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对虾白斑综合征病毒LAMP检测方法的建立 被引量：6
1
作者 冯华 张改平 +4 位作者 郭军庆 王爱萍 赵丽娜 杜晓明 王林林 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期707-711,共5页
根据对虾白斑综合征病毒(WSSV)囊膜蛋白VP28的基因序列设计合成4条特异性引物,以pMDT-VP28重组质粒为标准模板,通过优化反应体系和反应条件,建立了WSSV的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,测定LAMP对WSSV-DNA的最低检测限,并与巢式PCR进行... 根据对虾白斑综合征病毒(WSSV)囊膜蛋白VP28的基因序列设计合成4条特异性引物,以pMDT-VP28重组质粒为标准模板,通过优化反应体系和反应条件,建立了WSSV的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,测定LAMP对WSSV-DNA的最低检测限,并与巢式PCR进行了比较。结果显示,该LAMP方法的最佳反应温度为65℃,反应时间为60min;LAMP对WSSV的最低检测限为10copies/μL,而巢式PCR为100copies/μL,表明该LAMP方法的敏感性显著高于巢式PCR检测方法。因此,WSSV的LAMP检测方法比PCR更为简便、快速、灵敏,且无需昂贵的变温仪器,更适应水产养殖的现地检测,本研究为WSSV早期感染的快速检测提供了新方法。 展开更多
关键词 对虾白斑综合征病毒 环介导等温扩增 巢式聚合酶链反应 vp28基因
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罗氏沼虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP28基因的克隆及分析 被引量：1
2
作者 王晓兰 贡成良 +6 位作者 薛宇醒 曹广力 魏育红 陈辉 许雅香 张伟明 薛仁宇 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2007年第3期12-16,共5页
根据已公布的罗氏沼虾白斑综合征病毒(WSSV)囊膜蛋白VP28基因序列设计一对特异性引物,从疑似患白斑病毒病的罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)中提取总DNA,并以此为模板,经PCR扩增、克隆并测序后将该片段通过GenBank比对,证实为WSSV... 根据已公布的罗氏沼虾白斑综合征病毒(WSSV)囊膜蛋白VP28基因序列设计一对特异性引物,从疑似患白斑病毒病的罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)中提取总DNA,并以此为模板,经PCR扩增、克隆并测序后将该片段通过GenBank比对,证实为WSSV的VP28基因;与20个已公布的WSSV VP28进行同源性比较,结果显示:从中国对虾、斑节对虾、南美白对虾、日本对虾、波纹龙虾提取的病毒株聚为一类,印度对虾WSSV VP28为另一类,罗氏沼虾WSSV VP28又单独为一类。根据测序结果推测VP28蛋白的二级结构在氨基酸的7～29区间可能为跨膜螺旋区,且该区域高度保守。 展开更多
关键词 vp28基因 克隆 序列分析 蛋白质二级结构
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RNA干扰南美白对虾白斑病毒VP28基因的体外研究 被引量：2
3
作者 李咏梅 黎铭 +7 位作者 陈晓汉 兰宗宝 彭金霞 陈秀荔 蒋伟明 彭敏 杨春玲 谢达祥 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第6期2083-2087,共5页
为方便筛选VP28特异性siRNAs,通过构建真核表达载体pEGFP-VP28,然后将设计的siRNA与pEGFP-VP28共转染BHK细胞,并采用Western blotting检测GFP-VP28融合蛋白的表达情况以及半定量RT-PCR检验siRNA抑制VP28转录的效果,建立了体外RNA干扰法... 为方便筛选VP28特异性siRNAs,通过构建真核表达载体pEGFP-VP28,然后将设计的siRNA与pEGFP-VP28共转染BHK细胞,并采用Western blotting检测GFP-VP28融合蛋白的表达情况以及半定量RT-PCR检验siRNA抑制VP28转录的效果,建立了体外RNA干扰法筛选系统。结果表明,pEGFP-VP28能在BHK细胞正常表达,设计的3对siRNA对VP28的mRNA转录均有不同程度的干扰效果,其中siRNA2的干扰效果最为显著。研究结论为开展RNA干扰在对虾体内抑制WSSV的研究建立基础。 展开更多
关键词 南美白对虾 白斑病毒(WSSV) vp28基因 RNA干扰
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对虾白斑综合征病毒VP28基因在大肠杆菌中的表达 被引量：1
4
作者 许雅香 朱玉芳 +2 位作者 许梓荣 沈卫德 杜华华 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期31-33,共3页
