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卡他莫拉菌UspA1蛋白多克隆抗体的制备及鉴定
被引量：
9
1
作者
王辉
杨波
+8 位作者
赵可胜
李家吉
李新
孔萌萌
宫春杰
王毅
陶冶
张秋
胡征
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第1期102-109,共8页
为制备抗卡他莫拉菌(Moraxella catarrhalis,Mc)表面蛋白UspA1胞外结构域的多克隆抗体(PcAb),对UspA1蛋白进行生物信息学分析,获取胞外结构域中抗原表位最为丰富的肽段,找到其对应的基因序列并引入大肠杆菌偏好性密码子,对其优化后化学...
为制备抗卡他莫拉菌(Moraxella catarrhalis,Mc)表面蛋白UspA1胞外结构域的多克隆抗体(PcAb),对UspA1蛋白进行生物信息学分析,获取胞外结构域中抗原表位最为丰富的肽段,找到其对应的基因序列并引入大肠杆菌偏好性密码子,对其优化后化学合成全基因序列。将该基因序列按常规方法克隆入表达载体p ET-28a(+)后表达重组UspA1-His融合蛋白并纯化。以该纯化抗原免疫新西兰大白兔,经4次免疫后,用Protein A亲和层析柱从抗血清中纯化出抗UspA1-His融合蛋白PcAbIgG。经免疫荧光法、酶联免疫吸附法及Western blotting鉴定,抗UspA1-His融合蛋白PcAb能特异性识别UspA1蛋白的表面暴露区。该多抗的制备为下一步建立卡他莫拉菌快速检测技术奠定了基础。
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关键词
卡他莫拉菌
uspa
1
蛋白
原核表达
多克隆抗体
原文传递
人卡他莫拉单克隆抗体胶体金试纸的制备及初步应用
被引量：
2
2
作者
郝惠文
任萌
+4 位作者
宋慧茹
程雨洁
杨波
王毅
胡征
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2020年第6期634-637,641,共5页
目的制备抗UspA1蛋白单克隆抗体,研制能快速、灵敏、准确检测卡他莫拉菌的胶体金免疫层析试纸,以期用于人卡他莫拉菌的临床检测。方法将重组UspA1-His蛋白作为抗原,免疫小鼠,并制备单克隆抗体;通过Western blot技术以及免疫荧光技术鉴...
目的制备抗UspA1蛋白单克隆抗体,研制能快速、灵敏、准确检测卡他莫拉菌的胶体金免疫层析试纸,以期用于人卡他莫拉菌的临床检测。方法将重组UspA1-His蛋白作为抗原,免疫小鼠,并制备单克隆抗体;通过Western blot技术以及免疫荧光技术鉴定抗体的特异性;以双抗体夹心的原理研制胶体金免疫层析检测试纸条,并对其特异性、敏感性及稳定性进行评价分析。结果筛选出两株分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,经腹水制备纯化得到单克隆抗体,并验证了两种抗体均能特异性识别天然UspA1蛋白;利用双抗夹心原理制备的胶体金试纸能在10 min内快速检测卡他莫拉菌,检测灵敏度高(1×10~5 CFU/ml)、特异性强,与其他常见9种的呼吸道病原菌诸如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎支原体、嗜肺军团菌等无交叉反应;试纸条在37℃保存有良好的重复性和稳定性;200份临床样品检测结果与平板培养法的阳性符合率为93.3%。结论本研究制备了特异性强的抗UspA1蛋白单克隆抗体;以此研制的胶体金免疫层析试纸可快速、简便、灵敏的检测卡他莫拉菌,适用于呼吸道感染的临床快速检测。
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关键词
卡他莫拉菌
单克隆抗体
uspa
1
蛋白
胶体金免疫层析法
原文传递
题名
卡他莫拉菌UspA1蛋白多克隆抗体的制备及鉴定
被引量：
9
1
作者
王辉
杨波
赵可胜
李家吉
李新
孔萌萌
宫春杰
王毅
陶冶
张秋
胡征
机构
湖北工业大学生物工程与食品学院发酵工程教育部重点实验室
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第1期102-109,共8页
