增强CT联合血清ESM1、UCHL1对非小细胞肺癌靶向治疗的疗效评估分析

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作者 刘远红 吴雪健 +1 位作者 刘华 雷蕾 《中国CT和MRI杂志》 2024年第7期50-52,共3页

目的探究增强CT联合血清内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)、泛素羧基末端水解酶L1(UCHL1)评估非小细胞肺癌(NSCLC)靶向治疗疗效。方法选取我院2020年3月-2022年10月收治的112例NSCLC患者为研究对象(NSCLC组),均进行盐酸厄洛替尼片治疗,另选... 目的探究增强CT联合血清内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)、泛素羧基末端水解酶L1(UCHL1)评估非小细胞肺癌(NSCLC)靶向治疗疗效。方法选取我院2020年3月-2022年10月收治的112例NSCLC患者为研究对象(NSCLC组),均进行盐酸厄洛替尼片治疗,另选取同期在我院行健康体检者112例为对照组。酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清ESM1、UCHL1水平;比较NSCLC患者治疗前后及不同治疗效果NSCLC患者血清ESM-1、UCHL1水平及增强CT参数;评估增强CT联合血清ESM-1、UCHL1对NSCLC靶向治疗疗效。结果靶向治疗后总有效61例,总有效率54.46%,无效51例,无效率45.54%;NSCLC组患者血清ESM-1、UCHL1水平均显著高于对照组(P<0.05);NSCLC患者治疗后,血清ESM-1、UCHL1水平及灌注值均显著降低(P<0.05),PH、M/A、Tp差异无统计学意义(P>0.05);治疗前后,总有效组NSCLC患者血清ESM-1、UCHL1水平均显著低于无效组(P<0.05),治疗前总有效组与无效组灌注值与PH差异无统计学意义(P>0.05),治疗后总有效组灌注值与PH均降低(P<0.05),无效组灌注值与PH均升高(P<0.05);一致性结果显示,灌注值与PH判定结果与实体瘤疗效评价具有较高的一致性(Kappa=0.677、0.624,P均<0.001);灌注值联合血清ESM-1、UCHL1及PH联合血清ESM-1、UCHL1评估靶向治疗疗效的敏感度分别为91.80%、86.89%,特异度为92.16%、86.27%,准确度为91.96%、86.61%,均显著高于增强CT、血清ESM-1、UCHL1单独检测(P<0.05)。结论通过增强CT联合血清ESM-1、UCHL1有助于评估靶向治疗的疗效,可指导临床制定和调整进一步诊治方案。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 增强CT ESM-1 uchl1

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UCHL1调控NF-κB信号通路在单核细胞驯化免疫中的作用

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作者 王洪民 马子涵 +2 位作者 潘雅颖 高晓明 龚方苑 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期637-645,共9页

目的探究去泛素化酶在单核细胞驯化免疫中的作用及机制。方法Q-PCR检测单核细胞驯化免疫中去泛素化酶相关基因的表达情况;ELISA法检测去泛素化酶对驯化的单核细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响;双荧光素酶报告基因检测系统测... 目的探究去泛素化酶在单核细胞驯化免疫中的作用及机制。方法Q-PCR检测单核细胞驯化免疫中去泛素化酶相关基因的表达情况;ELISA法检测去泛素化酶对驯化的单核细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响;双荧光素酶报告基因检测系统测定去泛素化酶对NF-κB信号通路的影响。双荧光素酶报告基因检测系统测定:UCHL1对NF-κB信号通路的影响、UCHL1与NF-κB信号通路关键信号分子之间的作用及UCHL1影响NF-κB信号通路所依赖的酶活性;ELISA法检测UCHL1对单核细胞驯化作用中TNF-α分泌水平的影响。结果去泛素化酶USP2、UCHL1、OTUB2和OTUD4在单核细胞驯化免疫中的表达量明显升高;去泛素化酶抑制剂可明显抑制驯化单核细胞中TNF-α的分泌水平;USP2、UCHL1、OTUB2、PSMD14等可明显激活NF-κB信号通路,通过上述实验筛选出对NF-κB影响最为明显的UCHL1进行后续研究。UCHL1的表达明显影响NF-κB信号通路的激活;UCHL1的表达促进了由IκB-α、IKK-α或IKK-β介导的NF-κB的激活;UCHL1主要通过其泛素水解酶活性调控NF-κB信号通路;UCHL1抑制剂可明显减弱单核细胞的驯化作用。结论自身免疫病中免疫复合物可以驯化单核细胞增强其敏感性,这种作用可通过UCHL1调节NF-κB信号通路的激活实现。 展开更多

关键词 去泛素化酶 uchl1 单核细胞 驯化免疫 NF-ΚB 自身免疫病

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Uchl1及其关联蛋白参与小鼠实验性隐睾中精母细胞凋亡(英文) 被引量：4

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作者 杜平 姚余卫 +4 位作者 石燕 顾正 王健 孙兆贵 左嘉客 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期528-536,共9页

