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P型PRSV-VPg蛋白与寄主eIF4E蛋白的互作 被引量：3
1
作者 胡正龙 肖旭倩 +3 位作者 沈文涛 言普 黎小瑛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 2009年第7期1013-1018,共6页
为研究番木瓜环斑病毒P型株系(PRSV-P)的病毒基因组连接蛋白(VPg)与寄主eIF4E蛋白的互作,采用双分子荧光互补技术(BiFc),通过基因枪转化法轰击洋葱表皮,在荧光显微镜下观察两者间的互作结果。结果表明:番木瓜eIF4E与P型PRSV-VPg,西瓜eI... 为研究番木瓜环斑病毒P型株系(PRSV-P)的病毒基因组连接蛋白(VPg)与寄主eIF4E蛋白的互作,采用双分子荧光互补技术(BiFc),通过基因枪转化法轰击洋葱表皮,在荧光显微镜下观察两者间的互作结果。结果表明:番木瓜eIF4E与P型PRSV-VPg,西瓜eIF4E与P型PRSV-VPg蛋白均发生互作。eIF4E与VPg的互作为研究通过转基因方法抑制或过量表达突变关键位点的寄主因子,阻断关键因子互作获得抗病植株提供了可行性依据。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 病毒基因组连接蛋白 真核翻译起始因子 双分子荧光互补技术 蛋白互作
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小麦黄花叶病毒编码VPg蛋白N端结构是VPg与核仁蛋白Fibrillarin互作区域 被引量：1
2
作者 边靓 向荣 +1 位作者 孙丽英 陈剑平 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第1期89-94,共6页
小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)属于马铃薯Y病毒科大麦黄花叶病毒属成员,其基因组是由两条正义单链RNA组成,共编码10个蛋白。其中,VPg(Viral protein genome-linked)作为病毒末端结合蛋白,与病毒基因组RNA 5’端共价... 小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)属于马铃薯Y病毒科大麦黄花叶病毒属成员,其基因组是由两条正义单链RNA组成,共编码10个蛋白。其中,VPg(Viral protein genome-linked)作为病毒末端结合蛋白,与病毒基因组RNA 5’端共价连接。利用软件分析WYMV VPg蛋白氨基酸序列发现其N端具有核定位信号(NLS)序列,C端具有核输出信号(NES)序列。通过激光共聚焦显微镜观察VPg与GFP融合蛋白在烟草细胞中的表达情况发现,GFP-VPg主要定位于细胞核中。利用eYFP(n)标记核仁结构蛋白Fibrillarin与VPg进行双分子荧光互补实验发现,VPg与Fibrillarin互作且定位于细胞核中。根据VPg结构特点构建一系列缺失突变体与Fibrillarin的互作实验验证了它们之间的互作区域发生在N端NLS区域。 展开更多
关键词 小麦黄花叶病毒 vpg蛋白 细胞核定位 Fibrillarin蛋白 蛋白质互作
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PVX病毒载体介导2种马铃薯Y病毒科病毒VPg蛋白表达诱导烟草叶片系统坏死的研究
3
作者 刘洋 周鹏 +4 位作者 庹德财 唐庆华 言普 黎小瑛 沈文涛 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2021年第8期2342-2349,共8页
芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)和槟榔坏死环斑病毒(Areca plam necrotic ringspot virus,ANRSV)是马铃薯Y病毒科(Potyviridae)中分别可诱导十字花科作物和槟榔产生坏死病症的2种不同属病毒。VPg(Viral protein genome linked... 芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)和槟榔坏死环斑病毒(Areca plam necrotic ringspot virus,ANRSV)是马铃薯Y病毒科(Potyviridae)中分别可诱导十字花科作物和槟榔产生坏死病症的2种不同属病毒。