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抗人RBC A抗原50A株单抗可变区基因克隆及单链抗体基因构建 被引量：4
1
作者 王长军 唐家琪 +1 位作者 潘秀珍 李先富 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期69-72,共4页
目的：从分子水平分析抗人红细胞血型Ａ抗原单克隆抗体５０Ａ株，进而为制备新一代基因工程抗体的血型检定试剂奠定基础。方法：从杂交瘤细胞提取总ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增、克隆抗体的轻、重链可变区基因，用ＰＣＲ及双脱氧核苷酸... 目的：从分子水平分析抗人红细胞血型Ａ抗原单克隆抗体５０Ａ株，进而为制备新一代基因工程抗体的血型检定试剂奠定基础。方法：从杂交瘤细胞提取总ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增、克隆抗体的轻、重链可变区基因，用ＰＣＲ及双脱氧核苷酸链终止法分析其核苷酸序列，采用ＰＣＲ技术重叠延伸拼接法构建５０Ａ单抗单链抗体基因。结果：序列分析表明所克隆基因为抗体轻、重链可变区基因，５０ＡＶＨ隶属于小鼠Ｉｇ重链ⅡＢ亚组，是由ＶＨ－Ｄ－ＪＨ３基因重排产生；５０ＡＶＬ隶属于小鼠ＩｇＫａｐｐａ链Ⅱ亚组，Ｊｋ１基因重排。重叠延伸拼接法构建单链抗体基因简易可行。结论：所克隆基因含有正确的抗体框架结构，可作为研究基因工程血型检定抗体的目标基因。 展开更多
关键词 抗人RBCA抗原 vh/vl克隆 序列分析 单链抗体基因
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