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1970~2004年全球肠道病毒71型分离株的分子流行病学分析 被引量:108
1
作者 董晓楠 应剑 陈应华 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1021-1027,共7页
人类肠道病毒71型(EV71)是引起手足口病的主要病原体,常导致严重的神经系统综合征.近年来病毒多爆发于亚太地区的热带区域.为研究人类肠道病毒的进化历程以及遗传变异性,搜集了全球在1970~2004年间分离的532株病毒的序列信息,这些信息... 人类肠道病毒71型(EV71)是引起手足口病的主要病原体,常导致严重的神经系统综合征.近年来病毒多爆发于亚太地区的热带区域.为研究人类肠道病毒的进化历程以及遗传变异性,搜集了全球在1970~2004年间分离的532株病毒的序列信息,这些信息包含了完整或接近完整的VP1区核苷酸序列(891bp).经过系统发生学分析以及遗传距离的比较,发现绝大多数病毒株属于基因型B或C.同时也观察到一种特殊的不属于任何现有分型的毒株R13223-IND-01,可能代表了一种新的基因型.在B型和C型病毒中,存在着一些区别于同型其他亚型毒株的“孤儿株”,它们的出现在病毒进化分析中有重要的意义.此外,VP1片段上有6个散在位点的氨基酸存在共变异的现象,分析发现这种高比例的共变异与病毒亚型有着紧密的联系. 展开更多
关键词 肠道病毒71型(EV71) vp1 流行病学 共变异
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双抗体夹心ELISA检测牛肠道病毒抗原方法的建立及流行病学调查 被引量:24
2
作者 邢泽黎 王新平 +4 位作者 朱利塞 鲁海冰 郭昌明 盖小春 王明月 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期567-571,共5页
应用大肠杆菌表达纯化的E种肠道病毒HY12 VP1和VP2重组蛋白制备的抗体,建立了检测牛肠道病毒病原的双抗体夹心ELISA方法,并对吉林省不同地区的牛群感染BEV进行了病原流行病学调查。结果,应用方阵法确定的抗VP1鼠源Ig G作为捕获抗体的最... 应用大肠杆菌表达纯化的E种肠道病毒HY12 VP1和VP2重组蛋白制备的抗体,建立了检测牛肠道病毒病原的双抗体夹心ELISA方法,并对吉林省不同地区的牛群感染BEV进行了病原流行病学调查。结果,应用方阵法确定的抗VP1鼠源Ig G作为捕获抗体的最佳包被量为0.75 g/100 L,酶标抗体的最佳稀释度为1∶3 600。对大量阴性粪便样品进行了检测及其统计学处理,确定了双抗体夹心ELISA检测BEV的判定标准,样品D_(490)值≥0.143判定为阳性。特异性、敏感性等试验结果表明,所建立的检测BEV抗原方法具有特异、敏感和快速等特点。与RT-PCR方法相比,该方法操作简单快速,易在基层推广应用。对吉林省不同地区牛群粪便样品进行了检测,发现不同地区牛群的BEV感染率为8.16%~58.7%。本研究首次建立了检测BEV的双抗体夹心ELISA方法,为BEV感染的诊断、流行病学调查及本病防治提供了方法和理论依据。 展开更多
关键词 牛肠道病毒 BEV HY12 vp1 vp2 双抗体夹心ELISA 流行病学调查
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口蹄疫病毒基因组结构及其功能 被引量:17
3
作者 刘庆军 张永光 《动物医学进展》 CSCD 2005年第5期1-5,共5页
口蹄疫病毒的基因组结构和功能是开展口蹄疫其他研究如鉴别诊断、新型疫苗研制和疫源追踪等工作的基础。口蹄疫病毒的基因组由5′UTR、ORF和3′UTR及Po ly(A)组成,全长约8 500 nt。VPg可能充当RNA合成引物的作用, 5′UTR 内的Poly(C)和... 口蹄疫病毒的基因组结构和功能是开展口蹄疫其他研究如鉴别诊断、新型疫苗研制和疫源追踪等工作的基础。口蹄疫病毒的基因组由5′UTR、ORF和3′UTR及Po ly(A)组成,全长约8 500 nt。VPg可能充当RNA合成引物的作用, 5′UTR 内的Poly(C)和内部核糖体进入位点(internalribosomaentrysite, IRES)是当前研究的热点之一。Poly(C)可能与病毒的感染性有关,IRES 对翻译的起始有重要作用。一般认为Poly(A)越长,病毒的感染性越强。病毒的ORF包括P1、P2、P3基因。L、P2、P3研究的相对较少,其中3A与病毒的宿主嗜性有关,3D为RNA聚合酶,可作为免疫和自然感染动物的鉴别诊断抗原。P1 为口蹄疫病毒的抗原结构,是研究口蹄疫免疫机制和新型疫苗的基础。VP1 可以作为分子流行病学调查,被很多国家所采用。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 基因组结构 POLY(A) 内部核糖体进入位点 RNA聚合酶 流行病学调查 RNA合成 鉴别诊断 疫苗研制 IRES 诊断抗原 感染动物 抗原结构 新型疫苗 免疫机制 感染性 vpG vp1 基础 疫源 全长 宿主
