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细胞外基质刚度通过FAK/ROCK-1/YAP通路调控尿道成纤维细胞活化 被引量：2
1
作者 陈烨辉 陈佳茵 +7 位作者 朱君明 陈航 柯志滨 林菲 薛学义 魏勇 郑清水 许宁 《中华实验外科杂志》 CAS 北大核心 2022年第3期500-502,共3页
目的探讨基质刚度对尿道成纤维细胞(UFBs)活化的影响及其机制。方法2020年6月至2021年2月从福建医科大学附属第一医院泌尿外科手术患者获得的尿道瘢痕组织中提取原代UFBs;用聚二甲基矽氧烷分别以60∶1(Soft)、40∶1(Moderate)、30∶1(St... 目的探讨基质刚度对尿道成纤维细胞(UFBs)活化的影响及其机制。方法2020年6月至2021年2月从福建医科大学附属第一医院泌尿外科手术患者获得的尿道瘢痕组织中提取原代UFBs;用聚二甲基矽氧烷分别以60∶1(Soft)、40∶1(Moderate)、30∶1(Stiff)的比例加入固化剂,制备不同刚度的基质凝胶,将UFBs接种其上培养。倒置显微镜观察在不同刚度基质凝胶上生长的UFBs形态学特点;蛋白质印迹法(Western blot)检测UFBs活化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白(collagenⅢ)表达水平;进一步检测FAK/ROCK-1/YAP通路标志蛋白表达水平,并观察整合素抑制剂Cilengtide(20 ng/ml)对其影响,探索基质刚度是否通过此通路影响UFBs活化;采用方差分析和独立样本t检验比较组间差异。结果随着基质凝胶刚度的增加,接种其上的UFBs形态由椭圆形转变为偏梭形,细胞伪足增长、增多;Soft、Moderate、Stiff组UFBs的α-SMA相对表达量分别为(0.140±0.004、0.815±0.030和1.385±0.051,F=989.247,P<0.05);collagenⅠ相对表达量分别为(0.138±0.004、0.947±0.021和1.263±0.028,F=2415.159,P<0.05);collagenⅢ相对表达量分别为(0.284±0.005、1.089±0.017和1.374±0.038,F=1661.310,P<0.05),均随基质刚度增加而升高;Stiff组中UFBs的p-FAK(1.282±0.029比0.430±0.009,t=48.262,P<0.05)、ROCK-1(1.366±0.111比0.474±0.034,t=13.300,P<0.05)和YAP(1.272±0.020比0.908±0.007,t=30.254,P<0.05)表达水平均显著高于Soft组,而p-YAP(0.589±0.006比1.028±0.008,t=-74.860,P<0.05)表达水平显著低于Soft组;在加入整合素抑制剂Cilengtide后,基质刚度增加引起的p-FAK、ROCK-1、YAP和p-YAP表达改变均减弱。结论细胞外基质刚度通过整合素介导的FAK/ROCK-1/YAP通路调控人尿道成纤维细胞活化。 展开更多
关键词 尿道成纤维细胞 FAK/ROCK-1/YAP通路 尿道狭窄
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法舒地尔对TGF-β诱导尿道成纤维细胞增殖、迁移以及胞外基质合成的影响
2
作者 冯欢 黄小兵 +3 位作者 付卫华 朱景振 李佳 杨凤霞 《局解手术学杂志》 2021年第6期463-468,共6页
目的探究法舒地尔对TGF-β诱导尿道成纤维细胞增殖、迁移以及胞外基质合成的影响。方法无菌条件下获得家兔尿道瘢痕组织,采用酶解法提取原代尿道成纤维细胞,用10 ng/mL TGF-β或者联合不同浓度(0,25,50μM)法舒地尔处理后,通过Western b... 目的探究法舒地尔对TGF-β诱导尿道成纤维细胞增殖、迁移以及胞外基质合成的影响。方法无菌条件下获得家兔尿道瘢痕组织,采用酶解法提取原代尿道成纤维细胞,用10 ng/mL TGF-β或者联合不同浓度(0,25,50μM)法舒地尔处理后,通过Western blot检测α-SMA、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ和自噬以及迁移相关蛋白的表达。采用Transwell实验和MTT实验分别检测成纤维细胞迁移以及增殖能力。结果Western blot结果显示,TGF-β明显上调了α-SMA蛋白、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ,法舒地尔下调了胞外基质蛋白表达(P<0.05),并且呈浓度依赖性。Transwell实验和MTT实验显示,TGF-β增加了细胞迁移数量和细胞活性(P<0.05),而法舒地尔抑制了细胞迁移数量(P<0.05),下调了细胞活性(P<0.05)。Western blot结果还显示,TGF-β显著下调了pAKT、pmTOR和p62等蛋白表达(P<0.05),上调了ATG7、ATG5、LC3等自噬相关蛋白表达(P<0.05);而法舒地尔上调了pAKT、pmTOR和p62等蛋白表达(P<0.05),抑制了ATG7、ATG5、LC3等自噬相关蛋白表达(P<0.05)。结论法舒地尔可以通过激活细胞自噬从而抑制TGF-β诱导的成纤维细胞增殖、迁移以及胞外基质合成,其作用与促进AKT/mTOR信号通路相关。 展开更多