以往研究显示Uchl1参与调节生理状况下小鼠精母细胞的凋亡。本文以小鼠实验性单侧隐睾为研究模型,以切除单侧睾丸和假手术作为对照,用苏木精-伊红(HE)染色和DNA末端标记(TUNEL)观察生精细胞的形态和凋亡情况;用免疫组化分析Uchl1及其相... 以往研究显示Uchl1参与调节生理状况下小鼠精母细胞的凋亡。本文以小鼠实验性单侧隐睾为研究模型,以切除单侧睾丸和假手术作为对照,用苏木精-伊红(HE)染色和DNA末端标记(TUNEL)观察生精细胞的形态和凋亡情况;用免疫组化分析Uchl1及其相关蛋白Jab1和p27kip1在隐睾症的热应激反应导致精母细胞损失过程中的变化情况,并用亲和分析(pull-down)和免疫荧光共定位检测三种蛋白在精母细胞的关联性。结果显示,Jab1和p27kip1,与Uch1平行,在具凋亡形态的精母细胞中响应热应激而含量增加,而在多核巨细胞中无类似变化。Jab1可以与睾丸蛋白提取物中Uchl1结合,并与Uchl1和p27kip1特异性地在具凋亡形态的精母细胞中共定位。以上结果提示,Uchl1蛋白的积累参与隐睾中热应激诱导的生精细胞凋亡过程,但不影响接下来的多核巨细胞的形成,且Uchl1蛋白的作用机制涉及Jab1和p27kip1参与的一种新途径。 展开更多

关键词 细胞凋亡 隐睾 热应激反应 精母细胞 uchl1

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肺癌组织UCHL1高表达与不良预后相关 被引量：1

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作者 阿布都色麦尔·热依木 戴京京 +1 位作者 邢应如 周武碧 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1366-1372,共7页

目的:探讨泛素C末端水解酶L1(UCHL1)在肺癌组织中的表达及其与预后的关系。方法:Oncomine数据库筛选UCHL1基因在肺癌中的表达;STRING数据库构建UCHL1互作网络并进行富集分析;GEPIA数据库和免疫组化分析肺癌及癌旁组织UCHL1蛋白的表达;Ka... 目的:探讨泛素C末端水解酶L1(UCHL1)在肺癌组织中的表达及其与预后的关系。方法:Oncomine数据库筛选UCHL1基因在肺癌中的表达;STRING数据库构建UCHL1互作网络并进行富集分析;GEPIA数据库和免疫组化分析肺癌及癌旁组织UCHL1蛋白的表达;Kaplan Meier-Plotter分析UCHL1和相关蛋白与患者总生存率(OS)的关系;χ^(2)检验分析UCHL1表达与肺癌患者临床特征的相关性;Cox回归模型预测肺癌患者OS的危险因子。结果:Oncomine数据库研究表明UCHL1在肺癌中显著性上调;STRING数据库筛选出与UCHL1互作得分前10的蛋白;UCHL1及相关蛋白主要富集于蛋白去泛素化、宿主细胞成分、泛素蛋白连接酶结合和泛素介导的蛋白质水解通路;UCHL1及相关蛋白(UCHL3、SNCA)在肺癌中存在差异表达;UCHL1低表达患者的OS明显增高,SNCA低表达患者的OS降低;UCHL1表达与患者性别和病理分期显著相关;UCHL1表达和N分期是肺癌患者OS的独立危险因素。结论:UCHL1在肺癌组织中表达上调并与肺癌患者不良预后相关,有可能成为肺癌患者治疗以及判断预后的分子靶点。 展开更多

关键词 uchl1 肺癌 总生存率 生物信息学

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UCHL1基因多态性中的S18Y异构体与年龄相关性白内障发病机制的相关性（英文） 被引量：3

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作者 李帅杰 徐国旭 冯柯红 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2019年第10期1633-1636,共4页

目的:研究泛素羧基末端酯酶L1(UCHL1)的基因多态性异构体S18Y在年龄相关性白内障发病机制中的作用。方法:采用病例对照研究的方法,使用聚合酶链式反应(PCR)分别扩增白内障组(242例)和正常人组(144例)血液中UCHL1基因,测序后分析S18Y异... 目的:研究泛素羧基末端酯酶L1(UCHL1)的基因多态性异构体S18Y在年龄相关性白内障发病机制中的作用。方法:采用病例对照研究的方法,使用聚合酶链式反应(PCR)分别扩增白内障组(242例)和正常人组(144例)血液中UCHL1基因,测序后分析S18Y异构体的基因频率。结果:UCHL1-S18Y的基因多态性在等位基因(P=0.746)和基因型频率(P=0.813)上没有统计学差异;二元Logistic回归模型分析显示年龄在两组间具有统计学意义(P<0.001),将年龄和性别作为混杂因子校正后计算UCHL1的S18Y等位基因中(腺嘌呤)A-携带者的OR比值比和95%置信区间(95%CI),结果显示(腺嘌呤)A-携带者在两组间无统计学差异(P=0.818)。结论:本研究提示UCHL1-S18Y的基因多态性在年龄相关性白内障发生发展过程中没有起到显著作用或者保护作用。 展开更多