基金
湖北华龙生物制药有限公司资助~~
文摘
为制备抗卡他莫拉菌(Moraxella catarrhalis,Mc)表面蛋白UspA1胞外结构域的多克隆抗体(PcAb),对UspA1蛋白进行生物信息学分析,获取胞外结构域中抗原表位最为丰富的肽段,找到其对应的基因序列并引入大肠杆菌偏好性密码子,对其优化后化学合成全基因序列。将该基因序列按常规方法克隆入表达载体p ET-28a(+)后表达重组UspA1-His融合蛋白并纯化。以该纯化抗原免疫新西兰大白兔,经4次免疫后,用Protein A亲和层析柱从抗血清中纯化出抗UspA1-His融合蛋白PcAbIgG。经免疫荧光法、酶联免疫吸附法及Western blotting鉴定,抗UspA1-His融合蛋白PcAb能特异性识别UspA1蛋白的表面暴露区。该多抗的制备为下一步建立卡他莫拉菌快速检测技术奠定了基础。
关键词
卡他莫拉菌
uspa
1
蛋白
原核表达
多克隆抗体
Keywords
Moraxella catarrhalis,
uspa
1
, prokaryotic expression, polyclonal antibodies
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
原文传递
题名
人卡他莫拉单克隆抗体胶体金试纸的制备及初步应用
被引量：
2
2
作者
郝惠文
任萌
宋慧茹
程雨洁
杨波
王毅
胡征
机构
湖北工业大学生物工程与食品学院发酵工程教育部重点实验室(湖北工业大学
出处
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2020年第6期634-637,641,共5页
基金
细胞调控与分子药物"111"引智基地青年学者国际合作研究基金项目(No.XBTK-2018005)。
文摘
目的制备抗UspA1蛋白单克隆抗体,研制能快速、灵敏、准确检测卡他莫拉菌的胶体金免疫层析试纸,以期用于人卡他莫拉菌的临床检测。方法将重组UspA1-His蛋白作为抗原,免疫小鼠,并制备单克隆抗体;通过Western blot技术以及免疫荧光技术鉴定抗体的特异性;以双抗体夹心的原理研制胶体金免疫层析检测试纸条,并对其特异性、敏感性及稳定性进行评价分析。结果筛选出两株分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,经腹水制备纯化得到单克隆抗体,并验证了两种抗体均能特异性识别天然UspA1蛋白;利用双抗夹心原理制备的胶体金试纸能在10 min内快速检测卡他莫拉菌,检测灵敏度高(1×10~5 CFU/ml)、特异性强,与其他常见9种的呼吸道病原菌诸如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎支原体、嗜肺军团菌等无交叉反应;试纸条在37℃保存有良好的重复性和稳定性;200份临床样品检测结果与平板培养法的阳性符合率为93.3%。结论本研究制备了特异性强的抗UspA1蛋白单克隆抗体;以此研制的胶体金免疫层析试纸可快速、简便、灵敏的检测卡他莫拉菌,适用于呼吸道感染的临床快速检测。
关键词
卡他莫拉菌
单克隆抗体
uspa
1
蛋白
胶体金免疫层析法
Keywords
Moraxella catarrhalis
monoclonal antibody
uspa
1
colloidal gold immunochromatography
分类号
R378.1 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
卡他莫拉菌UspA1蛋白多克隆抗体的制备及鉴定
王辉
杨波
赵可胜
李家吉
李新
孔萌萌
宫春杰
王毅
陶冶
张秋
胡征
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
9
原文传递
2
人卡他莫拉单克隆抗体胶体金试纸的制备及初步应用
郝惠文
任萌
宋慧茹
程雨洁
杨波
王毅
胡征
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2020
2
原文传递
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