关键词 法舒地尔 尿道成纤维细胞 TGF-Β 自噬 尿道狭窄
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姜黄素对尿道瘢痕成纤维细胞的放疗增敏作用及其机制 被引量：3
3
作者 邓骞 田永峰 +4 位作者 段万里 陈鑫 潘思源 任伟 杜春 《重庆医学》 CAS 2022年第2期181-186,共6页
目的探讨姜黄素对尿道瘢痕成纤维细胞的放疗增敏作用及其机制。方法体外原代培养人尿道瘢痕成纤维细胞,CCK-8实验及平板克隆实验确定合适的姜黄素实验浓度及放疗剂量,平板克隆实验明确姜黄素的放疗增敏作用。流式细胞仪检测细胞周期分布... 目的探讨姜黄素对尿道瘢痕成纤维细胞的放疗增敏作用及其机制。方法体外原代培养人尿道瘢痕成纤维细胞,CCK-8实验及平板克隆实验确定合适的姜黄素实验浓度及放疗剂量,平板克隆实验明确姜黄素的放疗增敏作用。流式细胞仪检测细胞周期分布,TUNEL法检测细胞凋亡情况,Western blot检测Ⅰ型胶原蛋白及Ⅲ型胶原蛋白表达,分析转化生长因子β1(TGF-β1)通路的作用。结果姜黄素对体外培养的尿道瘢痕成纤维细胞具有放疗增敏作用(SER=2.030)。与对照组相比,20μmol/L姜黄素组S期、5 Gy放疗组G2/M期细胞比例大幅度增加(P<0.001),姜黄素和放疗联合处理后,G2/M期细胞比例进一步增加,而S期细胞比例则处于二者之间。对照组、20μmol/L姜黄素组、5 Gy放疗组、20μmol/L姜黄素+5 Gy放疗组细胞凋亡比例分别为(6.54±1.01)%、(16.17±2.28)%、(12.88±2.06)%、(24.92±2.65)%,20μmol/L姜黄素+5 Gy放疗组明显高于其他3组(P<0.001)。20μmol/L姜黄素+5 Gy放疗组细胞中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白和TGF-β1表达水平明显低于对照组(P<0.001),经TGF-β1处理过的细胞Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白合成增加(P<0.001)。结论姜黄素对体外培养的尿道瘢痕成纤维细胞具有放疗增敏作用,能促进细胞凋亡并阻滞细胞于G2/M期,同时通过TGF-β1通路抑制细胞Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的合成。 展开更多
关键词 姜黄素 放疗 尿道瘢痕成纤维细胞 增殖 胶原合成 转化生长因子Β1
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紫杉醇对大鼠尿道成纤维细胞增殖和胶原生成的影响
4
作者 翟晓强 张刚 +3 位作者 付德来 李和程 李建平 种铁 《现代泌尿外科杂志》 CAS 2015年第8期580-583,共4页
目的探讨紫杉醇对大鼠尿道成纤维细胞增殖和胶原生成的影响。方法组织块接种法培养大鼠尿道成纤维细胞。以不同浓度紫杉醇(0、5、10、20、40、80mg/L)处理尿道成纤维细胞,MTT法检测成纤维细胞增殖能力,羟脯氨酸法检测培养液中成纤维细... 目的探讨紫杉醇对大鼠尿道成纤维细胞增殖和胶原生成的影响。方法组织块接种法培养大鼠尿道成纤维细胞。以不同浓度紫杉醇(0、5、10、20、40、80mg/L)处理尿道成纤维细胞,MTT法检测成纤维细胞增殖能力,羟脯氨酸法检测培养液中成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原生成,RT-PCR检测成纤维细胞中TGF-β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TIMP-1等mRNA表达水平。结果与对照组相比,实验组不同浓度紫杉醇均对成纤维细胞的增殖有抑制作用。各组间细胞抑制率差异有统计学意义(P<0.05)。紫杉醇浓度越高,抑制作用越强。实验组培养液中胶原浓度、每十万细胞胶原浓度比对照组显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组尿道成纤维细胞TGF-β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和TIMP-1的mRNA表达量均低于对照组(P<0.05)。结论紫杉醇可抑制大鼠尿道成纤维细胞增殖、胶原生成以及细胞中TGF-β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和TIMP-1的mRNA表达,紫杉醇在预防、治疗尿道狭窄形成中的作用值得进一步研究。 展开更多
关键词 紫杉醇 尿道狭窄 成纤维细胞 瘢痕
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