在已构建重组质粒pGEM-vp28的基础上,通过NcoⅠ,HindⅢ双酶切质粒pGEM-vp28和表达载体质粒pET-30a,分别获得携带限制性内切酶粘性末端的vp28基因片段和表达载体质粒片段,两片段经T4DNA连接酶连接获得了重组表达质粒pET30a-vp28,将此重... 在已构建重组质粒pGEM-vp28的基础上,通过NcoⅠ,HindⅢ双酶切质粒pGEM-vp28和表达载体质粒pET-30a,分别获得携带限制性内切酶粘性末端的vp28基因片段和表达载体质粒片段,两片段经T4DNA连接酶连接获得了重组表达质粒pET30a-vp28,将此重组质粒导入表达宿主菌EscherichiacoliBL21中,用IFID诱导表达4h后,其表达产物在SDS-PAGE和Westernblot中的显示的特异性条带大小约27ku,与预期的大小相近。 展开更多
关键词 白斑综合征病毒 vp28基因 表达
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对虾白斑综合症病毒囊膜蛋白VP28表达载体的构建及在重组大肠杆菌中的表达
5
作者 郭瑞 《河套学院论坛》 2007年第4期44-49,共6页
采用PCR方法扩增了对虾白斑综合症病毒(White spot syndrome virus,WSSV)的囊膜蛋白基因VP28。将VP28基因克隆到原核表达载体pET-32a上,成功构建重组表达质粒pET-32a-VP28。将其转化在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中表达,经SDS-PAGE可... 采用PCR方法扩增了对虾白斑综合症病毒(White spot syndrome virus,WSSV)的囊膜蛋白基因VP28。将VP28基因克隆到原核表达载体pET-32a上,成功构建重组表达质粒pET-32a-VP28。将其转化在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中表达,经SDS-PAGE可检测到分子量约为42KD的融合蛋白。并且研究了乳糖替代IPTG作为诱导物对表达量的影响。结果发现,使用乳糖作诱导剂,重组蛋白的表达量与使用IPTG相似。 展开更多
关键词 白斑综合症病毒(WSSV) vp28基因 克隆 表达
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对虾白斑病毒VP28基因在聚球藻中的表达与分析 被引量：5
6
作者 邓元告 侯李君 +1 位作者 邓丽珍 施定基 《天津科技大学学报》 CAS 2008年第1期29-32,共4页
通过PCR从实验室保存的pMD-VP28质粒中扩增得到对虾白斑病毒囊膜蛋白VP28基因,同时在设计的引物起始密码子前添加促进外源基因在蓝藻中表达的SD序列,引物末端添加限制性内切酶位点BamHⅠ和EcoRⅠ,从质粒pRL-439获得强启动子PpsbA,酶切... 通过PCR从实验室保存的pMD-VP28质粒中扩增得到对虾白斑病毒囊膜蛋白VP28基因,同时在设计的引物起始密码子前添加促进外源基因在蓝藻中表达的SD序列,引物末端添加限制性内切酶位点BamHⅠ和EcoRⅠ,从质粒pRL-439获得强启动子PpsbA,酶切连接构建了pDC-VP28高效表达穿梭载体.利用三亲接合转移成功地将构建的载体pDC-VP28转化聚球藻7002.对转基因聚球藻进行培养,其表达产物通过SDS-PAGE分析,发现表达量达3%左右. 展开更多
关键词 对虾白斑病毒vp28基因 聚球藻7002 穿梭表达载体 三亲接合转移
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转基因聚球藻7942中vp28基因表达效率及其光合特性分析 被引量：2
7
作者 庄旻敏 贾晓会 +4 位作者 施定基 朱嘉诚 冯思豫 何培民 贾睿 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期30-37,共8页
背景：对虾白斑综合征病毒（white spot syndrome virus,WSSV）是对虾养殖业中危害最严重的病毒之一,至今尚无规模应用的有效药物防治方法。但近年来在WSSV免疫防治上进展较大。Vp28蛋白是WSSV囊膜上的主要结构蛋白,2004年以来其编码基... 背景：对虾白斑综合征病毒（white spot syndrome virus,WSSV）是对虾养殖业中危害最严重的病毒之一,至今尚无规模应用的有效药物防治方法。但近年来在WSSV免疫防治上进展较大。Vp28蛋白是WSSV囊膜上的主要结构蛋白,2004年以来其编码基因已在8种宿主中表达成功,在实验室试验中对WSSV的防治疗效显著,但目前尚未见到其在对虾产业中的应用。目的：利用对虾的天然饵料聚球藻表达Vp28重组蛋白,这种药食同源可简化操作,降低成本,有助其在生产中应用。方法：用荧光定量PCR方法检测转vp28基因聚球藻7942中vp28基因的表达效率。通过氧电极的方法测得转vp28基因型聚球藻在不同温度、光照、pH和盐度下的光合活性变化,找到它的最适生长条件。结果：检测了vp28基因表达效率为9.52%,是在鱼腥藻7120表达效率的3倍。最适采收时间是对数生长后期（15d左右）。转基因型蓝藻7 942的最适生长条件是：温度为40℃,盐度为0～0.1mol/L NaCl,pH为7.5,光强为450μmol/（m^2·s）。结论：确定了vp28基因在聚球藻中的表达效率及该转基因藻的最适培养条件,这些研究结果为用转vp28基因型聚球藻7942规模制备药食同源的口服剂提供了依据。 展开更多
关键词 转vp28基因聚球藻 光合活性 实时荧光定量PCR vp28基因表达效率
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