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鹅细小病毒VP1与VP3非重叠序列的克隆与原核表达 被引量:9
4
作者 布日额 王君伟 +3 位作者 吴金花 李勐 马广鹏 Ulrich Neumann 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2003年第10期3-6,共4页
根据鹅细小病毒 GPV H1株基因组核苷酸序列设计了一对引物 ,对其结构蛋白 VP1与 VP3非重叠核苷酸序列进行 PCR扩增 ,并克隆到表达性载体 p GEX- 6 p- 1,经酶切鉴定筛选出阳性克隆 ,并转化到大肠杆菌 BL 2 1(ED3) plys S进行原核表达 ,并... 根据鹅细小病毒 GPV H1株基因组核苷酸序列设计了一对引物 ,对其结构蛋白 VP1与 VP3非重叠核苷酸序列进行 PCR扩增 ,并克隆到表达性载体 p GEX- 6 p- 1,经酶切鉴定筛选出阳性克隆 ,并转化到大肠杆菌 BL 2 1(ED3) plys S进行原核表达 ,并用 SDS- PAGE鉴定 ,结果表明融合蛋白在表达性细菌 BL2 1中重获得了高效表达。 展开更多
关键词 细小病毒 vp1 vp3 非重叠序列 克隆 原核表达 基因组 核苷酸 结构蛋白 大肠杆菌
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Genetic Analysis of the VP1 Region of Human Enterovirus 71 Strains Isolated in Fuyang,China,During 2008 被引量:19
5
作者 Shao-hui MA Jian-sheng LIU Jing-jing WANG Hai-jing SHI Hui-juan YANG Jun-ying CHEN Long-ding LIU Qi-han LI 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2009年第3期162-170,共9页
Enterovirus 71 (EV71) is a common cause of Hand, foot, and mouth disease (HFMD) and may also cause severe neurological diseases, such as encephalitis and poliomyelitis-like paralysis. To examine the genetic divers... Enterovirus 71 (EV71) is a common cause of Hand, foot, and mouth disease (HFMD) and may also cause severe neurological diseases, such as encephalitis and poliomyelitis-like paralysis. To examine the genetic diversity of EV71, we determined and analyzed the complete VP1 sequences (891 nueleotides) from nine EV71 strains isolated in Fuyang, China. We found that nine EV71 strains isolated were over 98% homologous at the nucleotide level and 93%-100% homologous tO members of the C4 subgenogroup. At the amino acid level, these Fuyang strains were 99% -100% homologous to one another, 97%-100% homologous to members of the C4 subgenogroup, and the histidine(H) at amino acid position 22 was conserved among the Fuyang strains. The results indicate that Fuyang isolates belong to genotype C4, and an H at position 22 appears to be a marker for the Fuyang strains. 展开更多
关键词 vp1 gene Genotype C Enterovirus 71(EV71
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Molecular epidemiology and evolution of worldwide enterovirus 71 strains isolated from 1970 to 2004 被引量:18
6
作者 DONG XiaoNan YING Jian CHEN YingHua 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2007年第11期1484-1490,共7页
