP-43 NF western-blot法 蛋白表达

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β-catenin,cyclin D1和ERα在乳腺癌组织中的表达 被引量：3

8

作者 罗洁 陈俞霖 许辉 《实用预防医学》 CAS 2010年第8期1502-1504,共3页

目的检测β-连接蛋白(β-catenin)、周期素D1(cyclin D1)和雌激素受体α(ERα)在乳腺癌中的表达,探讨其在乳癌发病机制中的作用。方法随机选取42例乳腺增生,58例乳腺癌病人的乳腺组织以及乳腺癌灶周围正常乳腺组织,分别应用免疫组化SP... 目的检测β-连接蛋白(β-catenin)、周期素D1(cyclin D1)和雌激素受体α(ERα)在乳腺癌中的表达,探讨其在乳癌发病机制中的作用。方法随机选取42例乳腺增生,58例乳腺癌病人的乳腺组织以及乳腺癌灶周围正常乳腺组织,分别应用免疫组化SP法检测β-catenin,cyclin D1的表达,应用Western-blot法测ERα的表达。结果乳腺癌组织β-catenin呈胞质和/或胞核异位表达,其表达率为65.5%,显著高于乳腺增生和正常乳腺组织(42.9%、35.7%,P<0.05)。乳腺癌cyclin D1和ERα阳性率分别为74.1%、70.7%,均显著高于乳腺增生和正常乳腺组织(45.2%、36.5%;33.3%、29.5%;P均<0.01)。乳腺癌中β-catenin与cyclin D1和ERα表达分别呈明显正相关(r=0.32、0.57,P<0.05、P<0.01)。结论乳腺癌中ERα、cyclin D1和β-catenin均高表达,且呈正相关,提示三者在乳腺癌发病中具有协同作用。 展开更多

关键词 乳腺癌 Β-CATENIN CYCLIN D1 ERΑ 免疫组化 western-blot法

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乐果对U87细胞HSP70表达及AChE活性的影响 被引量：1

9

作者 谢芳 周志俊 +1 位作者 吴强恩 吴同俊 《环境与职业医学》 CAS 北大核心 2005年第2期105-108,共4页

[目的]研究乐果对神经胶质瘤细胞U87热应激蛋白70 (HSP70 )表达的影响规律,比较HSP70与乙酰胆碱酯酶(AChE)对乐果的敏感性。[方法]以不同浓度乐果(10 0、10、1、0 .1、0 .0 1、0 μmol/L)对体外培养的U87细胞分别进行2、4、8、16和2 4h... [目的]研究乐果对神经胶质瘤细胞U87热应激蛋白70 (HSP70 )表达的影响规律,比较HSP70与乙酰胆碱酯酶(AChE)对乐果的敏感性。[方法]以不同浓度乐果(10 0、10、1、0 .1、0 .0 1、0 μmol/L)对体外培养的U87细胞分别进行2、4、8、16和2 4h染毒,再分别用Western blot法和DTNB法检测各组细胞HSP70表达和AChE活性的变化,比较这两个指标变化的幅度以及引起此变化所需乐果浓度和染毒时间的差异。[结果]乐果染毒2h即可引起HSP70表达的显著增高(P <0 .0 1) ,这一变化在染毒4h时出现于各剂量组,并可持续至染毒16h。在染毒2h和4h ,HSP70表达的变化与乐果剂量之间存在相关关系(Pearson相关系数分别为0 .916和0 .989,P <0 .0 1)。AChE活性的显著降低出现在染毒4h ,且仅出现在剂量较高的3个组,变化幅度也较小。[结论]乐果可以在相对较短时间内以较低剂量引起U87细胞HSP70表达的显著变化,并存在一定的剂量 反应关系。HSP70比AChE对乐果更为敏感。 展开更多

关键词 ACHE活性 乐果 热应激蛋白70(HSP70) western-blot法 HSP70表达 表达及 神经胶质瘤细胞 剂量一反应关系 乙酰胆碱酯酶 DTNB法 不同浓度 体外培养 染毒时间 指标变化 相关系数 相关关系 敏感性 24h 组细胞 出现 低剂量 幅度

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pSG5-Cbfa1转染兔皮肤成纤维细胞及其瞬时表达 被引量：1

