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微小脲原体UP3-00830基因原核表达载体的构建表达及生物信息学分析
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作者 白一童 贾泽玮 +2 位作者 贾晓晖 李瑞平 贾天军 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2023年第2期162-167,共6页
目的 构建微小脲原体UP3-00830基因原核表达载体,诱导表达蛋白并进行生物信息学分析。方法 通过PCR方法扩增UP3-00830基因。双酶切目的基因和载体质粒pGEX-6P-2,经T4连接酶连接,连接产物转化XL1-Blue感受态,经10 mmol/L IPTG诱导表达GST... 目的 构建微小脲原体UP3-00830基因原核表达载体,诱导表达蛋白并进行生物信息学分析。方法 通过PCR方法扩增UP3-00830基因。双酶切目的基因和载体质粒pGEX-6P-2,经T4连接酶连接,连接产物转化XL1-Blue感受态,经10 mmol/L IPTG诱导表达GST-UP3-00830融合蛋白,运用生物信息学软件预测UP3-00830基因编码的假设蛋白的功能。结果 成功构建了pGEX-6p-2-UP3-00830重组质粒,测序后与NCBI中录入的序列进行比对,同源性为99.85%。将重组质粒转染大肠埃希菌后经10 mmol/L IPTG诱导,表达相对分子质量为51×10^(3)的GST-UP3-00830融合蛋白,与预期相符。采用生物信息学软件分析UP3-00830基因编码的假设蛋白,其分子式为C_(1150)H_(1846)N_(302)O_(356)S_(4),理论相对分子质量为25.73×10^(3),理论等电点(pI)为5.19,氨基酸数目为218,氨基酸组成中的赖氨酸(Lys)所占比例最高。含有α-螺旋、延伸链、无规则卷曲和β-转角,无跨膜区域和信号肽区域,第178-216位为卷曲螺旋区域。高级结构分析显示,UP3-00830基因编码的假设蛋白与蛋白库中1zxj.1相似性最高,为31.05%;结构及功能预测显示该蛋白具有蛋白转运和蛋白折叠的功能,与其相邻的蛋白分别为UU067、fecE(UU069)、hmuU-1(UU070)和ABCsbp-4(UU071)。结论 成功构建UP3-00830基因原核表达载体,并诱导表为51×10^(3)的目的蛋白,该蛋白可能参与物质转运和信号转导。 展开更多
关键词 微小脲原体 up3-00830 原核表达 生物信息学分析
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