Human enterovirus 71 (EV71) is one of the major etiological agents of the hand-foot-and-mouth disease (HFMD) that often causes severe neurological complications. Recently,its outbreaks mainly take place in the torrid ... Human enterovirus 71 (EV71) is one of the major etiological agents of the hand-foot-and-mouth disease (HFMD) that often causes severe neurological complications. Recently,its outbreaks mainly take place in the torrid zone of the Asia-Pacific region. To study the evolution and genetic variability,we collected 532 EV71 strains with almost complete or complete VP1 sequences (891 nt) isolated worldwide from 1970 to 2004. The pairwise homologies and genetic distances were analyzed. Most strains belong to previously identified genotype B and C. However,a unique strain R13223-IND-01 appears not to fall into current three genotypes (A,B and C),and probably represents a new genotype D. Some orphan strains were observed in the genotypes B and C,and their significance in the EV71 evolution was discussed. Moreover,there is a significant co-variance of 6 discrete positions on VP1 (amino acid 43,58,164,184,240 and 249). This high co-variability is tightly related with the subgenotypes. 展开更多
关键词 肠道病毒71 流行病学 可变性
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肠道病毒71型外壳蛋白VP1在Pichia pastoris酵母中的表达 被引量:12
7
作者 杨国威 何雅清 +3 位作者 薛颖 周世力 马骊 金奇 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期114-117,共4页
利用逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)扩增肠道病毒71型(EV71)外壳蛋白VP1基因,经序列测定证实后,构建重组表达质粒pPIC9K/VP1,转化Pichiapastoris酵母宿主菌GS115,甲醇诱导表达。SDS PAGE分析显示:表达产物的分子量约为34kD,与天然VP1大... 利用逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)扩增肠道病毒71型(EV71)外壳蛋白VP1基因,经序列测定证实后,构建重组表达质粒pPIC9K/VP1,转化Pichiapastoris酵母宿主菌GS115,甲醇诱导表达。SDS PAGE分析显示:表达产物的分子量约为34kD,与天然VP1大小一致。凝胶薄层扫描分析显示:目的蛋白表达量占培养上清总蛋白的60%以上。ELISA实验表明,重组蛋白VP1具有较好的抗原性。使用饱和硫酸铵分级沉淀法初步纯化的表达产物,能够较特异性地与EV71感染者血清中的抗体产生反应,而且与抗柯萨奇病毒A16特异性抗体不产生反应。通过利用表达产物作为抗原,对156份血清的检测初步证实,重组蛋白VP1可以作为检测EV71感染的的检测用抗原。 展开更多
关键词 肠道病毒71 外壳蛋白vpl Pichiapastoris酵母 表达 逆转录聚合酶链式反应
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口蹄疫病毒VP1蛋白在酵母中的表达及免疫原性分析 被引量:10
8
作者 金华利 张富春 +3 位作者 单文娟 张爱莲 李轶杰 王宾 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期513-516,共4页