10

作者 肖德常 杨庆铭 +1 位作者 邓廉夫 张伟 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期502-505,共4页

目的　探讨外源性小鼠Cbfa1基因在兔皮肤成纤维细胞中获得瞬时表达的可行性。方法　在阳离子脂质体介导下 ,将含外源性小鼠Cbfa1基因的 pSG5 Cbfa1真核表达质粒导入原代培养的第 2代兔皮肤成纤维细胞内。采用RT PCR及Western Blot法检... 目的　探讨外源性小鼠Cbfa1基因在兔皮肤成纤维细胞中获得瞬时表达的可行性。方法　在阳离子脂质体介导下 ,将含外源性小鼠Cbfa1基因的 pSG5 Cbfa1真核表达质粒导入原代培养的第 2代兔皮肤成纤维细胞内。采用RT PCR及Western Blot法检测Cbfa1基因在兔皮肤成纤维细胞内的瞬时表达。同时采用RT PCR法检测细胞内骨钙素及碱性磷酸酶基因的表达情况。结果　转染pSG5 Cbfa1真核表达质粒的兔皮肤成纤维细胞内有大量小鼠Cbfa1mRNA转录及蛋白瞬时表达 ,同时诱导骨钙素mRNA及碱性磷酸酶mRNA大量表达。结论　在阳离子脂质体介导下 ,小鼠Cbfa1基因能够导入兔皮肤成纤维细胞内并获得瞬时表达 。 展开更多

关键词 pSG5-Cbfal转染 皮肤成纤维细胞 瞬时表达 western-blot法 RT-PC

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肾小管间质性肾炎中抗肾小管基底膜抗体的检测 被引量：3

11

作者 宿志梅 赵明辉 +2 位作者 辛岗 张颖 王海燕 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期177-180,共4页

目的 :探讨肾小管间质性肾炎 (tubulointerstitialnephritis,TIN)患者血清中抗肾小管基底膜抗体及其意义。方法 :选取北京大学第一医院肾内科 2 0 0 0年至 2 0 0 2年经肾穿刺活检确诊为TIN患者 4 6例。抗肾小管基底膜抗体检测用Western ... 目的 :探讨肾小管间质性肾炎 (tubulointerstitialnephritis,TIN)患者血清中抗肾小管基底膜抗体及其意义。方法 :选取北京大学第一医院肾内科 2 0 0 0年至 2 0 0 2年经肾穿刺活检确诊为TIN患者 4 6例。抗肾小管基底膜抗体检测用Western blot方法。人肾小管来源于肾肿瘤切除肾脏的正常肾皮质 ,并经不同目数的筛网获得。肾小管基底膜 (tubularbasementmembrane ,TBM )经超声粉碎细胞后得到 ,在经 6mol/L盐酸胍处理后即为TBM可溶性抗原。分别对阳性和阴性患者的临床指标进行统计分析。结果 :其中 1 1人检出抗TBM抗体 ,可识别 34× 1 0 3 、5 5× 1 0 3 、6 1× 1 0 3 、72× 1 0 3 、85× 1 0 3 、94× 1 0 3 、1 1 9× 1 0 3 蛋白条带 ,其中识别 5 5× 1 0 3 的患者最多 ,占 6 3.6 %。抗TBM抗体阳性率在急性TIN患者中为 2 9.6 % ,慢性TIN患者中为 2 1 .1 % ,两者相比差异无显著性。急性TIN患者抗TBM抗体阳性者与阴性者相比 ,其血沉和血清IgG、IgM均较高 ,差异有显著性。其它指标包括性别、年龄、血红蛋白、补体C3 、IgA、血肌酐及内生肌酐清除率等差异均无显著性。慢性TIN患者上述指标差异均无显著性。结论 :部分TIN患者血清中可检测到抗TBM抗体 。 展开更多

关键词 肾小管间质性肾炎 抗肾小管基底膜抗体 western-blot法 肾穿刺活检术 病理机制

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重组人血管内皮抑素与紫杉醇联合应用对乳腺癌SK-BR-3细胞中VEGF表达的影响 被引量：1