关键词 白内障 泛素羧基末端酯酶L1 泛素 S18Y 异构体

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泛素碳端水解酶L1在邻苯二甲酸二丁酯诱导大鼠睾丸发育异常中的表达变化 被引量：2

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作者 徐子程 沈百欣 +2 位作者 马隆 沈华 张炜 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2008年第8期680-684,共5页

目的：利用邻苯二甲酸二丁酯（DBP）诱导大鼠睾丸发育异常，验证泛素碳端水解酶L1（UCHL1）在异常睾丸与正常大鼠睾丸中的差异表达，以进一步探讨UCHL1在DBP导致的大鼠睾丸发育异常中的作用机制。方法：孕SD大鼠40只，妊娠14～18d，随... 目的：利用邻苯二甲酸二丁酯（DBP）诱导大鼠睾丸发育异常，验证泛素碳端水解酶L1（UCHL1）在异常睾丸与正常大鼠睾丸中的差异表达，以进一步探讨UCHL1在DBP导致的大鼠睾丸发育异常中的作用机制。方法：孕SD大鼠40只，妊娠14～18d，随机分为2组，实验组和对照组分别予DBP800mg／（kg·d）、大豆油5ml／d灌胃，孕期第19d（GD19）和出生后22d（PND22），分别取胎鼠及仔鼠睾丸，定量定位分析UCHL1在胎鼠及仔鼠睾丸中的表达变化。结果：GD19，UCHL1在实验组的相对表达量为0．075±0．02（n=10），对照组为0．150±0．02（n=10），2组差异有显著性（P〈0．05），UCHL1在实验组中比正常对照组下降50％；而PND22，UCHL1于实验组隐睾睾丸中的相对表达量为0．344±0．03（n=10），实验组非隐睾睾丸中为0．326±0．02（n=10），对照组为0．322±0．02（n=10），3组间无明显统计学差异（P〉0．05）。UCHL1主要定位于睾丸发育时期的精原细胞，初级精母细胞和次级精母细胞的胞质与胞核中。结论：DBP在染毒期间影响了睾丸生精细胞UCHL1的表达，影响了泛素-蛋白酶体系的平衡，从而导致生精小管的变薄，各层生精细胞数目减少的睾丸发育异常现象。 展开更多

关键词 邻苯二甲酸二丁酯 泛素碳端水解酶L1 隐睾 精原细胞 大鼠

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氧化应激调节泛素羧基末端酯酶L1在人晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞株中的表达 被引量：1

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作者 李帅杰 王慧 +3 位作者 翟红艳 徐涛涛 黄江 徐国旭 《安徽医药》 CAS 2011年第3期331-333,共3页

目的在梯度过氧化氢叔丁醇(tert-butyl hydroperoxide,TBHB)氧化应激情况下,研究泛素羧基末端酯酶L1(ubiquitin car-boxyl-terminal hydrolase L1,UCHL1)和波形蛋白(Vimentin)在人晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞株中表达趋势。方法将SRA0... 目的在梯度过氧化氢叔丁醇(tert-butyl hydroperoxide,TBHB)氧化应激情况下,研究泛素羧基末端酯酶L1(ubiquitin car-boxyl-terminal hydrolase L1,UCHL1)和波形蛋白(Vimentin)在人晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞株中表达趋势。方法将SRA01/04细胞分为对照组和梯度处理实验组共四组,使用0.10、.5和1 mol.L-1过氧化氢叔丁醇(tert-butyl hydroperoxide,TB-HB)处理人晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞03,,6和12 h,采用RT-PCR检测UCHL1和Vimentin在不同时间点的表达情况。结果在0.5 mol.L-1TBHP作用下,UCHL1在SRA01/04细胞中的表达在3 h时降低,6 h时升高,而在12 h时降低;而Vimen-tin在不同浓度TBHP处理的各个时间点表达均无变化(该实验独立重复三次)。结论氧化应激调节UCHL1在人晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞株中的表达,提示UCHL1可能在维持细胞内环境稳定和氧化应激中起重要作用。 展开更多

关键词 氧化损伤 RT-PCR uchl1 VIMENTIN 泛素

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25例喉淋巴瘤的临床病理分析 被引量：2

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作者 朱莉 王纾宜 +1 位作者 郑斯馨 吴韵芳 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期130-131,共2页

