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甲基转移酶PRMT5稳定USP15促进乳腺癌发生发展的作用
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作者 金珊 高杰 +3 位作者 谢玉姣 展垚 杜甜甜 王传新 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2023年第7期1-11,共11页
目的 探讨蛋白精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)通过甲基化作用,修饰并上调泛素特异性蛋白酶15(USP15)的蛋白水平,从而促进乳腺癌发生发展的作用。方法 采用基因表达谱交互分析(GEPIA2)在线数据库和Kaplan-Meier Plotter生存曲线分析,分析PRMT... 目的 探讨蛋白精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)通过甲基化作用,修饰并上调泛素特异性蛋白酶15(USP15)的蛋白水平,从而促进乳腺癌发生发展的作用。方法 采用基因表达谱交互分析(GEPIA2)在线数据库和Kaplan-Meier Plotter生存曲线分析,分析PRMT5在肿瘤组织和正常组织中的表达差异,及其与乳腺癌患者临床预后的关系。采用免疫亲和纯化及银染联合质谱分析得到与PRMT5结合的蛋白。通过慢病毒稳转技术在MCF-7细胞中过表达或敲低PRMT5,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western blotting)技术检测细胞内相关蛋白的表达。质粒或小干扰RNA(siRNA)转染技术敲低或过表达USP15,qRT-PCR及Western blotting技术检测细胞内相关蛋白表达,采用细胞活性实验(CCK8)、克隆形成和Transwell实验检测其对乳腺癌细胞增殖与侵袭能力的影响。利用EPZ015666(GSK3235025)小分子抑制剂抑制PRMT5甲基转移酶活性后,采用Western blotting技术检测细胞内相关蛋白的变化,采用CCK8和Transwell实验检测其对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响。结果 生物信息学分析结果显示,PRMT5在乳腺癌患者中高表达并与乳腺癌患者不良预后相关。免疫亲和纯化及银染联合质谱分析并通过免疫共沉淀(Co-IP)实验验证,发现PRMT5与USP15存在相互结合。在乳腺癌细胞MCF-7中,过表达FLAG-PRMT5后,通过Western blotting和qRT-PCR实验检测,发现USP15的蛋白水平明显增加,而不影响USP15的mRNA水平;敲低PRMT5表达后,USP15的蛋白水平降低,而mRNA水平未发生改变。在MCF-7细胞中,过表达Myc-USP15明显降低FBXW7的mRNA及蛋白水平,细胞功能实验结果显示,细胞的增殖和侵袭能力增加,敲低USP15则结果相反。Western blotting和细胞功能实验结果显示,EPZ015666抑制PRMT5的甲基转移酶活性后,可通过降低USP15的蛋白水平降低细胞的增殖和侵袭能力。结论 乳腺癌细胞中PRMT5与USP15相互结合,并以甲基� 展开更多
关键词 乳腺癌 PRMT5蛋白 usp15蛋白 FBXW7蛋白 增殖 上皮-间质转化
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