12

作者 高艳飞 王晓成 +3 位作者 徐晓明 姜岩松 李海博 赵志国 《河北医药》 CAS 2018年第22期3463-3466,共4页

目的探讨重组人血管内皮抑素(恩度)与紫杉醇联合应用对乳腺癌SK-BR-3细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法应用Western-blot法及免疫细胞化学法观察在不同给药方案下乳腺癌SK-BR-3细胞中V... 目的探讨重组人血管内皮抑素(恩度)与紫杉醇联合应用对乳腺癌SK-BR-3细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法应用Western-blot法及免疫细胞化学法观察在不同给药方案下乳腺癌SK-BR-3细胞中VEGF表达的情况。结果恩度单药与紫杉醇单药均能下调SK-BR-3细胞中VEGF的表达,而紫杉醇单药下调VEGF的表达作用较为明显(P <0. 05)。二者序贯给药及同时用药均能下调VEGF的表达,而同时给药下调最为明显(P <0. 05)。结论恩度与紫杉醇联合应用均能够抑制VEGF的表达,同时给药抑制显著。 展开更多

关键词 乳腺癌 SK-BR-3细胞 紫杉醇 重组人血管内皮抑素 VEGF western-blot法 免疫细胞化学法

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喉鳞癌中eIF4E基因的检测及其临床意义

13

作者 黄国彬 管志伟 郭剑锋 《临床医药实践》 2008年第9期734-736,共3页

目的:探讨eIF4E在喉鳞癌(LSCC)中的表达及其与LSCC的关系。方法:采用免疫组织化学法检测52例蜡块LSCC组织、20例喉黏膜不典型增生组织、30例喉良性增生组织及10例正常喉黏膜组织中eIF4E基因蛋白的表达情况;用Western-blot法检测20例新鲜... 目的:探讨eIF4E在喉鳞癌(LSCC)中的表达及其与LSCC的关系。方法:采用免疫组织化学法检测52例蜡块LSCC组织、20例喉黏膜不典型增生组织、30例喉良性增生组织及10例正常喉黏膜组织中eIF4E基因蛋白的表达情况;用Western-blot法检测20例新鲜LSCC标本的癌中心区(TC)、过渡区(TR)及病理证实的无癌区(TF)中eIF4E的表达情况。结果:免疫组织化学法检测示:eIF4E在LSCC中表达的阳性率为100.0%,显著高于对照组。Western-blot法检测显示:eIF4E在TF、TR及TC的表达水平呈进行性增高。结论:过度表达的eIF4E是LSCC恶性改变及判断其恶性程度的一个分子标志,可为LSCC的基因治疗提供一定的理论基础。 展开更多

关键词 肿瘤标志物 免疫组织化学法 western—blot法 喉鳞癌

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RET蛋白在先天性巨结肠肠壁中的表达 被引量：1

14

作者 吴小红 《实用临床医药杂志》 CAS 2015年第9期164-165,共2页

先天性巨结肠（HD）是小儿外科常见的消化道畸形疾病,主要以远端肠管肌间和黏膜下神经节细胞缺如并以及此节段的持续性收缩为特征。目前,对其确切病因尚不清楚,导致狭窄段神经节细胞缺如的原因概括起来大致有3种：1消化管神经嵴细胞迁... 先天性巨结肠（HD）是小儿外科常见的消化道畸形疾病,主要以远端肠管肌间和黏膜下神经节细胞缺如并以及此节段的持续性收缩为特征。目前,对其确切病因尚不清楚,导致狭窄段神经节细胞缺如的原因概括起来大致有3种：1消化管神经嵴细胞迁移障碍;2肠管微环境因素阻止神经节细胞的正常发育;3遗传因素的影响。 展开更多

关键词 先天性巨结肠 RET蛋白 western-blot法

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急性脑梗死患者外周血单个核细胞中细胞因子信号转导抑制因子-3的变化