VPg(Viral protein genome linked)作为与马铃薯Y病毒科病毒基因组5′端的结合蛋白,在病毒复制、翻译和运动等侵染过程中发挥重要作用。本研究利用In-Fusion克隆策略分别构建了可表达3′端融合Strep蛋白标签序列的ANRSV和TuMV VPg全长编码基因的马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)载体pPVX-VPg-AR和pPVX-VPg-Tu。通过农杆菌渗透注射接种本生烟(Nicotiana benthamiana),利用RT-PCR、Strep蛋白标签亲和层析和Western blot等方法证明了PVX病毒载体能够介导VPg-AR和VPg-Tu蛋白在本生烟中系统表达,且发现这2种VPg蛋白的过量表达诱导本生烟叶片产生了不同程度的系统性坏死病症。进一步采用DAB和NBT染色,在产生坏死症状叶片中检测到大量活性氧(reactive oxygen species,ROS)的积累。因此,推测VPg可能是TuMV和ANRSV诱发植物病症产生的一个决定因子,为后续研究这2种病毒诱导症状形成机制奠定了基础。 展开更多
关键词 芜菁花叶病毒 槟榔坏死环斑病毒 马铃薯X病毒 vpg蛋白 侵染 本生烟
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马铃薯Y病毒基因组连接蛋白的原核表达及纯化
4
作者 杨炳辉 高亦兵 《检验检疫学刊》 2014年第1期58-61,50,共5页
设计合成马铃薯Y病毒基因组连接蛋白基因的特异引物,以本实验室获得的AQ4分离物cDNA为模板,通过PCR方法扩增得到目的基因,连入表达载体PEHISEGFPTEV及PEHISTEV,用IPTG诱导,使其在大肠杆菌中得到正确表达,并利用镍柱对VPg蛋白进行纯化,... 设计合成马铃薯Y病毒基因组连接蛋白基因的特异引物,以本实验室获得的AQ4分离物cDNA为模板,通过PCR方法扩增得到目的基因,连入表达载体PEHISEGFPTEV及PEHISTEV,用IPTG诱导,使其在大肠杆菌中得到正确表达,并利用镍柱对VPg蛋白进行纯化,为抗血清的制备以及VPg蛋白晶体结构和互作蛋白的研究奠定基础。 展开更多
关键词 马铃薯Y病毒 基因组连接蛋白基因 原核表达 蛋白纯化
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白菜翻译起始因子eIF(iso)4E.a/c与芜菁花叶病毒TuMV-C4/UK1蛋白互作分析 被引量：4
5
作者 李国亮 钱伟 +7 位作者 张淑江 李菲 章时藩 张慧 谢露露 武剑 王晓武 孙日飞 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1299-1308,共10页
为阐明白菜翻译起始因子异构体eIF(iso)4E的表达特性,以及该异构体与芜菁花叶病毒(TuMV)的互作关系,在白菜‘极早春’中克隆了eIF(iso)4E.a基因,在‘BP8407’中克隆了eIF(iso)4E.c基因。这两个基因长度一致,均编码200个氨基酸。酵母双... 为阐明白菜翻译起始因子异构体eIF(iso)4E的表达特性,以及该异构体与芜菁花叶病毒(TuMV)的互作关系,在白菜‘极早春’中克隆了eIF(iso)4E.a基因,在‘BP8407’中克隆了eIF(iso)4E.c基因。这两个基因长度一致,均编码200个氨基酸。酵母双杂交和双分子荧光互补试验表明:eIF(iso)4E.a仅与TuMV-C4株系互作,而不与TuMV-UK1株系互作;eIF(iso)4E.c仅与TuMV-UK1株系互作,而不与TuMV-C4株系互作。对白菜eIF(iso)4E蛋白氨基酸序列及空间结构分析发现:eIF(iso)4E蛋白包含帽结合蛋白结构,eIF(iso)4E.a和eIF(iso)4E.c蛋白间存在20个差异氨基酸,其中17个差异氨基酸位于帽结合蛋白结构上;TuMV-C4 VPg与TuMV-UK1 VPg蛋白有4个氨基酸差异位点。通过对TuMV不同株系的VPg蛋白(病毒基因组连接蛋白)氨基酸序列频率分析发现,在4个氨基酸差异位点处,氨基酸的使用频率具有选择性。 展开更多
关键词 白菜 eIF(iso)4E TUMV vpg(virus genome-linked protein) 互作关系
原文传递
口蹄疫病毒VPg2基因克隆表达及VPg2-ELISA检测抗体评价 被引量：1
6
