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宏转录组测序揭示褐土脲酶基因的表达丰度和细菌来源
被引量：
2
1
作者
胡利伟
轩贝贝
+9 位作者
戴华鑫
郭建华
牟文君
刘阳
翟振
闫鼎
蔡宪杰
奚家勤
薛超群
宋纪真
《烟草科技》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2020年第11期7-14,共8页
为明确褐土中脲酶编码基因的表达丰度,通过土壤RNA提取和宏转录组测序法,筛选RNA水平上表达较高的脲酶基因,共筛选到122个脲酶结构基因(93个ureC、16个ureB和13个ureA)和脲酶辅助基因115个(29个ureD、12个ureE、36个ureF、29个ureG、5个...
为明确褐土中脲酶编码基因的表达丰度,通过土壤RNA提取和宏转录组测序法,筛选RNA水平上表达较高的脲酶基因,共筛选到122个脲酶结构基因(93个ureC、16个ureB和13个ureA)和脲酶辅助基因115个(29个ureD、12个ureE、36个ureF、29个ureG、5个ureH和4个ureJ)。其中ureB、ureA、ureG、ureH和ureJ所有转录本TPM值都小于2,而ureC、ureD、ureE和ureF丰度最高的转录本TPM值分别为3.17、5.37、2.01和2.71。细菌来源的芽孢杆菌属Bacillus、芽孢八叠球菌属Sporosarcina、节杆菌属Arthrobacter、链霉属Streptomyces和类芽孢杆菌属Paenibacillus等在褐土脲酶活性的发挥中贡献度较大。
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关键词
褐土
宏转录组测序
脲酶结构基因
脲酶辅助基因
细菌
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职称材料
细菌脲酶蛋白复合物UreABC的表达与纯化
2
作者
李晓姣
王加启
+1 位作者
赵圣国
程建波
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2021年第3期14-20,共7页
细菌脲酶能分解尿素为氨,在瘤胃尿素氮代谢中发挥重要作用。为了表达纯化并研究蛋白脲酶复合物UreABC,通过PCR扩增脲酶基因簇的结构基因ureA、ureB、ureC,将ureB构建在含有N端His标签的pet28a+载体,ureA、ureC基因共同构建在含有N端His...
细菌脲酶能分解尿素为氨,在瘤胃尿素氮代谢中发挥重要作用。为了表达纯化并研究蛋白脲酶复合物UreABC,通过PCR扩增脲酶基因簇的结构基因ureA、ureB、ureC,将ureB构建在含有N端His标签的pet28a+载体,ureA、ureC基因共同构建在含有N端His标签的表达载体pETDuet-1,经酶切及测序鉴定得到正确的阳性克隆后,将两个质粒共同转化到大肠埃希菌BL21感受态细胞,利用IPTG诱导表达UreABC融合蛋白。采用SDS-PAGE凝胶电泳对蛋白表达进行鉴定,再通过蛋白纯化仪的镍柱、脱盐柱、分子筛纯化目的蛋白。结果显示,成功构建了两个原核表达载体pET28a-ureB、pET-ureC&A,脲酶基因ureA、ureB、ureC片段大小分别为313、315、1701 bp,以可溶性形式表达脲酶蛋白复合物,并通过纯化得到约240 kD的蛋白。通过脲酶活性测定试验发现,镍离子可以体外激活脲酶蛋白。通过原核表达系统成功表达和纯化了具有活性的脲酶蛋白,为研究蛋白结构以及其与辅助蛋白互作提供参考。
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关键词
细菌脲酶
脲酶结构基因
蛋白表达
蛋白纯化
脲酶活性
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职称材料
题名
宏转录组测序揭示褐土脲酶基因的表达丰度和细菌来源
被引量：
2
1
作者
胡利伟
轩贝贝
戴华鑫
郭建华
牟文君
刘阳
翟振
闫鼎
蔡宪杰
奚家勤
薛超群
宋纪真
机构
中国烟草总公司郑州烟草研究院
上海烟草集团有限责任公司采购中心
出处
《烟草科技》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2020年第11期7-14,共8页
基金
河南省自然科学基金资助项目“基于宏基因组和宏转录组学研究褐土脲酶群落构成与抑制效应分析”(122018AS0020)
河南省自然科学基金资助项目“小麦-土壤系统中邻苯二甲酸酯的污染特征及植株响应分子机制研究”(112018AS0030)
