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白纹伊蚊紫外光敏感视蛋白基因的克隆及序列特征
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作者 郭秀霞 程鹏 +4 位作者 刘丽娟 王海防 张崇星 王怀位 公茂庆 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS 北大核心 2021年第5期553-559,共7页
目的克隆白纹伊蚊紫外光敏感视蛋白(UV-opsin)基因,分析该基因编码蛋白的序列特征,为研究视蛋白基因的生物学功能提供分子基础。方法根据已报道蚊虫的UV-opsin的保守序列设计简并引物,通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增白纹伊蚊的U... 目的克隆白纹伊蚊紫外光敏感视蛋白(UV-opsin)基因,分析该基因编码蛋白的序列特征,为研究视蛋白基因的生物学功能提供分子基础。方法根据已报道蚊虫的UV-opsin的保守序列设计简并引物,通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增白纹伊蚊的UV-opsin基因,纯化PCR产物,经Eco RⅠ酶和XhoⅠ酶酶切,酶切产物连接至pET28a(+)载体构建原核表达质粒,阳性重组质粒经PCR鉴定后进行基因测序,利用Expasy、Protparam、Tmpred及ScanProsite等软件进行编码蛋白的结构特征分析及功能预测,利用Clustal X 1.81和MEGA 6.0软件进行序列同源性分析,构建系统进化树。结果成功获得白纹伊蚊UV-opsin的cDNA序列。序列分析表明,该序列全长为1 146 bp(含终止密码子),编码381个氨基酸,理论蛋白相对分子质量为42 500,等电点为7.06。与白纹伊蚊(XP029730343)序列同源性为99.74%,与埃及伊蚊(ABF18478)序列同源性为96.85%。构建系统进化树发现不同属、不同目的昆虫为独立分支,伊蚊属与库蚊属聚成一簇,之后与按蚊属合并。该视蛋白具有7个跨膜拓扑结构,含有1个G蛋白偶联受体位点,4个N-豆蔻酰化位点、3个N-糖基化位点、1个酪氨酸激酶磷酸化位点、3个蛋白激酶C磷酸化位点以及2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点。该视蛋白含有保守的LRTPSN、DRY和QAKK基序,为视蛋白发挥作用的重要基序。结论成功克隆获得了白纹伊蚊的UV-opsin序列,该序列具有典型的视蛋白结构特征,为进一步研究白纹伊蚊视蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 白纹伊蚊 紫外光敏感视蛋白 基因克隆 序列分析
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韭菜迟眼蕈蚊紫外敏感视蛋白基因的克隆及光强度对其表达量影响 被引量：3
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作者 安立娜 范凡 +3 位作者 杨小凡 李梦瑶 刘小侠 魏国树 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期971-979,共9页
为明确韭菜迟眼蕈蚊Bradysia odoriphaga紫外敏感视蛋白基因Bo-uv的作用及其与趋光性的关系,利用常规PCR方法克隆获得Bo-uv基因的全长cDNA序列,分析了其敏感视蛋白的氨基酸序列与其它12种昆虫同源蛋白氨基酸序列之间的系统进化关系,运用... 为明确韭菜迟眼蕈蚊Bradysia odoriphaga紫外敏感视蛋白基因Bo-uv的作用及其与趋光性的关系,利用常规PCR方法克隆获得Bo-uv基因的全长cDNA序列,分析了其敏感视蛋白的氨基酸序列与其它12种昆虫同源蛋白氨基酸序列之间的系统进化关系,运用qPCR技术检测了不同发育阶段、不同组织及不同光强度下Bo-uv基因的相对表达量。结果表明,Bo-uv基因cDNA全长2 757 bp,开放阅读框1 542 bp,编码514个氨基酸。韭菜迟眼蕈蚊紫外敏感视蛋白的氨基酸序列与其它12种昆虫同源蛋白的氨基酸序列一致性为21.93%~43.00%,与橘小实蝇Bactrocera dorsalis的氨基酸序列同源性最高。Bo-uv基因在韭菜迟眼蕈蚊蛹末期、成虫期表达,在成虫头部的相对表达量较高。在0~10 000 lx光强范围内雌、雄成虫体内该基因的相对表达量均呈先增高后降低趋势。与对照相比,1 000 lx光强度下其相对表达量显著升高,10 000 lx时相对表达量显著降低。表明光强度能够有效地调控Bo-uv基因的表达,该基因在韭菜迟眼蕈蚊感知外界光刺激过程中具有重要作用。 展开更多
关键词 韭菜迟眼蕈蚊 紫外敏感视蛋白基因(uv) 克隆 趋光性 光强
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