目的 :利用毕赤酵母表达系统表达牛O型口蹄疫外壳蛋白(FMDVVP1) ,并对表达的蛋白进行免疫原性鉴定。方法 :将FMDVvp1基因克隆到毕赤酵母Pichiapastoris分泌性表达载体pSuperY中 ,构建重组表达载体pSuperY/vp1,经测序证明vp1基因序列的... 目的 :利用毕赤酵母表达系统表达牛O型口蹄疫外壳蛋白(FMDVVP1) ,并对表达的蛋白进行免疫原性鉴定。方法 :将FMDVvp1基因克隆到毕赤酵母Pichiapastoris分泌性表达载体pSuperY中 ,构建重组表达载体pSuperY/vp1,经测序证明vp1基因序列的正确性。将纯化的重组质粒经线性化酶切后 ,用电转化法将pSuperY/vp1导入毕赤酵母菌种SMD116 8H中。对表达产物用SDS PAGE和Westernblot进行分析 ,并用酵母表达的FMDVVP1蛋白免疫小鼠。结果 :以重组质粒pSuperY/vp1转化毕赤酵母菌后 ,能表达相对分子量 (Mr)为 6 6 0 0 0和4 30 0 0的FMDVVP1蛋白。动物免疫结果表明 ,FMDVVP1蛋白能诱导小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答。结论 :在毕赤酵母中成功地表达FMDVVP1蛋白 。 展开更多
关键词 蛋白 酵母表达 vp1 免疫原性 毕赤酵母菌 重组质粒 细胞免疫应答 口蹄疫病毒 vp1基因 FMDV
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O型口蹄疫病毒结构蛋白基因VP1的克隆与原核表达 被引量:14
9
作者 付薇 陈磊 +5 位作者 熊毅 潘琼 王常伟 陈进喜 胡晓静 刘棋 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第35期15386-15388,共3页
[目的]为进一步研究口蹄疫病毒的诊断方法提供理论依据。[方法]根据GenBank上已公布的O型口蹄疫病毒核苷酸序列,设计合成1对特异性引物,通过RT-PCR扩增VP1基因,将其克隆至表达载体pGEX-6p-1中,经测序鉴定目的基因正确地整合至表达质粒中... [目的]为进一步研究口蹄疫病毒的诊断方法提供理论依据。[方法]根据GenBank上已公布的O型口蹄疫病毒核苷酸序列,设计合成1对特异性引物,通过RT-PCR扩增VP1基因,将其克隆至表达载体pGEX-6p-1中,经测序鉴定目的基因正确地整合至表达质粒中,用IPTG诱导重组基因表达。[结果]通过PCR扩增获得682 bp的目的片段,所克隆的VP1基因在原核细胞中成功表达,表达产物为融合蛋白,经SDS-PAGE鉴定分子量为51 kD,Western Blot结果表明融合蛋白具有免疫原性。[结论]获得了猪O型口蹄疫VP1融合蛋白,可作为包被抗原用于口蹄疫诊断试剂盒的研制。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 vp1 克隆 表达
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双抗体夹心ELISA检测羊肠道病毒抗原方法的建立及病原流行病学调查 被引量:14
10
作者 鲁海冰 胡俊英 +5 位作者 张群 王浴光 郭昌明 朱利塞 涂长春 王新平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期653-657,共5页
应用本实验室分离的国内首株羊肠道病毒(CEV)-JL14VP1重组蛋白制备的兔源多克隆抗体和抗CEV-JL14病毒的单克隆抗体,建立了检测CEV抗原的双抗体夹心ELISA方法,并对吉林省和内蒙古地区羊群感染CEV进行了病原流行病学调查。方阵试验确定了C... 应用本实验室分离的国内首株羊肠道病毒(CEV)-JL14VP1重组蛋白制备的兔源多克隆抗体和抗CEV-JL14病毒的单克隆抗体,建立了检测CEV抗原的双抗体夹心ELISA方法,并对吉林省和内蒙古地区羊群感染CEV进行了病原流行病学调查。方阵试验确定了CEV VP1鼠源IgG捕获抗体的最佳包被量为0.2μg/孔,酶标抗体的最佳稀释倍数为1∶1 000。对大量CEV阴性粪便样品进行检测与统计学处理,确定了双抗体夹心ELISA检测CEV的判定标准为样品D490值≥0.216判定为阳性。特异性、敏感性和重复性试验结果表明,所建立的检测CEV抗原方法具有特异、敏感、快速和重复性好等特点。以建立的双抗体夹心ELISA方法,对吉林省和内蒙古不同地区的羊群粪便样品进行了检测,发现不同地区的羊群都存在着严重的CEV感染,感染率高达12%~100%。本研究为今后CEV感染的诊断、检疫及防制提供了有效的手段和流行病学理论依据。 展开更多
关键词 羊肠道病毒 CEV-JL14 vp1 双抗体夹心 ELISA
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O型口蹄疫病毒VP1 T细胞、B细胞表位双拷贝基因与大肠杆菌LTB、STⅠ肠毒素基因融合表达产物的免疫应答 被引量:12
11
作者 庄娟 尤永进 +2 位作者 陈波 饶忠 潘洁 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期557-562,共6页
