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柯萨奇病毒A组10型VP1的生物信息学分析
1
作者
张高博
刘益文
+2 位作者
李子星
刘一洋
袁俊
《公共卫生与预防医学》
2023年第5期14-19,共6页
目的 柯萨奇病毒A组10型(coxsackievirus A10,CV-A10)是引发手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)的重要病原体之一,此研究运用生物信息学方法预测分析其病毒蛋白(viral protein, VP)中VP1的理化性质、结构特征以及抗原表位。...
目的 柯萨奇病毒A组10型(coxsackievirus A10,CV-A10)是引发手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)的重要病原体之一,此研究运用生物信息学方法预测分析其病毒蛋白(viral protein, VP)中VP1的理化性质、结构特征以及抗原表位。方法 通过ProtParam、SOPMA、SWISS-MODEL、PDBsum、ProSA-web预测分析CV-A10 VP1的理化性质和结构特征。应用DNAstar、ABCpred、Bepipred 2.0、ElliPro、DiscoTope-2.0、NetMHCpan-4.1、NetMHCIIpan-4.0、Consurf、VaxiJen v.2.0、AllerTOP v.2.0、ToxinPred2、IEDB immunogenicity预测分析CV-A10 VP1的抗原表位。结果 CV-A10 VP1为碱性、不稳定的亲水性蛋白,其二级结构以无规则卷曲为主。该蛋白还存在多个潜在B、T细胞抗原表位以及基于潜在表位之上的优势抗原表位。结论 CV-A10 VP1蛋白有多处可诱导特异性体液免疫和细胞免疫的潜在位点,研究为其实验鉴定、分子流行病学研究和疫苗研发提供了重要支持。
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关键词
手足口病(HFMD)
柯萨奇病毒A组
1
0型(CV-A
1
0)
病毒蛋白
1
(
vp
1
)
生物信息学
抗原表位
原文传递
柯萨奇病毒A组2型VP1和VP3蛋白原核表达及多克隆抗体的制备
被引量：
1
2
作者
胡岗
靳卫平
+6 位作者
卢佳
吴杰
周金戈
王文辉
王泽鋆
孟胜利
申硕
《微生物学免疫学进展》
2020年第4期22-28,共7页
目的制备柯萨奇病毒A组2型(Coxsackievirus A2,CV-A2)兔抗病毒蛋白质1(viral protein 1,VP1)和病毒蛋白质3(viral protein 3,VP3)多克隆抗体,为CV-A2相关研究制备定性、定量试剂。方法用逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)分...
目的制备柯萨奇病毒A组2型(Coxsackievirus A2,CV-A2)兔抗病毒蛋白质1(viral protein 1,VP1)和病毒蛋白质3(viral protein 3,VP3)多克隆抗体,为CV-A2相关研究制备定性、定量试剂。方法用逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)分别扩增CV-A2 VP1、VP3基因片段(612、420个碱基),并将其克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,获得pGEX-6P-1-VP1-ΔN43、pGEX-6P-1-VP3-ΔN8。将其转化大肠杆菌BL21,经异丙基硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达N端带有谷胱甘肽S移换酶(glutathione S-transferase,GST)标签的重组蛋白,并对其进行纯化。将纯化的GST-CV-A2-VP1-ΔN43、GST-CV-A2-VP3-ΔN8融合蛋白经背部皮下免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗血清,并通过ELISA、Western blot和间接免疫荧光法(indirect immunofluorescent assay,IFA)进行鉴定。结果重组表达载体构建成功,目的蛋白是以不可溶的包涵体存在。ELISA结果显示,CV-A2-VP1-ΔN43所制备的免疫血清最大稀释倍数为106时,免疫血清的A450 nm值为免疫前血清的2.0倍;CV-A2-VP3-ΔN8制备的免疫血清最大稀释倍数为107时,免疫血清的A450值为免疫前血清的6.0倍。Western blot结果显示,所制备的多克隆抗体可特异性识别CV-A2-VP1、VP3。IFA结果显示,抗GST-VP1-ΔN43、GST-VP3-ΔN8多克隆抗体可特异性识别CV-A2 VP1、VP3蛋白。结论成功制备了特异性识别原核表达的CV-A2重组蛋白及天然CV-A2病毒颗粒中的VP1、VP3蛋白的多克隆抗体。该抗体的成功制备为结构蛋白VP1、VP3的功能研究及病毒定性定量分析奠定了基础。
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关键词
柯萨奇病毒A组2型
病毒蛋白质
1
病毒蛋白质3
多克隆抗体
原核表达
原文传递
题名
柯萨奇病毒A组10型VP1的生物信息学分析
1
作者
张高博
刘益文
李子星
刘一洋
袁俊
机构
湖北葛店人福药用辅料有限责任公司
武汉华夏理工学院
武汉市东西湖区人民医院公共卫生科
出处
《公共卫生与预防医学》