一、材料和方法材料源于本院病理科自１９８０～１９９７年活检档案中经组织学诊断为喉淋巴瘤的病例，共２５例，全部标本经４％甲醛固定，常规石蜡包埋，ＨＥ染色；同时，２４例标本采用ＳＰ法行免疫组化标记：白细胞共同抗原（ＬＣＡ... 一、材料和方法材料源于本院病理科自１９８０～１９９７年活检档案中经组织学诊断为喉淋巴瘤的病例，共２５例，全部标本经４％甲醛固定，常规石蜡包埋，ＨＥ染色；同时，２４例标本采用ＳＰ法行免疫组化标记：白细胞共同抗原（ＬＣＡ），Ｔ细胞抗原ＵＣＨＬ１，Ｂ细胞抗... 展开更多

关键词 喉淋巴瘤 病理 LCA uchl1

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泛素羧基末端水解酶-1(UCHL1)的分子进化分析

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作者 张瑜 孙兆贵 《生物信息学》 2017年第4期207-213,共7页

泛素羧基末端水解酶-1(ubiquitin C-terminal hydrolase L1,UCHL1)是一种去泛素化酶,特异性表达于脑与生殖腺,具有去泛素化活性、稳定细胞内泛素单体的功能。为确定UCHL1在脊椎动物中是否普遍存在,从而选择身体构造更简单的模式动物研... 泛素羧基末端水解酶-1(ubiquitin C-terminal hydrolase L1,UCHL1)是一种去泛素化酶,特异性表达于脑与生殖腺,具有去泛素化活性、稳定细胞内泛素单体的功能。为确定UCHL1在脊椎动物中是否普遍存在,从而选择身体构造更简单的模式动物研究其生物学功能,通过生物信息学手段分析脊椎动物门的11种生物中基因UCHL1的分子进化情况,分析显示UCHL1基因组长度在进化过程中变化较大,但外显子个数变化较小,蛋白氨基酸残基数目也基本维持在223 aa左右。分析结果表明,mRNA有不同的剪接方式,但氨基酸序列在进化上是高度保守的,UCHL1蛋白活性位点同源性高达90%,该结果证明了蛋白UCHL1的功能对于物种正常生存是必须的。 展开更多

关键词 uchl1 去泛素化 进化 保守性 同源性

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UCHL1基因缺失突变A549肿瘤细胞单克隆株的建立与特性分析

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作者 张瑜 石燕 +4 位作者 松迪 张璇 郁琳 何亚萍 孙兆贵 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期184-192,共9页

本研究旨在探索泛素羧基末端水解酶L1(ubiquitin C-terminal hydrolase-L1,UCHL1)对非小细胞肺癌细胞系A549细胞的作用。用CRISPR-CAS9基因编辑技术构建UCHL1基因敲除的A549细胞株,用RT-PCR和Western blot检测A549细胞中UCHL1基因敲除情... 本研究旨在探索泛素羧基末端水解酶L1(ubiquitin C-terminal hydrolase-L1,UCHL1)对非小细胞肺癌细胞系A549细胞的作用。用CRISPR-CAS9基因编辑技术构建UCHL1基因敲除的A549细胞株,用RT-PCR和Western blot检测A549细胞中UCHL1基因敲除情况,用CCK-8检测细胞增殖能力的变化,用流式细胞仪检测细胞周期的变化,用CCK-8检测A549细胞对顺铂药物敏感性的改变,用划痕与Transwell实验检测A549细胞迁移能力的变化,用Western blot检测与A549细胞迁移有关的蛋白表达变化。结果显示,使用CRISPR-CAS9技术构建的基因移码突变导致A549细胞株UCHL1 mRNA和蛋白缺失,UCHL1基因功能缺失后A549细胞增殖和各细胞周期比例没有明显变化,但对顺铂的药物敏感性降低,迁移能力下降,Erk1/2蛋白磷酸化水平升高。以上结果提示,UCHL1基因功能缺失可导致A549细胞顺铂耐药性提高,细胞迁移能力降低,其机制可能涉及Erk1/2信号通路的激活。 展开更多

关键词 uchl1 CRISPR-CAS9 非小细胞肺癌 耐药性 迁移

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5-杂氮-2'-脱氧胞苷调控UCHL1基因表达对人前列腺癌PC-3细胞增殖及凋亡的影响 被引量：1

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作者 李俊枫 罗子国 +1 位作者 丁璇 唐溧 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期107-109,共3页

目的:探讨5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人前列腺癌细胞(PC-3)株增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法以2.5、5.0、10.0μmol/L的5-Aza-CdR作用于PC-3细胞48h后,采用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)... 目的:探讨5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人前列腺癌细胞(PC-3)株增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法以2.5、5.0、10.0μmol/L的5-Aza-CdR作用于PC-3细胞48h后,采用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测UCHL1 mRNA表达;甲基化测序聚合酶链反应(BSP)检测UCHL1 CpG岛的甲基化状态;蛋白质印迹法(Western Blot)检测UCHL1蛋白的表达。结果:5-Aza-CdR对PC-3细胞生长有抑制作用;与对照组相比细胞凋亡率明显增高(P<0.01);5-Aza-CdR处理细胞后UCHL1的启动子甲基化水平明显降低(P<0.01);UCHL1 mRNA表达水平显著上调(P<0.01);UCHL1蛋白表达水平上升(P<0.01)。结论:5-Aza-CdR能诱导前列腺癌PC-3细胞株凋亡的作用,其机制可能是5-Aza-CdR能逆转PC-3细胞UCHL1启动子CpG岛的异常甲基化,诱导mRNA转录和蛋白的表达。 展开更多

