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马氏珠母贝V-ATPase-d基因序列特征及其与耐低温性状的关系
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作者 赖卓欣 宋欣霖 +2 位作者 潘若哲 谭又瑄 王庆恒 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期85-98,共14页
液泡ATP酶(V-ATPase)在生物应对各种环境压力时发挥重要功能,为探究VATPase在马氏珠母贝低温适应过程中的作用,实验克隆了马氏珠母贝的V-ATPase-d基因,采用qRT-PCR技术研究了低温胁迫下Pm-V-ATPase-d表达量的变化,并筛选和比较了该基因... 液泡ATP酶(V-ATPase)在生物应对各种环境压力时发挥重要功能,为探究VATPase在马氏珠母贝低温适应过程中的作用,实验克隆了马氏珠母贝的V-ATPase-d基因,采用qRT-PCR技术研究了低温胁迫下Pm-V-ATPase-d表达量的变化,并筛选和比较了该基因在耐低温选育系(low temperature resistant line,R)F_(3)和北部湾野生群体(Beibu Gulf wild population,W)外显子区的SNP位点。结果显示,Pm-V-ATPase-d总长为1473 bp,开放阅读框(ORF)为1140bp,编码379个氨基酸,具有ATP典型的结构域PfamvATPsynt_AC39。Motif分析及三级结构预测结果表明,Pm-V-ATPase-d具有较高的保守性,其在系统进化树中与长牡蛎聚为一支。组织荧光定量结果显示,Pm-V-ATPase-d在所检测的组织中均有表达,在肝胰腺、性腺和鳃组织中表达量较高。在低温胁迫条件下,Pm-VATPase-d基因的表达量随着时间的延长呈现先上升后下降的趋势,且低温组的表达量在5 d内均显著高于对照组,这表明Pm-V-ATPase-d可能参与了马氏珠母贝对温度胁迫的响应;对Pm-V-ATPase-d外显子区的SNP分析共得到35个SNP,其中34个为同义突变,只有一个位点为非同义突变,26个SNP在W和R群体的不同基因型和等位基因之间具有显著差异,单倍型连锁不平衡分析结果显示,Pm-V-ATPase-d基因SNPs可形成6个单倍体块,14种单倍型,其中单倍型GAAT、CGC、TC、TG、AG与马氏珠母贝耐低温性状显著相关。研究表明,Pm-V-ATPase-d可能是参与调节马氏珠母贝低温适应过程中的候选基因,本研究可为马氏珠母贝对低温的适应机制提供研究基础,筛选出的与抗低温性状相关的SNPs及单倍型可应用于分子辅助育种。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 v-atpase-d基因 单核苷酸多态性 低温
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棉蚜V-ATPase-A基因RNAi载体的构建及其在转基因拟南芥的基因表达 被引量:2
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作者 张维 高朝宝 +2 位作者 尹秀 彭明 崔百明 《江苏农业科学》 北大核心 2013年第10期17-20,共4页
V-ATPase-A具有催化ATP水解的活性位点的功能,被确认为看家基因。通过构建蚜虫V-ATPase-A干扰载体,运用蘸花法转入拟南芥中,筛选出纯合子后进行转录水平的分析,再对取食相应转基因拟南芥的蚜虫体内V-ATPase-A基因进行表达分析。结果表明... V-ATPase-A具有催化ATP水解的活性位点的功能,被确认为看家基因。通过构建蚜虫V-ATPase-A干扰载体,运用蘸花法转入拟南芥中,筛选出纯合子后进行转录水平的分析,再对取食相应转基因拟南芥的蚜虫体内V-ATPase-A基因进行表达分析。结果表明,拟南芥上能成功表达dsRNA,而取食3个line的转基因拟南芥的蚜虫体内V-ATPase-A基因表达量是取食野生型拟南芥的17%、10%、4%,基因明显受到抑制,成功的干扰了蚜虫体内V-ATPase-A基因。 展开更多
关键词 RNA干扰 DSRNA 棉蚜 vatpase—A基因 基因
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褐飞虱V-ATPase d亚基基因的克隆与mRNA表达分析 被引量:2
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作者 朱友理 王剑 +2 位作者 谢志娟 刘亚萍 王建军 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期666-674,共9页