15

作者 杨静 黄帆 马中富 《热带医学杂志》 CAS 2007年第10期968-970,共3页

目的探讨急性脑梗死患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中细胞因子信号转导抑制因子-3(SOCS-3)mRNA和蛋白质表达的变化。方法实时荧光定量PCR法检测60例脑梗死患者和40例健康对照者的PBMC中SOCS-3 mRNA表达,... 目的探讨急性脑梗死患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中细胞因子信号转导抑制因子-3(SOCS-3)mRNA和蛋白质表达的变化。方法实时荧光定量PCR法检测60例脑梗死患者和40例健康对照者的PBMC中SOCS-3 mRNA表达,Western-blot法检测其蛋白质水平的表达。结果脑梗死患者发病后1～6d PBMC中SOCS-3 mRNA表达明显高于正常对照组,其表达随时间延长呈下降趋势,至第7、14天时与正常对照组无显著差异。其蛋白质的表达在发病后第2～3天升高并达到高峰,之后表达逐渐减少,至第7天仍高于正常水平,第14天降至正常水平。结论急性脑梗死患者PBMC中SOCS-3可能参与了脑梗死后炎症反应的病理生理过程。 展开更多

关键词 脑梗死 细胞因子信号转导抑制因子-3 实时荧光定量PCR western-blot法

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Bacteroides forsythus ATCC43037菌体蛋白与人类唾液酸性富脯蛋白的相互作用

16

作者 黄定明 周学东 天野敦雄 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2003年第2期85-87,共3页

目的 :探讨福赛类杆菌与人类唾液富脯蛋白相互作用的蛋白分子。方法 :Western -blot方法。将人工合成唾液富脯蛋白用生物素标记 ,福赛类杆菌全菌蛋白凝胶电泳 ,半干转移至纤维膜上 ,观察二者的相互作用。结果 :富脯蛋白能与分子量为 85K... 目的 :探讨福赛类杆菌与人类唾液富脯蛋白相互作用的蛋白分子。方法 :Western -blot方法。将人工合成唾液富脯蛋白用生物素标记 ,福赛类杆菌全菌蛋白凝胶电泳 ,半干转移至纤维膜上 ,观察二者的相互作用。结果 :富脯蛋白能与分子量为 85KD、6 5KD、6 0KD、以及 49KD的福赛类杆菌蛋白发生结合。结论 :福赛类杆菌存在与人类唾液富脯蛋白相互结合的粘附素。 展开更多

关键词 牙周疾病 根尖周疾病 福赛类杆菌 富脯蛋白 western-blot法

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急性白血病CyclinE基因表达的研究

17

作者 杨曼 杨玲 佟力 《白血病．淋巴瘤》 CAS 2005年第4期220-221,227,共3页

目的研究CyclinE在成人急性白血病(AL)患者中的表达,探讨CyclinE在AL中的作用机制及临床意义。方法采用免疫细胞化学S-P法和Western-blot法检测成人AL患者和正常对照CyclinE的表达,分析CyclinE在成人AL患者中的表达与病情进展和预后的... 目的研究CyclinE在成人急性白血病(AL)患者中的表达,探讨CyclinE在AL中的作用机制及临床意义。方法采用免疫细胞化学S-P法和Western-blot法检测成人AL患者和正常对照CyclinE的表达,分析CyclinE在成人AL患者中的表达与病情进展和预后的关系。结果成人AL患者CyclinE阳性表达率明显高于正常对照组,其中急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者阳性表达率更高。未缓解AL患者CyclinE阳性表达率高于缓解患者。在未缓解AL患者中,CyclinE阳性表达者缓解率低于CyclinE阴性表达者。结论CyclinE可能有癌基因的作用,其表达与AL患者的病情进展及预后相关。 展开更多

关键词 CYCLINE 急性白血病 免疫细胞化学S-P法:western-blot法

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博尔纳病病毒感染与神经胶质瘤发生的相关性

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作者 李均辉 杨爱英 +1 位作者 刘洋 张凤民 《神经疾病与精神卫生》 2013年第2期195-196,共2页

目的探讨博尔纳病病毒（BDV）感染与神经胶质瘤发生的可能相关性。方法用west—ern—blot方法，对114例神经胶质瘤患者和110例脑外伤患者血清中BDV—p24特异性抗体进行检测。结果114例神经胶质瘤患者血清中BDV—p24抗体阳性16例，阳性... 目的探讨博尔纳病病毒（BDV）感染与神经胶质瘤发生的可能相关性。方法用west—ern—blot方法，对114例神经胶质瘤患者和110例脑外伤患者血清中BDV—p24特异性抗体进行检测。结果114例神经胶质瘤患者血清中BDV—p24抗体阳性16例，阳性检出率为14．03％；作为实验正常对照的脑外伤患者血清，阳性3例，阳性检出率为2．72％。两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论神经胶质瘤患者血清中存在BDV的感染；BDV感染可能与神经胶质瘤的发生相关。 展开更多