合成O型口蹄疫病毒VP1蛋白中与细胞免疫(21~40表位肽)及体液免疫(141~160表位肽)相关的基因序列2020VP1,运用基因工程技术构建了含有肠毒素大肠杆菌LTB、STⅠ基因及双拷贝2020VP1的融合表达载体r2020-B-2020-STⅠ,转化宿主菌BL2... 合成O型口蹄疫病毒VP1蛋白中与细胞免疫(21~40表位肽)及体液免疫(141~160表位肽)相关的基因序列2020VP1,运用基因工程技术构建了含有肠毒素大肠杆菌LTB、STⅠ基因及双拷贝2020VP1的融合表达载体r2020-B-2020-STⅠ,转化宿主菌BL21(DE3)RIL后的表达产物经SDS—PAGE分析,结果显示重组融合蛋白的分子量约为45kDa,表达量较高。ELISA实验结果显示,融合蛋白能与霍乱毒素(cholera toxin)CTB抗体特异结合。动物实验表明,融合蛋白能够诱发兔体产生较强的FMDV中和抗体,免疫豚鼠在低浓度FMDV刺激下能够产生特异性T淋巴细胞增殖反应,说明融合蛋白能诱导机体产生FMDV特异性细胞及体液免疫反应;同时,融合蛋白免疫雌鼠能够抵抗大肠杆菌强毒株攻击,免疫兔体能够产生STⅠ中和抗体,且融合蛋白不具STⅠ毒性,证明融合蛋白具有良好的LTB、STⅠ免疫原性。实验结果表明,此融合蛋白具有开发成为口蹄疫及肠毒素腹泻联合疫苗的应用价值。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 vp1 T细胞表位 B细胞表位 肠毒素大肠杆菌 LTB ST 免疫应答
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肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型分离株的VP1基因特征分析 被引量:13
12
作者 张建华 江炳福 +2 位作者 程险峰 游贤惠 孟继鸿 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2013年第2期173-179,共7页
目的:探讨苏皖地区手足口病(HFMD)患者肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CA16)分离株的VP1基因特征。方法:采集南京市、马鞍山市2009至2010年HFMD患者临床标本进行病毒分离和RT-PCR鉴定;扩增并测定VP1基因序列;从GenBank中选取EV71... 目的:探讨苏皖地区手足口病(HFMD)患者肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CA16)分离株的VP1基因特征。方法:采集南京市、马鞍山市2009至2010年HFMD患者临床标本进行病毒分离和RT-PCR鉴定;扩增并测定VP1基因序列;从GenBank中选取EV71和CA16不同基因型参考毒株,利用生物信息学软件进行同源性比对和系统进化树分析。结果:共分离到9株EV71和4株CA16,EV71分离株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为96.5%~99.8%和99%~100%;CA16分离株的核苷酸和氨基酸序列同源性为96.2%~98.5%和99.3%~100%;系统进化树分析显示,9株EV71全部属于C4a基因亚型,而4株CA16则全部属于B1b基因亚型。结论:2009至2010年苏皖地区分离到的EV71和CA16毒株分别属于C4a和B1b基因亚型,与国内其他地区HFMD病原学及分子进化研究结果一致,有望成为疫苗候选株作进一步研究。 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒71 柯萨奇病毒A16型 vp1 基因特征
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鹅细小病毒VP1-VP3非重叠序列地高辛探针的制备和应用 被引量:2
13
作者 布日额 王君伟 +2 位作者 吴金花 马波 Ulrich Neumann 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2005年第1期7-10,共4页
根据 GPV H1株核苷酸序列 ,设计了扩增 VP1- VP3基因非重叠序列的 1对引物 ,对其结构蛋白 VP1与 VP3非重叠核苷酸序列进行 PCR扩增 ,将 PCR产物纯化、回收后制备出 GPV VP1- VP3基因 DIG标记核酸探针 ,其标记效率达到0 .1pg/μl。特异... 根据 GPV H1株核苷酸序列 ,设计了扩增 VP1- VP3基因非重叠序列的 1对引物 ,对其结构蛋白 VP1与 VP3非重叠核苷酸序列进行 PCR扩增 ,将 PCR产物纯化、回收后制备出 GPV VP1- VP3基因 DIG标记核酸探针 ,其标记效率达到0 .1pg/μl。特异性检测结果表明 ,该探针能与 GPV不同毒株核酸发生特异性杂交 ,而与对照的 DPV、GPMV等病毒的核酸杂交反应均为阴性 ;敏感性检测结果表明该探针对 GPV的最低检出量为 0 .0 32 ng。上述试验结果表明该探针可以用于 展开更多
关键词 vp1 地高辛 探针 vp3基因 特异性检测 阴性 临床 鹅细小病毒 病料 核苷酸序列
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肠道病毒71型六安地区分离株VP1基因的生物信息学分析及B细胞表位预测 被引量:10