关键词 5-杂氮-2’-脱氧胞苷 uchl1 甲基化

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移植肾BCL-2及UCHL1的表达及临床意义 被引量：1

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作者 陈光富 李炎唐 +2 位作者 赵海潞 肖序仁 洪宝发 《中华器官移植杂志》 CAS CSCD 1999年第1期30-32,共3页

目的探讨细胞凋亡与排斥反应、ＢＣＬ２及ＵＣＨＬ１表达之间的关系。方法收集１０例手术切除的无功能移植肾病理标本作为实验组，相应的移植术前活检组织作为对照组。采用免疫组织化学染色技术观测ＢＣＬ２及ＵＣＨＬ１在移植肾的... 目的探讨细胞凋亡与排斥反应、ＢＣＬ２及ＵＣＨＬ１表达之间的关系。方法收集１０例手术切除的无功能移植肾病理标本作为实验组，相应的移植术前活检组织作为对照组。采用免疫组织化学染色技术观测ＢＣＬ２及ＵＣＨＬ１在移植肾的表达，并观察其组织切片的形态学变化。结果对照组５０％以上的肾小管细胞ＢＣＬ２呈阳性表达，实验组ＢＣＬ２的表达明显减少（Ｐ＜０．０１），尤其是当发生急性排斥反应时；ＵＣＨＬ１的表达，对照组表达ＵＣＨＬ１的Ｔ细胞很少，而实验组的阳性表达细胞呈多灶性或成片（Ｐ＜０．０１）。凋亡细胞呈现核固缩、核破裂，或出现凋亡小体等。凋亡细胞最常见于肾小管。结论观测细胞凋亡、ＵＣＨＬ１及ＢＣＬ２的表达可作为肾移植术后监测的重要指标。 展开更多

关键词 肾移植 细胞凋亡 排斥反应 BCL-2 uchl1

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去泛素化酶UCHL1促进乳腺癌化疗耐药作用与机制研究 被引量：1

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作者 缪祥 顾玉婷 张雁云 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期455-461,共7页

本研究探讨去泛素化酶UCHL1通过影响肿瘤细胞主动外排药物和乳腺癌肿瘤干细胞(breast cancer stem cell,BCSC)调控乳腺癌化疗耐药的作用及机制。比较肿瘤细胞MCF-7及其阿霉素耐药株MCF-7/ADM的UCHL1表达差异,以抑制剂LDN57444干预MCF-7/... 本研究探讨去泛素化酶UCHL1通过影响肿瘤细胞主动外排药物和乳腺癌肿瘤干细胞(breast cancer stem cell,BCSC)调控乳腺癌化疗耐药的作用及机制。比较肿瘤细胞MCF-7及其阿霉素耐药株MCF-7/ADM的UCHL1表达差异,以抑制剂LDN57444干预MCF-7/ADM的UCHL1功能,检测MCF-7/ADM的半数抑制浓度,流式细胞术检测ADM在细胞内的积聚和CD44+CD24-BCSC比例,微球体形成实验观察BCSC干性,real-time PCR和western blotting检测药泵蛋白和干细胞相关基因的表达。结果显示,MCF-7/ADM高表达UCHL1,抑制UCHL1后MCF-7/ADM的半数抑制浓度显著下降,药泵蛋白P-gp和MRP1表达下调且药物在细胞内的聚积增加,MCF-7/ADM中CD44+CD24-BCSC比例、微球体形成能力及干细胞相关基因表达均显著下降。以上结果说明UCHL1可促进乳腺癌细胞耐药性形成,主要通过改变药泵蛋白介导的经典耐药机制实现,并与促进BCSC干性密切相关。 展开更多

关键词 uchl1 化疗耐药 药物外排 BCSC

全文增补中

野生型和C279G突变型UCHL1基因真核表达质粒构建

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作者 巴茂文 刘振国 +3 位作者 倪培华 陈生弟 李琳 陆国强 《上海第二医科大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第5期455-458,共4页

目的构建人野生型和C279G突变型pEGFP-N1-UCHL1质粒。方法采用RT-PCR方法从人胚脑组织中扩增出人泛素羧基末端水解酶1(UCHL1)基因,插入至pMD18Tvector中;再采用SOE法定点突变,通过酶切和连接,构建野生型和C279G突变型pEGFP-N1UCHL1。结... 目的构建人野生型和C279G突变型pEGFP-N1-UCHL1质粒。方法采用RT-PCR方法从人胚脑组织中扩增出人泛素羧基末端水解酶1(UCHL1)基因,插入至pMD18Tvector中;再采用SOE法定点突变,通过酶切和连接,构建野生型和C279G突变型pEGFP-N1UCHL1。结果酶切和DNA测序证实,野生型和突变型UCHL1基因分别插入到pEGFP-N1中,野生型UCHL1基因序列与GenBank完全一致,C279G突变型UCHL1基因除第279位碱基C被G替代以外,其余序列与野生型完全一致。结论成功构建野生型和C279G突变型UCHL1基因真核表达质粒。 展开更多

