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斑贝链霉菌接合转移系统的构建及透明颤菌血红蛋白基因的表达对其次级代谢的影响 被引量:4
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作者 凌华云 闵勇 +3 位作者 熊伟 吕和平 喻子牛 郑应华 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期59-64,共6页
以pSET152和pHZ1358为出发质粒,通过供体大肠杆菌ET12567(pUZ8002)和S17-1接合转移斑贝链霉菌(Streptomycesbambergiensis),构建和优化了接合转移体系。采用OOE-PCR技术构建含ermEp*与vhb结构基因融合片段的整合型表达载体pBIB2005,转化... 以pSET152和pHZ1358为出发质粒,通过供体大肠杆菌ET12567(pUZ8002)和S17-1接合转移斑贝链霉菌(Streptomycesbambergiensis),构建和优化了接合转移体系。采用OOE-PCR技术构建含ermEp*与vhb结构基因融合片段的整合型表达载体pBIB2005,转化ET12567(pUZ8002)后,属间接合转移至斑贝链霉菌。通过PCR、CO结合差光谱验证vhb基因在斑贝链霉菌中整合表达。摇瓶发酵显示VHb蛋白能改善菌体对氧的需求,一定程度上促进细胞生长,提高抗生素产量。 展开更多
关键词 斑贝链霉菌 接合转移 vhb基因 OOE-PCR CO结合差光谱
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利用基因工程菌VG1(pTU14)产聚β-羟基丁酸酯的研究 被引量:4
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作者 于慧敏 尹进 +2 位作者 李红旗 杨胜利 沈忠耀 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期284-289,共6页
本文对透明颤菌血红蛋白基因 (vgb)和λ噬菌体裂解基因 (S RRz)在不同宿主大肠杆菌中的外源表达及其在聚β 羟基丁酸酯 (PHB)生产中的应用进行了研究。实验结果表明 ,同时携带vgb、S RRz和 phbCAB三种基因的产PHB基因工程菌VG1 ( pTU1 4... 本文对透明颤菌血红蛋白基因 (vgb)和λ噬菌体裂解基因 (S RRz)在不同宿主大肠杆菌中的外源表达及其在聚β 羟基丁酸酯 (PHB)生产中的应用进行了研究。实验结果表明 ,同时携带vgb、S RRz和 phbCAB三种基因的产PHB基因工程菌VG1 ( pTU1 4) ,经过 82h的摇瓶补料分批培养 ,菌体浓度可以高达 2 5 9g/L ,PHB百分含量则可在 52h时达到 95%以上 ;此外 ,该菌株不仅可以实现摇瓶高密度发酵培养和PHB产品的大量积累 ,还可以同时实现菌体细胞的可诱导裂解破壁 ,因此是一株具有潜在工业应用价值的多功能PHB生产菌株。 展开更多
关键词 vhb基因 S-RRZ 聚Β-羟基丁酸酯 高密度发酵
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委内瑞拉链霉菌秦岭变种属间接合转移系统的构建及透明颤菌血红蛋白的表达 被引量:3
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作者 高峰 王斌 +2 位作者 陈太春 汪志军 安德荣 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期406-410,共5页
【目的】构建委内瑞拉链霉菌秦岭变种属间接合转移系统及透明颤菌血红蛋白的表达。【方法】以链霉菌广泛使用的整合型质粒pSET152和复制型pHZ1358为出发质粒,通过供体大肠杆菌(Escherichia coli)ET12567(pUZ8002)进行属间接合转移委内... 【目的】构建委内瑞拉链霉菌秦岭变种属间接合转移系统及透明颤菌血红蛋白的表达。【方法】以链霉菌广泛使用的整合型质粒pSET152和复制型pHZ1358为出发质粒,通过供体大肠杆菌(Escherichia coli)ET12567(pUZ8002)进行属间接合转移委内瑞拉链霉菌秦岭变种。【结果】确定了该变种的最佳接合转移条件;通过SOE-PCR(Splicing by overlap extension PCR)技术构建含PermE和vhb结构基因融合片段的整合型表达载体pJD100,转化ET12567(pUZ8002)后属间接合转移委内瑞拉链霉菌秦岭变种。通过PCR和CO结合差光谱验证了vhb基因在委内瑞拉链霉菌秦岭变种中的整合表达。【结论】本文首次探索了委内瑞拉链霉菌秦岭变种接合转移系统,确定了委内瑞拉链霉菌秦岭变种的最佳接合转移条件,并采用基因工程手段使vhb基因在委内瑞拉链霉菌秦岭变种中获得表达。 展开更多
关键词 委内瑞拉链霉菌秦岭变种 接合转移 vhb基因 CO结合差光谱
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含融合杀虫基因和VHb基因双价表达载体的构建
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作者 王友如 郭三堆 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期6-8,共3页
