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适用于镰刀菌基因敲除和荧光融合蛋白表达的高效通用载体的构建
被引量：
2
1
作者
王晓亮
张昊
+3 位作者
潘逸
许景升
徐进
冯洁
《植物保护》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期106-112,共7页
本文通过使用USER酶克隆技术,构建一系列用于镰刀菌基因敲除和荧光融合蛋白表达,并且操作简单快速的通用载体。在hph基因两侧引入USER酶特异位点,构建了基因敲除载体pKH-KO,可以一步在hph的两侧同时插入上下游同源重组片段;在gfp基因5...
本文通过使用USER酶克隆技术,构建一系列用于镰刀菌基因敲除和荧光融合蛋白表达,并且操作简单快速的通用载体。在hph基因两侧引入USER酶特异位点,构建了基因敲除载体pKH-KO,可以一步在hph的两侧同时插入上下游同源重组片段;在gfp基因5′端引入USER位点构建了荧光融合蛋白表达载体pKHGFPE和pKNGFPE。此方法构建的载体在插入目的片段时均不用考虑酶切位点,极大地方便了试验设计,并且步骤简单,操作简便,节约大量时间。在大规模进行基因敲除以及相关蛋白定位等基因功能研究上具有广阔的应用前景。
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关键词
镰刀菌
基因功能
载体构建
user
酶
下载PDF
职称材料
一步法快速构建长片段RNAi发夹的载体
2
作者
刘廷利
郭冬姝
+1 位作者
姚瑶
张保龙
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2021年第5期1131-1136,共6页
利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术可以进行基因功能研究以及作物遗传改良,但常规构建RNAi载体方法费时费力。本研究报道了一种基于USER酶一步法快速构建RNAi发夹结构的载体2301/RNAi/OS及其应用方法,操作简便,省时省力。与已报...
利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术可以进行基因功能研究以及作物遗传改良,但常规构建RNAi载体方法费时费力。本研究报道了一种基于USER酶一步法快速构建RNAi发夹结构的载体2301/RNAi/OS及其应用方法,操作简便,省时省力。与已报道的利用酶切连接、Gateway兼容的同源重组或PCR直接连接等构建RNAi载体相比,该载体不需要酶切片段,片段扩增完成后即可与制备好的线性化载体进行反应,缩短操作流程和时间,提高成功率;该载体对插入片段的酶切位点和长度没有要求,理论上任何位置和长度的片段均可进入2301/RNAi/OS载体中,尤其是长片段RNAi的构建。本试验以本氏烟(Nicotiana benthamiana)PDS(Phytoene desaturase)基因为例,利用农杆菌介导的瞬时表达体系验证了该RNAi能够在植物体内有效地实现基因沉默。该载体以新霉素磷酸转移酶基因(NPTII)作为筛选标记基因,可以利用卡那霉素(Kanamycin)和G418(Geneticin)等抗生素筛选转基因阳性植株,适合单子叶和双子叶植物的遗传转化。
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关键词
RNA干扰(RNAI)
user
酶
一步法
载体构建
基因沉默
下载PDF
职称材料
题名
适用于镰刀菌基因敲除和荧光融合蛋白表达的高效通用载体的构建
被引量：
2
1
作者
王晓亮
张昊
潘逸
许景升
徐进
冯洁
机构
中国农业科学院植物保护研究所、植物病虫害生物学国家重点实验室
出处
《植物保护》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期106-112,共7页
基金
国家自然科学基金项目(31201477)
国家国际合作专项(2013DFG31930)
公益性行业(农业)科研专项(201303016)
文摘
本文通过使用USER酶克隆技术,构建一系列用于镰刀菌基因敲除和荧光融合蛋白表达,并且操作简单快速的通用载体。在hph基因两侧引入USER酶特异位点,构建了基因敲除载体pKH-KO,可以一步在hph的两侧同时插入上下游同源重组片段;在gfp基因5′端引入USER位点构建了荧光融合蛋白表达载体pKHGFPE和pKNGFPE。此方法构建的载体在插入目的片段时均不用考虑酶切位点,极大地方便了试验设计,并且步骤简单,操作简便,节约大量时间。在大规模进行基因敲除以及相关蛋白定位等基因功能研究上具有广阔的应用前景。
关键词
镰刀菌
基因功能
载体构建
user
酶
Keywords
Fusarium
graminearum
gene
function
vector
construction
user
enzyme
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
一步法快速构建长片段RNAi发夹的载体
2
作者
刘廷利
郭冬姝
姚瑶
张保龙
机构
江苏省农业科学院卓越创新中心
出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2021年第5期1131-1136,共6页
基金
江苏省自然科学基金项目(BK20180308)
江苏省农业科技自主创新基金项目[CX(18)3012]。
文摘
利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术可以进行基因功能研究以及作物遗传改良,但常规构建RNAi载体方法费时费力。本研究报道了一种基于USER酶一步法快速构建RNAi发夹结构的载体2301/RNAi/OS及其应用方法,操作简便,省时省力。与已报道的利用酶切连接、Gateway兼容的同源重组或PCR直接连接等构建RNAi载体相比,该载体不需要酶切片段,片段扩增完成后即可与制备好的线性化载体进行反应,缩短操作流程和时间,提高成功率;该载体对插入片段的酶切位点和长度没有要求,理论上任何位置和长度的片段均可进入2301/RNAi/OS载体中,尤其是长片段RNAi的构建。本试验以本氏烟(Nicotiana benthamiana)PDS(Phytoene desaturase)基因为例,利用农杆菌介导的瞬时表达体系验证了该RNAi能够在植物体内有效地实现基因沉默。该载体以新霉素磷酸转移酶基因(NPTII)作为筛选标记基因,可以利用卡那霉素(Kanamycin)和G418(Geneticin)等抗生素筛选转基因阳性植株,适合单子叶和双子叶植物的遗传转化。
关键词
RNA干扰(RNAI)
user
酶
一步法
载体构建
基因沉默
Keywords
RNA
interference(RNAi)
user
enzyme
one-step
method
vector
construction
gene
silencing
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
适用于镰刀菌基因敲除和荧光融合蛋白表达的高效通用载体的构建
王晓亮
张昊
潘逸
许景升
徐进
冯洁
《植物保护》
CAS
CSCD
北大核心
2014
2
下载PDF
职称材料
2
一步法快速构建长片段RNAi发夹的载体
刘廷利
郭冬姝
姚瑶
张保龙
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2021
0
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职称材料
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