2023年第5期14-19,共6页
基金
武汉市卫健委科研项目“多重荧光定量RT-PCR快速检测手足口病病原方法的研究”(WX21D85)。
文摘
目的 柯萨奇病毒A组10型(coxsackievirus A10,CV-A10)是引发手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)的重要病原体之一,此研究运用生物信息学方法预测分析其病毒蛋白(viral protein, VP)中VP1的理化性质、结构特征以及抗原表位。方法 通过ProtParam、SOPMA、SWISS-MODEL、PDBsum、ProSA-web预测分析CV-A10 VP1的理化性质和结构特征。应用DNAstar、ABCpred、Bepipred 2.0、ElliPro、DiscoTope-2.0、NetMHCpan-4.1、NetMHCIIpan-4.0、Consurf、VaxiJen v.2.0、AllerTOP v.2.0、ToxinPred2、IEDB immunogenicity预测分析CV-A10 VP1的抗原表位。结果 CV-A10 VP1为碱性、不稳定的亲水性蛋白,其二级结构以无规则卷曲为主。该蛋白还存在多个潜在B、T细胞抗原表位以及基于潜在表位之上的优势抗原表位。结论 CV-A10 VP1蛋白有多处可诱导特异性体液免疫和细胞免疫的潜在位点,研究为其实验鉴定、分子流行病学研究和疫苗研发提供了重要支持。
关键词
手足口病(HFMD)
柯萨奇病毒A组
1
0型(CV-A
1
0)
病毒蛋白
1
(
vp
1
)
生物信息学
抗原表位
Keywords
Hand,foot,and
mouth
disease(HFMD)
Coxsackievirus
A
1
0(CV-A
1
0)
viral
protein
1(
vp
1)
Bioinformatics
Antigenic
epitope
分类号
R111 [医药卫生—公共卫生与预防医学]
原文传递
题名
柯萨奇病毒A组2型VP1和VP3蛋白原核表达及多克隆抗体的制备
被引量：
1
2
作者
胡岗
靳卫平
卢佳
吴杰
周金戈
王文辉
王泽鋆
孟胜利
申硕
机构
武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究一室
出处
《微生物学免疫学进展》
2020年第4期22-28,共7页
文摘
目的制备柯萨奇病毒A组2型(Coxsackievirus A2,CV-A2)兔抗病毒蛋白质1(viral protein 1,VP1)和病毒蛋白质3(viral protein 3,VP3)多克隆抗体,为CV-A2相关研究制备定性、定量试剂。方法用逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)分别扩增CV-A2 VP1、VP3基因片段(612、420个碱基),并将其克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,获得pGEX-6P-1-VP1-ΔN43、pGEX-6P-1-VP3-ΔN8。将其转化大肠杆菌BL21,经异丙基硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达N端带有谷胱甘肽S移换酶(glutathione S-transferase,GST)标签的重组蛋白,并对其进行纯化。将纯化的GST-CV-A2-VP1-ΔN43、GST-CV-A2-VP3-ΔN8融合蛋白经背部皮下免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗血清,并通过ELISA、Western blot和间接免疫荧光法(indirect immunofluorescent assay,IFA)进行鉴定。结果重组表达载体构建成功,目的蛋白是以不可溶的包涵体存在。ELISA结果显示,CV-A2-VP1-ΔN43所制备的免疫血清最大稀释倍数为106时,免疫血清的A450 nm值为免疫前血清的2.0倍;CV-A2-VP3-ΔN8制备的免疫血清最大稀释倍数为107时,免疫血清的A450值为免疫前血清的6.0倍。Western blot结果显示,所制备的多克隆抗体可特异性识别CV-A2-VP1、VP3。IFA结果显示,抗GST-VP1-ΔN43、GST-VP3-ΔN8多克隆抗体可特异性识别CV-A2 VP1、VP3蛋白。结论成功制备了特异性识别原核表达的CV-A2重组蛋白及天然CV-A2病毒颗粒中的VP1、VP3蛋白的多克隆抗体。该抗体的成功制备为结构蛋白VP1、VP3的功能研究及病毒定性定量分析奠定了基础。
关键词
柯萨奇病毒A组2型
病毒蛋白质
1
病毒蛋白质3
多克隆抗体
原核表达
Keywords
Coxsackievirus
A2(CV-A2)
viral
protein
1(
vp
1)
viral
protein
3(
vp
3)
Polyclonal
antibody
Prokaryotic
expression
分类号
R392-33 [医药卫生—免疫学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
柯萨奇病毒A组10型VP1的生物信息学分析
张高博
刘益文
李子星
刘一洋
袁俊
《公共卫生与预防医学》
2023
0
原文传递
2
柯萨奇病毒A组2型VP1和VP3蛋白原核表达及多克隆抗体的制备
胡岗
靳卫平
卢佳
吴杰
周金戈
王文辉
王泽鋆
孟胜利
申硕
《微生物学免疫学进展》
2020
1
原文传递
已选择
0
条
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