14
作者 俞海洋 陈伟 +7 位作者 倪德群 常宏伟 王林定 汤仁树 陈灵芝 丁晓娟 陈敬贤 王明丽 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第3期233-240,共8页
目的对肠道病毒71型(EV71)VP1基因编码衣壳蛋白进行系统结构与功能预测,为制备EV71疫苗和诊断抗原的研究提供理论基础。方法基于编号为1404-Luan(CHN)-08的EV71六安地区分离株VP1基因编码蛋白的氨基酸序列,应用ProtParam、SigalP、TMPRE... 目的对肠道病毒71型(EV71)VP1基因编码衣壳蛋白进行系统结构与功能预测,为制备EV71疫苗和诊断抗原的研究提供理论基础。方法基于编号为1404-Luan(CHN)-08的EV71六安地区分离株VP1基因编码蛋白的氨基酸序列,应用ProtParam、SigalP、TMPRED、Sosui、SOPMA、Phyre、Bepipred等生物信息学方法预测其信号肽、跨膜区、疏水性、二级结构、三级结构等性质和潜在的B细胞表位。结果 EV71六安地区分离株VP1基因编码蛋白没有信号肽,无跨膜区,是一个亲水性蛋白;VP1蛋白二级结构以无规则卷曲和β-片层为主,含有少量的α-螺旋,少见β-转角;VP1的三级结构中4~121氨基酸部分在蛋白表面形成一环状结构(VPl GH loop);EV71 VP1潜在的B细胞表位共有6个可能的抗原表位。其中,预测分值最高的线性表位区域位于157~177位氨基酸残基。结论成功预测了EV71六安地区分离株VP1二级结构、三级结构和B细胞表位,为制备EV71基因工程疫苗和诊断抗原的开发提供了理论基础。 展开更多
关键词 肠道病毒71 vp1 B细胞表位 二级结构 三级结构
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肠道病毒71型外壳蛋白VP1在大肠杆菌中的表达 被引量:7
15
作者 周世力 李琳琳 何雅青 《分析科学学报》 CAS CSCD 2007年第2期157-159,共3页
将扩增得到的肠道病毒71型外壳蛋白VP1基因克隆到测序载体pGEM-T,测序验证该序列为目的片段后,将目的基因克隆到原核表达载体pGEX-5x-1中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE分析和Western blot验证。结果表明,在经IPTG诱导... 将扩增得到的肠道病毒71型外壳蛋白VP1基因克隆到测序载体pGEM-T,测序验证该序列为目的片段后,将目的基因克隆到原核表达载体pGEX-5x-1中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE分析和Western blot验证。结果表明,在经IPTG诱导的BL21中检测到分子量与预期大小相符的大约60 kDa的融合蛋白。利用表达产物作为抗原,对EV71感染病人阳性血清的检测初步证实,重组蛋白VP1可以作为检测EV71感染的检测用抗原。 展开更多
关键词 肠道病毒71 vp1 大肠杆菌BL21
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An improved scheme for infectious bursal disease virus genotype classification based on both genome-segments A and B 被引量:10
16
作者 WANG Yu-long FAN Lin-jin +9 位作者 JIANG Nan GAO Li LI Kai GAO Yu-long LIU Chang-jun CUI Hong-yu PAN Qing ZHANG Yan-ping WANG Xiao-mei QI Xiao-le 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2021年第5期1372-1381,共10页
Infectious bursal disease(IBD)is caused by infectious bursal disease virus(IBDV),which has a genome consisting of two segments of double-stranded linear RNA.IBDVs have been traditionally divided into four phenotypes b... Infectious bursal disease(IBD)is caused by infectious bursal disease virus(IBDV),which has a genome consisting of two segments of double-stranded linear RNA.IBDVs have been traditionally divided into four phenotypes based on their pathogenicity and antigenicity,including classic,variant,very virulent,and attenuated