关键词 神经胶质瘤 博尔纳病病毒 western--blot法

原文传递

TGF-β_1对RPE细胞bcl-2/Fas mRNA和Caspase-3表达的影响 被引量：2

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作者 赵宏 丁相奇 +3 位作者 顾东霞 张海龙 杨小云 靖鹏举 《眼科新进展》 CAS 2006年第3期194-197,共4页

目的观察转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)凋亡的作用机制。方法使用逆转录多聚酶链反应检测不同浓度TGF-β1作用下的人RPE细胞中凋亡相关基因bcl-2... 目的观察转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)凋亡的作用机制。方法使用逆转录多聚酶链反应检测不同浓度TGF-β1作用下的人RPE细胞中凋亡相关基因bcl-2和FasmRNA的表达,使用Western-Blot蛋白印迹法检测不同浓度TGF-β1处理过的PRE细胞中Caspase-3蛋白的表达。结果逆转录多聚酶链反应显示,随着TGF-β1浓度的增高,人RPE细胞中bcl-2mRNA表达降低,Fas mRNA的表达逐渐增高;Western-Blot结果显示,随着TGF-β1浓度的增高,Caspase-3蛋白表达逐渐增高。结论TGF-β可上调RPE细胞表面Fas基因的表达,从而激活Caspase-3的活性而诱导RPE细胞凋亡,Caspase-3在RPE细胞凋亡过程中起着非常重要的作用。 展开更多

关键词 转化生长因子-Β1 人视网膜色素上皮细胞 逆转录多聚酶链反应 western-blot印迹法

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豚鼠早期实验性近视眼视网膜色素上皮细胞bFGF表达变化的研究

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作者 陈博宇 王超英 +2 位作者 陈维毅 刘迎庆 郝岚 《国际眼科杂志》 CAS 2015年第11期1857-1861,共5页

目的：研究豚鼠早期实验性近视眼视网膜色素上皮（retinal pigment epithelial,RPE）细胞前部及后极部碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,b FGF）的改变,探索近视的发病机制。方法：两周龄豚鼠30只随机分为A组、... 目的：研究豚鼠早期实验性近视眼视网膜色素上皮（retinal pigment epithelial,RPE）细胞前部及后极部碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,b FGF）的改变,探索近视的发病机制。方法：两周龄豚鼠30只随机分为A组、B组、C组,每组10只,再随机选取5只10眼正常两周龄豚鼠不作任何干预,作为正常对照眼。选取任意眼戴一-10.00D凹透镜,分别饲养6、15、30d后除去镜片,验光及测眼轴长度确定近视形成后,采用细胞酶消化法培养豚鼠的前部及后极部RPE细胞,取3~6代RPE细胞进行免疫细胞化学、实时荧光定量PCR、Western-blot蛋白印迹法检查前部及后极部RPE细胞中b FGF表达变化。结果：b FGF的表达定位于细胞浆和细胞核。免疫细胞化学、实时荧光定量PCR、Western-blot蛋白印迹法结果均表明：A、B、C三组实验眼和对照眼前部及后极部RPE细胞均有b FGF的表达,实验组前部及后极部与对照组相应前部及后极部比较,实验组中b FGF的阳性率低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;而且,随着诱导时间的推移,实验组的阳性率逐渐降低,差异有统计学意义（P〈0.05）,对照组的阳性率不变,差异无统计学意义（P〉0.05）;但实验组和对照组各组自身前部及后极部比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：实验组前部及后极部与对照组相应前部及后极部比较,b FGF的表达显著低于对照组。 展开更多

关键词 豚鼠 视网膜色素上皮细胞 碱性成纤维细胞生长因子 免疫细胞化学 实时荧光定量PCR western-blot蛋白印迹法

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