关键词 uchl1 突变型 基因真核表达 质粒构建 RT-PCR方法 真核表达质粒 L1基因 DNA测序 人野生型 羧基末端 胚脑组织 定点突变 基因序列 水解酶 SOE 基因分 插入 酶切

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运用双向电泳技术探索恶性胸膜间皮瘤潜在的肿瘤标志物研究

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作者 果然 贾葆青 +1 位作者 刘彦恒 龚云波 《中国医师杂志》 CAS 2016年第S1期66-67,共2页

目的：利用双向凝胶电泳技术通过对恶性胸膜间皮瘤细胞株 H2052和肺腺癌细胞株 PC9胞浆内蛋白质进行差异蛋白质组学分析，为恶性胸膜间皮瘤与肺腺癌的鉴别诊断提供候选肿瘤标志物。方法利用双向凝胶电泳技术和基质辅助激光解吸电离飞行... 目的：利用双向凝胶电泳技术通过对恶性胸膜间皮瘤细胞株 H2052和肺腺癌细胞株 PC9胞浆内蛋白质进行差异蛋白质组学分析，为恶性胸膜间皮瘤与肺腺癌的鉴别诊断提供候选肿瘤标志物。方法利用双向凝胶电泳技术和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOF-MS）技术筛选鉴定出恶性胸膜间皮瘤细胞株 H2052和肺腺癌细胞株 PC9胞浆内的差异蛋白质，再运用免疫组化染色方法验证被标识的差异蛋白质在12例恶性胸膜间皮瘤组织标本及19例低分化腺癌组织标本的表达情况。结果运用蛋白质组学技术标识并筛选出15种差异蛋白，经过免疫组化染色方法验证，结果有3种蛋白质在恶性胸膜间皮瘤中高表达且有统计学意义。结论 Rab GDP Dissociation Inhibitorβ、Septin11、UCHL1可能成为鉴别恶性胸膜间皮瘤与低分化肺腺癌细胞的新的靶点，它们在间皮瘤细胞分化、增殖中起到关键的作用，进一步的研究可能为将来的靶向治疗提供新的靶点。 展开更多

关键词 蛋白质组学 恶性胸膜间皮瘤 低分化肺腺癌 RAB GDP DISSOCIATION Inhibitorβ Septin11 uchl1

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UCHL1通过调控肿瘤微环境糖酵解代谢促进肺腺癌细胞增殖和转移

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作者 李爱科 林萍萍 +5 位作者 赵继伟 郭研 张立广 李富博 董怡 杜新生 《现代肿瘤医学》 CAS 2024年第16期2975-2981,共7页

目的:探讨泛素羧基末端水解酶L1(ubiquitin C-terminal hydrolase-L1,UCHL1)通过调控缺氧诱导因子1(hypoxia-inducible factor 1,HIF-1)介导的代谢重编程促进肺腺癌细胞的增殖和转移。方法:免疫组化和实时定量聚合酶链反应检测肺腺癌组... 目的:探讨泛素羧基末端水解酶L1(ubiquitin C-terminal hydrolase-L1,UCHL1)通过调控缺氧诱导因子1(hypoxia-inducible factor 1,HIF-1)介导的代谢重编程促进肺腺癌细胞的增殖和转移。方法:免疫组化和实时定量聚合酶链反应检测肺腺癌组织和细胞中UCHL1和HIF-1的表达;Kaplan-Meier Plotter和UALCAN数据库分析了UCHL1和HIF-1的表达量与患者生存期的关联,并进一步分析了二者在不同临床病理等级以及淋巴转移患者肿瘤组织中的表达;克隆形成、迁移和侵袭评估肺腺癌HCC4006细胞转染UCHL1 siRNA后恶性生物学行为变化;Western Blot检测沉默UCHL1后肿瘤细胞糖酵解信号通路IL-6/STAT3标志分子的表达。结果:免疫组化、实时定量聚合酶链反应以及相关性分析,结果显示肺腺癌组织和细胞中UCHL1和HIF-1的表达较癌旁组织和正常人支气管上皮细胞中显著增加,且二者表达水平呈正相关(P<0.01),与Oncomine数据库中UCHL1和HIF-1的表达趋势相一致。生信分析结果显示,UCHL1和HIF-1异常高表达与肺腺癌患者的生存期呈负相关、而与患者的病理等级和淋巴结转移呈正相关(P<0.01)。转染UCHL1 siRNA的肺腺癌HCC4006细胞的克隆形成、迁移和侵袭能力较对照组细胞显著降低,同时细胞的耗氧量显著增加,并抑制细胞中LDH活性和LD分泌(P<0.01)。Western Blot结果显示,沉默UCHL1可抑制HIF-1表达,并降低缺氧介导的肿瘤细胞糖酵解信号通路IL-6/STAT3标志分子的表达(P<0.01)。结论:肺腺癌细胞通过UCHL1-HIF-1轴介导的代谢重编程获得较强的增殖和转移表型,为靶向该基因网络的治疗提供了理论依据。 展开更多