IBDV.With the emergences of divergent molecular characteristics of novel strains produced by continuous mutations and recombination,it is increasingly difficult to define new IBDV strains using the traditional descriptive classification method.The most common classification scheme for IBDV with segmented genome is based solely on segment A,while the significance of segment B has been largely neglected.In this study,an improved scheme for IBDV genotype classification based on the molecular characteristics of both VP2(a viral capsid protein encoded by segment A)and VP1(an RNA-dependent RNA polymerase protein encoded by segment B)was proposed for the first time.In this scheme,IBDV was classified into nine genogroups of A and five genogroups of B,respectively;the genogroup A2 was further divided into four lineages.The commonly used phenotypic classifications of classic,variant,very virulent,and attenuated IBDVs correspond to the A1 B1,A2 B1,A3 B2,and A8 B1 genotypes of the proposed classification scheme.The novel variant IBDVs including the strains identified in this study were classified as belonging to genotype A2 d B1.The flexibility and versatility of this improved classification scheme will allow the unambiguous identification of existing and emerging IBDV strains,which will greatly facilitate molecular epidemiology studies of IBDV. 展开更多
关键词 infectious bursal disease virus GENOTYPE vp1 vp2 novel variant strain
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塞内卡病毒A(SVA) VP1间接ELISA抗体检测方法的建立及应用 被引量:9
17
作者 范慧 曾洁 +5 位作者 李亮 李仕海 张盼盼 延君芳 姜平 白娟 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1907-1912,共6页
为建立快速检测塞内卡病毒A (Senecavirus A,SVA)血清学方法,以纯化的重组VP1蛋白作为包被抗原,建立了SVA VP1间接ELISA抗体检测方法。结果表明,VP1蛋白以包涵体形式表达,纯化后的蛋白经Western blot鉴定具有较好的反应原性。该ELISA检... 为建立快速检测塞内卡病毒A (Senecavirus A,SVA)血清学方法,以纯化的重组VP1蛋白作为包被抗原,建立了SVA VP1间接ELISA抗体检测方法。结果表明,VP1蛋白以包涵体形式表达,纯化后的蛋白经Western blot鉴定具有较好的反应原性。该ELISA检测方法阴、阳性临界值为0.278,与口蹄疫病毒(FMDV)、脑心肌炎病毒(EMCV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等猪常见病原阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性。批内和批间重复性试验的变异系数均小于13%,表明该方法重复性和稳定性均较好。相比于血清中和试验(SN),该方法的相对敏感性为98.0%,两种方法的符合率为84%。用该方法对来自山东、广东省的8个猪场的276份血清进行检测,阳性率为22.1%。SVA VP1间接ELISA抗体检测法可作为一种快速、简便的血清学诊断方法,用于猪群SVA感染监测和流行病学初步调查。 展开更多
关键词 塞内卡病毒A vp1 间接ELISA