液泡型H+-ATPase(V-ATPase)在昆虫生长发育过程中具有重要作用。本文通过RT-PCR获得褐飞虱Nilaparvata lugens(Stl)V-ATPase d亚基基因NlVHA-d的cDNA序列,并通过实时荧光定量PCR对NlVHA-d基因的表达进行了分析。结果表明,NlVHA-d基因... 液泡型H+-ATPase(V-ATPase)在昆虫生长发育过程中具有重要作用。本文通过RT-PCR获得褐飞虱Nilaparvata lugens(Stl)V-ATPase d亚基基因NlVHA-d的cDNA序列,并通过实时荧光定量PCR对NlVHA-d基因的表达进行了分析。结果表明,NlVHA-d基因编码349个氨基酸,不同昆虫V-ATPase d亚基高度保守。NlVHA-d基因在褐飞虱2龄若虫中表达量最高,雌虫表达量显著高于雄虫表达量。LD10和LD30三唑磷处理的羽化3 d短翅雄虫NlVHA-d基因相对表达倍数分别是丙酮处理的2.15和2.46倍。亚致死剂量三唑磷处理褐飞虱短翅雄虫NlVHA-d基因的表达上调可能与褐飞虱再猖獗相关。 展开更多
关键词 褐飞虱 v-atpase基因 荧光定量PCR 亚致死剂量 三唑磷
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禾本科V-ATPase基因家族与全基因组加倍关联的适应性进化分析 被引量:1
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作者 卢宇婷 王金朋 +5 位作者 袁敏 肖月 孙金帅 李成栋 孔佑婷 王莉 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期1354-1361,共8页
V-ATPase在植物适应逆境中起着非常重要的作用,本研究以重要模式植物拟南芥V-ATPase相关基因为目标序列,通过在6个禾本科植物(水稻,大麦,玉米,高粱,谷子和二穗短柄草)基因组中进行比较分析,揭示该基因家族扩增机制和适应性进化进行研究... V-ATPase在植物适应逆境中起着非常重要的作用,本研究以重要模式植物拟南芥V-ATPase相关基因为目标序列,通过在6个禾本科植物(水稻,大麦,玉米,高粱,谷子和二穗短柄草)基因组中进行比较分析,揭示该基因家族扩增机制和适应性进化进行研究。分析发现,七个不同的植物基因组虽然经历了不同全基因组加倍,其中谷子与玉米加倍关联的基因数量最多,但V-ATPase基因数量在每个基因组非常相近,尤其是禾本科中玉米相对其它物种多一次单独的特异性加倍,然而这一基因家族数量并未增加,这表明全基因组加倍虽然在一定程度上使得家族基因扩增,但是基因丢失可能也维持了该基因组的剂量;对七个基因组中的161个V-ATPase基因进行motif分类确定,不同物种基因组中的motif结构不同,拟南芥和水稻中c-亚基相关的基因数量最多;系统发育分析发现,拟南芥基因和水稻基因进化相对较快,并且在拟南芥中这一基因家族有3个基因簇,它们与基因的串联重复加倍有关联;适应性进化分析揭示B-亚基相关的基因在进化过程中受正选择压力影响进化。 展开更多
关键词 禾本科 v-atpase基因 基因组加倍 系统发育分析 适应性进化
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V-ATPase基因家族调控SREBPs入核及功能的作用机制
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作者 张泽渊 邱璐 +9 位作者 何成诗 张荷兰 李妍 王丽 张富刚 谢忠祥 尹书 赵有亮 张丽华 曹鹏 《解剖学研究》 CAS 2020年第5期397-400,421,共5页
目的胆固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)是调控脂类代谢的重要转录因子,其与代谢性疾病密切相关。V-ATPase作为持家基因,通过全酶的聚集和解离调节酶的活性。目前尚未有关于V-ATPase及其所在通路调控SREBP的相关报道。方法构建基因重组质粒... 目的胆固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)是调控脂类代谢的重要转录因子,其与代谢性疾病密切相关。V-ATPase作为持家基因,通过全酶的聚集和解离调节酶的活性。目前尚未有关于V-ATPase及其所在通路调控SREBP的相关报道。方法构建基因重组质粒,PCR法扩增V-ATPase基因片段,并将其插入表达载体pcDNA3.1质粒,构建基因重组质粒pcDNA3.1-V-ATPase,将目的质粒pcDNA3.1-V-ATPase及对照质粒pcDNA3.1分别转染大鼠肾小球系膜细胞。采用WesternBlotting、q-PCR、荧光显微观察等方法研究V-ATPase和SREBPs的关系。结果发现V-ATPase功能缺失抑制大鼠肾小球系膜细胞脂肪积累,V-ATPase调控SREBP的功能具有保守性,V-ATPase调控SREBP-1的入核不依赖于泛素化降解,V-ATPase调控SREBP-1的核积累依赖于溶酶体的pH值。结论上述结果说明V-ATPase是新的调控SBP-1的基因。这为寻找新的调控SREBP的因子,并研究其调控脂质代谢的作用机制提供了依据。 展开更多
关键词 胆固醇调节元件结合蛋白 脂肪代谢 v-atpase持家基因
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