关键词 肺腺癌 泛素羧基末端水解酶L1 糖酵解 增殖 转移

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抑制UCHL1对猪卵母细胞体外成熟、透明带泛素化及多精入卵的影响 被引量：3

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作者 史文姝 金一 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第12期3563-3569,共7页

试验旨在研究抑制泛素羧基末端水解酶-1(UCHL1)对猪卵母细胞体外成熟、透明带泛素化及多精入卵的影响。利用DAPI染色、Hoechst染色及SDS-PAGE等方法检测猪卵母细胞体外成熟率、透明带泛素化水平及多精入卵等情况。结果表明,添加不同浓度... 试验旨在研究抑制泛素羧基末端水解酶-1(UCHL1)对猪卵母细胞体外成熟、透明带泛素化及多精入卵的影响。利用DAPI染色、Hoechst染色及SDS-PAGE等方法检测猪卵母细胞体外成熟率、透明带泛素化水平及多精入卵等情况。结果表明,添加不同浓度UCHL1抑制剂(10、20、25、30μmol/L,二甲基亚砜(DMSO)及对照组)体外培养猪卵母细胞46h后,对照组成熟率为86.22%,而30μmol/L UCHL1抑制剂组的成熟率为15.30%,且各处理组间成熟率差异显著(P<0.05);经Western blotting检测,各处理组的透明带在约61、80、106ku处均发生不同程度的泛素标记,通过灰度值分析差异显著(P<0.05);进行体外受精试验后,发现对照组透明带精子黏附数最多,精子入卵数较少,添加30μmol/L UCHL1抑制剂组的透明带精子黏附数最少,几乎没有精子入卵。结果显示,UCHL1抑制剂对猪卵母细胞的体外成熟有一定影响,随着UCHL1抑制剂浓度的增加,透明带发生泛素化的程度逐渐降低,且UCHL1可调节透明带精子黏附及多精入卵。 展开更多

关键词 猪卵母细胞 uchl1抑制剂 体外成熟 透明带泛素化 多精入卵

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UCHL1⁃AS1/miR⁃629轴调控食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的调控机制 被引量：1

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作者 王佳 许红英 +1 位作者 高峰 严士海 《分子诊断与治疗杂志》 2022年第12期2192-2197,共6页

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)反义泛素C端水解酶L1(UCHL1⁃AS1)介导miR⁃629对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法选取33例于2019年3月至2020年2月在南京中医药大学附属医院收治的食管癌患者的癌组织及对应癌旁组织,RT⁃qPCR... 目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)反义泛素C端水解酶L1(UCHL1⁃AS1)介导miR⁃629对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法选取33例于2019年3月至2020年2月在南京中医药大学附属医院收治的食管癌患者的癌组织及对应癌旁组织,RT⁃qPCR检测组织UCHL1⁃AS1表达。Eca⁃109细胞分为pcDN3.1⁃UCHL1⁃AS1组、pcDN3.1组、anti⁃miR⁃629组、anti⁃miR⁃NC组、pcDN3.1⁃UCHL1⁃AS1+anti⁃miR⁃NC和pcDN3.1⁃UCHL1⁃AS1+anti⁃miR⁃629组。RT⁃qPCR检测细胞UCHL1⁃AS1和miR⁃629水平,MTT检测细胞存活率,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western Blot检测细胞增殖核抗原67(Ki67)、上皮型钙黏蛋白(E⁃cadherin)和神经型钙粘素(N⁃cadherin)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR⁃629与UCHL1⁃AS1调控关系。结果食管癌组织UCHL1⁃AS1表达低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。pcDN3.1⁃UCHL1⁃AS1组Eca⁃109细胞存活率、迁移和侵袭数及Ki67和N⁃cadherin蛋白表达均低于pcDN3.1组,E⁃cadherin蛋白表达高于pcDN3.1组,差异有统计学意义(P<0.05)。anti⁃miR⁃629组Eca⁃109细胞存活率、迁移和侵袭数及Ki67和N⁃cadherin蛋白表达均低于anti⁃miR⁃NC组,E⁃cadherin蛋白表达高于anti⁃miR⁃NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。共转染WT⁃UCHL1⁃AS1与miR⁃629 mimics的细胞荧光素酶活性低于WT⁃UCHL1⁃AS1与miR⁃NC,差异有统计学意义(P<0.05);共转染MUT⁃UCHL1⁃AS1与miR⁃629 mimics、MUT⁃UCHL1⁃AS1与miR⁃NC细胞荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05);与pcDN3.1组比较,pcDN3.1⁃UCHL1⁃AS1组Eca⁃109细胞中UCHL1⁃AS1表达水平升高,miR⁃629表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。pcDN3.1⁃UCHL1⁃AS1+anti⁃miR⁃629组Eca⁃109细胞存活率、迁移和侵袭数及Ki67和N⁃cadherin蛋白表达均低于pcDN3.1⁃UCHL1⁃AS1+anti⁃miR⁃NC组,E⁃cadherin蛋白表达高于pcDN3.1⁃UCHL1⁃AS1+anti⁃miR⁃NC组,差异有统计学意义(P<0.05 展开更多