作者 田克恭 王宏伟 +7 位作者 孙明 王传彬 陈西钊 遇秀玲 曹振 金萍 许燕辉 赵心力 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期2344-2348,共5页
成功亚克隆了口蹄疫病毒(FMDV)太保毒株3ABC中VPg2基因,并将其插入pGEX-4T-1表达载体构建重组表达质粒,Westernblotting分析表明,表达的VPg2蛋白与FMDV阳性血清发生反应。以VPg2表达蛋白为抗原建立间接ELISA方法,对背景清楚的试验牛血... 成功亚克隆了口蹄疫病毒(FMDV)太保毒株3ABC中VPg2基因,并将其插入pGEX-4T-1表达载体构建重组表达质粒,Westernblotting分析表明,表达的VPg2蛋白与FMDV阳性血清发生反应。以VPg2表达蛋白为抗原建立间接ELISA方法,对背景清楚的试验牛血清进行检测,结果VPg2表达蛋白与空白对照组(C组)和灭活疫苗反复免疫组(CI组)牛血清均不发生反应,与未免疫直接攻毒组(D组)和免疫后攻毒组(I组)血清均发生反应;对D组和I组,VPg2表达蛋白抗体持续时间最长,可达90d,最早呈阳性反应时间为攻毒后第10天。VPg2表达蛋白抗体持续时间与先前测定的3ABC表达蛋白抗体几乎相同。用VPg2-ELISA方法检测2170份进口阴性牛血清,12份出现假阳性,假阳性率为0.55%,而用3ABC-ELISA方法检测,48份出现假阳性,假阳性率为2.21%。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白 vpg2-ELISA方法评价
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猪札幌病毒VPg基因的原核表达及免疫原性研究 被引量：1
7
作者 单兴娜 杨彬 +3 位作者 柳纪省 张韵 杨勃 兰喜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第4期816-822,共7页
为获得猪札幌病毒病毒基因组连接蛋白(viral protein genome-linked,VPg),本试验以中国西北地区猪札幌病毒CH430株RNA为模板,通过RT-PCR扩增VPg基因,将其克隆至pMD19-T Simple Vector,双酶切及基因测序鉴定后,再亚克隆至pET-30a中构建... 为获得猪札幌病毒病毒基因组连接蛋白(viral protein genome-linked,VPg),本试验以中国西北地区猪札幌病毒CH430株RNA为模板,通过RT-PCR扩增VPg基因,将其克隆至pMD19-T Simple Vector,双酶切及基因测序鉴定后,再亚克隆至pET-30a中构建重组质粒,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。将纯化的目的蛋白免疫家兔得到超免疫血清。结果显示,获得的VPg基因全长为339bp,编码113个氨基酸。SDS-PAGE结果显示,重组菌在37℃、1.0mmol/L IPTG诱导表达6h时重组蛋白表达量最高,表达的目的蛋白主要以包涵体的形式存在,大小为22ku,与预期结果相符。Western blotting分析结果表明,该重组蛋白与超免疫血清具有良好的反应原性。超免疫血清ELISA效价可达1∶12 800,且具有良好的特异性。本试验获得的超免疫血清为研究猪札幌病毒非结构蛋白VPg的结构与功能奠定了基础。 展开更多
关键词 猪札幌病毒 病毒基因组连接蛋白(vpg) 原核表达 纯化
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马铃薯卷叶病毒基因功能的研究进展
8
作者 刘俊莹 张剑峰 +1 位作者 张华鹏 王聪聪 《中国马铃薯》 2011年第6期371-376,共6页
马铃薯卷叶病毒(PLRV)基因组具有较高的同源性和稳定性,不同株系间致病力不同。目前在VPg蛋白氨基酸序列和功能方面以及基因组功能方面取得了较大的进展。综述PLRV基因组核苷酸序列及其表达蛋白质在病毒侵染后的病害症状表达,病毒本身... 马铃薯卷叶病毒(PLRV)基因组具有较高的同源性和稳定性,不同株系间致病力不同。目前在VPg蛋白氨基酸序列和功能方面以及基因组功能方面取得了较大的进展。综述PLRV基因组核苷酸序列及其表达蛋白质在病毒侵染后的病害症状表达,病毒本身的复制增殖,以及病毒的传播等方面的作用。随着对基因组功能的研究更加深入,一定会给马铃薯的抗病育种带来更多可能。 展开更多
关键词 5'末端序列 vpg蛋白 蛋白质功能
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