国家自然科学基金资助-青年科学基金项目“青枯病菌对氟啶胺的抗性机制研究”(122018AZ0330)。
文摘
为明确褐土中脲酶编码基因的表达丰度,通过土壤RNA提取和宏转录组测序法,筛选RNA水平上表达较高的脲酶基因,共筛选到122个脲酶结构基因(93个ureC、16个ureB和13个ureA)和脲酶辅助基因115个(29个ureD、12个ureE、36个ureF、29个ureG、5个ureH和4个ureJ)。其中ureB、ureA、ureG、ureH和ureJ所有转录本TPM值都小于2,而ureC、ureD、ureE和ureF丰度最高的转录本TPM值分别为3.17、5.37、2.01和2.71。细菌来源的芽孢杆菌属Bacillus、芽孢八叠球菌属Sporosarcina、节杆菌属Arthrobacter、链霉属Streptomyces和类芽孢杆菌属Paenibacillus等在褐土脲酶活性的发挥中贡献度较大。
关键词
褐土
宏转录组测序
脲酶结构基因
脲酶辅助基因
细菌
Keywords
Cinnamon
soil
Metatranscriptomic
sequencing
urease
structural
gene
urease
accessory
gene
Microbe
分类号
TS414 [农业科学—烟草工业]
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职称材料
题名
细菌脲酶蛋白复合物UreABC的表达与纯化
2
作者
李晓姣
王加启
赵圣国
程建波
机构
安徽农业大学动物科技学院
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室
太原市畜牧发展中心
出处
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2021年第3期14-20,共7页
基金
中国农业科学院农业科技创新工程重大产出科研选题项目(CAAS-ZDXT2019004)
国家重点研发计划项目(2018YFD0502000)
+1 种基金
中国农业科学院科技创新工程项目(ASTIP-IAS12)
现代农业产业技术体系专项资金资助项目(CARS-37)。
文摘
细菌脲酶能分解尿素为氨,在瘤胃尿素氮代谢中发挥重要作用。为了表达纯化并研究蛋白脲酶复合物UreABC,通过PCR扩增脲酶基因簇的结构基因ureA、ureB、ureC,将ureB构建在含有N端His标签的pet28a+载体,ureA、ureC基因共同构建在含有N端His标签的表达载体pETDuet-1,经酶切及测序鉴定得到正确的阳性克隆后,将两个质粒共同转化到大肠埃希菌BL21感受态细胞,利用IPTG诱导表达UreABC融合蛋白。采用SDS-PAGE凝胶电泳对蛋白表达进行鉴定,再通过蛋白纯化仪的镍柱、脱盐柱、分子筛纯化目的蛋白。结果显示,成功构建了两个原核表达载体pET28a-ureB、pET-ureC&A,脲酶基因ureA、ureB、ureC片段大小分别为313、315、1701 bp,以可溶性形式表达脲酶蛋白复合物,并通过纯化得到约240 kD的蛋白。通过脲酶活性测定试验发现,镍离子可以体外激活脲酶蛋白。通过原核表达系统成功表达和纯化了具有活性的脲酶蛋白,为研究蛋白结构以及其与辅助蛋白互作提供参考。
关键词
细菌脲酶
脲酶结构基因
蛋白表达
蛋白纯化
脲酶活性
Keywords
bacterial
urease
urease
structural
gene
protein
expression
protein
purification
urease
activity
分类号
Q939.96 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
宏转录组测序揭示褐土脲酶基因的表达丰度和细菌来源
胡利伟
轩贝贝
戴华鑫
郭建华
牟文君
刘阳
翟振
闫鼎
蔡宪杰
奚家勤
薛超群
宋纪真
《烟草科技》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2020
2
下载PDF
职称材料
2
细菌脲酶蛋白复合物UreABC的表达与纯化
李晓姣
王加启
赵圣国
程建波
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2021
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
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