关键词 食管癌 uchl1⁃AS1 miR⁃629 细胞增殖 细胞迁移 细胞侵袭

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不同年龄条件下泛素羧基端水解酶-L1基因多态与帕金森病发病的相关性研究

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作者 郝怡鑫 张建荣 +3 位作者 徐德安 郭品娥 贺铮雯 沈茜 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期311-314,共4页

目的探讨不同年龄条件下泛素羧基端水解酶-L1基因(UCH-L1)第3外显子丝氨酸/酪氨酸(C/A)多态、第4外显子丝氨酸/苯丙氨酸(C/T)多态与帕金森病发病风险间的关系。方法采用聚合酶链式反应限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP),在164例帕金... 目的探讨不同年龄条件下泛素羧基端水解酶-L1基因(UCH-L1)第3外显子丝氨酸/酪氨酸(C/A)多态、第4外显子丝氨酸/苯丙氨酸(C/T)多态与帕金森病发病风险间的关系。方法采用聚合酶链式反应限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP),在164例帕金森病患者和172例健康对照中观察UCH-L1基因C/A和C/T多态的分布,并通过比数比(OR)进行相关分析。结果帕金森病组中UCH-L1第3外显子的C等位基因频率(62.2%)明显高于对照组(51.7%)(OR=1.534,P=0.006),CC基因型频率(36.6%)亦明显高于对照组(23.3%)(OR=1.904,P=0.008),而且这种正相关主要存在于≥60岁的帕金森病患者中(OR=2.689,P=0.002)。帕金森病组中UCH-L1第4外显子C/T多态等位基因和基因型频率的分布与对照组比较无显著差异,进行年龄分层后该基因多态在两组人群中的分布差异仍无统计学意义。结论UCH-L1第3外显子C等位基因可能是老年人帕金森病发病的危险因子,而第4外显子C/T多态则与帕金森病发病无关。 展开更多

关键词 帕金森病 多态性 单核苷酸 uchl1蛋白 人

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泛素羧基末端酯酶L1启动子区甲基化在食管癌变过程中的作用 被引量：1

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作者 闫文姬 郭明洲 杨云生 《中华内科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期390-393,共4页

目的 探讨泛素羧基末端酯酶L1（UCHL1）启动子区甲基化与食管癌发生的关系。 方法 采用甲基化特异性PCR、半定量RT-PCR和Western blot技术在食管癌细胞系中分析UCHL1启动子区甲基化与其基因表达的关系，并应用甲基化抑制剂5-杂氮-2′-... 目的 探讨泛素羧基末端酯酶L1（UCHL1）启动子区甲基化与食管癌发生的关系。 方法 采用甲基化特异性PCR、半定量RT-PCR和Western blot技术在食管癌细胞系中分析UCHL1启动子区甲基化与其基因表达的关系，并应用甲基化抑制剂5-杂氮-2′-脱氧胞苷（5-Aza）处理食管癌细胞系，探讨UCHL1表达是否受甲基化的调控。同时检测了51例原发食管癌的UCHL1启动子区甲基化情况。 结果 8株食管癌细胞系（KYSE30、KYSE150、KYSE140、KYSE450、KYSE510、TE3、TE7、TE10）的UCHL1启动子区完全甲基化。其中7株细胞系（KYSE30、KYSE150、KYSE140、KYSE450、KYSE510、TE3、TE7）UCHL1表达缺失，TE10细胞系表达降低。5-Aza 处理后KYSE150、TE3细胞系UCHL1恢复表达。51例原发食管癌组织标本中,UCHL1启动子区甲基化率为74.51%（38/51），而在10例正常食管黏膜组织中UCHL1启动子区均未甲基化。UCHL1启动子区甲基化与食管癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、临床病理分期、淋巴结转移等均无明显相关性。 结论 UCHL1基因启动子区甲基化在食管癌患者中普遍存在，UCHL1基因表达受启动子区甲基化调控。UCHL1基因甲基化在食管癌发生发展中可能起着重要作用。 展开更多

关键词 食管肿瘤 DNA甲基化 uchl1基因 甲基化特异性PCR

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