目的:探索分子育种的新途径,获得高产多抗虫谱的转基因植物。方法:将密码子优化后的透明颤菌血红蛋白(vgbM)基因与融合杀虫基因(GFMcryIA+CPTI)构建成双价基因植物高效表达载体pGBI4ABCVHB,基因表达盒中含2个增强子、35S启动子、Ω前导... 目的:探索分子育种的新途径,获得高产多抗虫谱的转基因植物。方法:将密码子优化后的透明颤菌血红蛋白(vgbM)基因与融合杀虫基因(GFMcryIA+CPTI)构建成双价基因植物高效表达载体pGBI4ABCVHB,基因表达盒中含2个增强子、35S启动子、Ω前导序列、Kozak序列、多联终止密码子及Nos终止子以及正确切割、加工序列、Poly(A)信号序列。结果:通过根癌农杆菌介导转化烟草,获得了转基因植株,结论:vgbM基因在转基因烟草中有效表达;融合杀虫基因也表达出活性毒蛋白。 展开更多
关键词 融合杀虫基因 vhb基因 双价表达载体 抗虫性 活性蛋白
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透明颤菌血红蛋白基因克隆及植物表达载体的构建
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作者 肖宇 孙力 +1 位作者 王晓飞 高宇 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期41-44,共4页
透明颤菌血红蛋白是一种专性好氧的氧结合蛋白。目的:以VHb基因构建植物表达载体,并在大肠杆菌中实现表达。方法:使利用试剂盒提取透明颤菌血红蛋白的总DNA,以其为模板通过PCR克隆VHb基因。结果:克隆得到VHb基因片段的长度约为0.5kb,与N... 透明颤菌血红蛋白是一种专性好氧的氧结合蛋白。目的:以VHb基因构建植物表达载体,并在大肠杆菌中实现表达。方法:使利用试剂盒提取透明颤菌血红蛋白的总DNA,以其为模板通过PCR克隆VHb基因。结果:克隆得到VHb基因片段的长度约为0.5kb,与NCBI上公布的VHb基因序列最大同源性达99%。结论:通过酶切鉴定及PCR检测,成功构建重组植物表达载体p3300-vhb-super promoter-Tnos。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白 vhb基因 植物表达载体 水花生
原文传递
透明颤菌血红蛋白在肉桂地链霉菌中的表达对其细胞生长及抗生素合成的影响 被引量:17
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作者 文莹 宋渊 李季伦 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期24-28,共5页
肉桂地链霉菌 (S .cinnamonensis)是莫能菌素 (Monensin)的产生菌。大肠杆菌 链霉菌穿梭表达载体pHZ12 5 2中的透明颤菌血红蛋白基因 (vhb)位于硫链丝菌素诱导启动子PtipA之下 ,它在肉桂地链霉菌中的结构不稳定 ,发生了重组缺失 ,缺失... 肉桂地链霉菌 (S .cinnamonensis)是莫能菌素 (Monensin)的产生菌。大肠杆菌 链霉菌穿梭表达载体pHZ12 5 2中的透明颤菌血红蛋白基因 (vhb)位于硫链丝菌素诱导启动子PtipA之下 ,它在肉桂地链霉菌中的结构不稳定 ,发生了重组缺失 ,缺失的片段包括大肠杆菌质粒部分和vhb基因。但来自阿维链霉菌 (S .avermitilis)中缺失了大肠杆菌质粒部分却保留了完整的vhb基因及tipA启动子的 pHZ12 5 2 ,可在肉桂地链霉菌中稳定复制 ,不再发生缺失 ,经硫链丝菌素诱导表达出了有生物活性的VHb蛋白。摇瓶发酵实验证明 ,VHb蛋白在氧限条件下可明显促进肉桂地链霉菌的菌体生长和抗生素合成。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白 肉桂地链霉菌 vhb基因表达 抗生素 合成
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灵芝品种优化——VHb基因转化灵芝 被引量:1
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作者 崔紫竞 杜鹃 +2 位作者 汪子淳 邱旭汶 林忠平 《生物技术世界》 2015年第8期241-243,共3页
灵芝(Ganoderma lucidium)作为一种重要的药用真菌,在我国传统医学中已有悠久的应用历史。古代对灵芝记载较为详细的书籍包括东汉成书的《神农本草经》,该书将灵芝分为赤、黄、青、白、蓝、黑、紫,皆列为药用上品。而关于灵芝滋补强壮... 灵芝(Ganoderma lucidium)作为一种重要的药用真菌,在我国传统医学中已有悠久的应用历史。古代对灵芝记载较为详细的书籍包括东汉成书的《神农本草经》,该书将灵芝分为赤、黄、青、白、蓝、黑、紫,皆列为药用上品。而关于灵芝滋补强壮作用的论述也可见于《本草纲目》等历代本草学著作中。VHb基因在供氧不足的条件下,能改善重组细胞的氧运输效率,满足细胞的呼吸要求,使之适应较低的溶氧水平,从而促进重组细胞的生长和一些代谢产物的合成。在本实验中VHb基因提高了氧气的利用率,间接提高了目标产物的产量。本研究利用根癌农杆菌介导的基因转化方法方法成功将透明颤藻VHb基因转化到灵芝细胞中,发现转基因灵芝生长及出菇明显加快,取得了较好的效果。 展开更多
关键词 灵芝品种 vhb基因转化
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