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2008年珠海肠道病毒71型分子流行病学研究 被引量:8
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作者 张丽荣 林毅雄 +4 位作者 李红霞 魏泉德 方艳梅 郑予柯 张静涛 《实用预防医学》 CAS 2009年第1期54-57,共4页
目的通过扩增VP1节段的核苷酸序列,对2008年珠海暴发流行的EV 71进行种系进化分析。方法选取10例手足口病暴发流行中的EV71阳性病例标本用一对特异引物进行VP1全基因核苷酸序列扩增,由生物技术公司在ABI3730型自动测序仪上测序,序列结果... 目的通过扩增VP1节段的核苷酸序列,对2008年珠海暴发流行的EV 71进行种系进化分析。方法选取10例手足口病暴发流行中的EV71阳性病例标本用一对特异引物进行VP1全基因核苷酸序列扩增,由生物技术公司在ABI3730型自动测序仪上测序,序列结果用Claxter、DNA Star、Mega软件进行分析。结果本文的10株病毒与C基因型代表株比较接近,核苷酸同源性在88.2%~99.2%之间,氨基酸同源性在98.7%~99.7%之间;尤其与C4基因型最为相近,与C4基因型相比较核苷酸同源性在97.6%~99.2%之间,氨基酸同源性在99.3%~99.7%之间;而与A、B基因型代表株比较差异较大,核苷酸同源性只在81.8%~84.4%之间,氨基酸同源性在94.6%~98.0%之间;说明本文的10株病毒皆属于EV71病毒C基因型、C4亚型。结论珠海和新会的病毒株可能与阜阳和浙江分离的EV71病毒有相同的起源,均属于C4亚型,并且C4亚型病毒在中国大陆可能有较广泛的分布和传播,因此加强各地流行的EV71病毒基因特征分析,进而探索EV71病毒的可能进化途径,对于肠道病毒的基础研究和防范EV71在中国的大规模暴发与流行具有重要意义。 展开更多
关键词 肠道病毒71 vp1 分子流行病学
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柯萨奇B组病毒3型VPI基因疫苗免疫效果的研究 被引量:5
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作者 朱莉 王灵枢 +3 位作者 刘晶星 陆德源 袁正宏 闻玉梅 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1999年第3期273-276,共4页
目的为研制防治病毒性心肌炎的基因疫苗打下基础。方法以带有CVB。P1、P2区核酸序列的pGEM质粒为模板,用PCR方法克隆CVB3VP1基因cDNA,插入真核表达载体pcDNA3中的HindⅢ和XbaⅠ位点之间,构建成重组质粒。经大量扩增纯化后,肌肉注射... 目的为研制防治病毒性心肌炎的基因疫苗打下基础。方法以带有CVB。P1、P2区核酸序列的pGEM质粒为模板,用PCR方法克隆CVB3VP1基因cDNA,插入真核表达载体pcDNA3中的HindⅢ和XbaⅠ位点之间,构建成重组质粒。经大量扩增纯化后,肌肉注射免疫BALB/c小鼠3次,用CVB3毒株攻击小鼠,取血及脾细胞检测其免疫效果。结果小鼠经3次免疫后,虽未测出明显免疫应答指标,但诱导了T、B细胞的免疫记忆反应,免疫组鼠在CVB3毒株攻击后,迅速诱导产生了强烈的二次免疫应答。结论CVB3VP1基因疫苗对CVB3毒株的攻击有一定程度的保护作用。 展开更多
关键词 柯萨奇B组病毒 vp1 基因疫苗 免疫效果 心肌炎
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虎源猫泛白细胞减少症病毒VP1、Vp2和NS1基因的克隆与序列分析 被引量:6
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作者 于亚丽 华育平 +3 位作者 曾祥伟 田丽红 夏咸柱 刘丹 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期83-85,共3页
根据Genbank上发表的猫泛白细胞减少症基因序列数据,设计了3对引物,并采用PCR方法对从东北虎粪便中分离出的FPV-HLJ的结构蛋白VP1、VP2和非结构蛋白NS1基因进行了扩增,将各片段克隆至pMD18-T载体,经PCR鉴定后进行了序列测定和分析... 根据Genbank上发表的猫泛白细胞减少症基因序列数据,设计了3对引物,并采用PCR方法对从东北虎粪便中分离出的FPV-HLJ的结构蛋白VP1、VP2和非结构蛋白NS1基因进行了扩增,将各片段克隆至pMD18-T载体,经PCR鉴定后进行了序列测定和分析。结果显示:FPV-HU与GenBank上公布的FPV、CPV和MEV毒株相比,核苷酸序列同源率VP1为98.8%-99.8%,VP2为98.1%-99.4%,NS1为98.6%-99.7%。VP1氨基酸同源率为97.6%-99.2%,VP2、NS1氨基酸同源率与其核苷酸同源率相同。并且VP1、VP2和NS1上分别有4、3和9处氨基酸发生变异。 展开更多
关键词 猫泛白细胞减少症病毒 vp1 vp2 NS1 基因 克隆 序列分析
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