UNC-51样激酶1在食管癌组织中的表达及其意义 被引量：2

1

作者 刘欣韵 蒋小芹 +6 位作者 鲍晶晶 窦蓉蓉 刘福兴 戴桂红 朱晓蔚 陈民 于鸿 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2018年第6期521-524,共4页

目的:观察食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中UNC-51样激酶1(UNC-51-like kinase 1,ULK1)的表达情况,并分析其与ESCC患者临床病理特征和生存期的关系。方法:利用组织芯片技术结合免疫组化法检测94例食管癌... 目的:观察食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中UNC-51样激酶1(UNC-51-like kinase 1,ULK1)的表达情况,并分析其与ESCC患者临床病理特征和生存期的关系。方法:利用组织芯片技术结合免疫组化法检测94例食管癌组织以及78例相应癌旁组织中ULK1蛋白的表达。结果:食管癌组织中ULK1细胞质表达水平显著高于癌旁组织(P <0. 01),且与淋巴结转移有明显相关性(P <0. 05)。生存分析显示,ULK1低表达的ESCC患者生存率明显低于高表达者(风险比为1. 754,95%CI:1. 022～3. 010,P=0. 041)。结论:ULK1在ESCC中异常表达,并且ULK1低表达ESCC患者的生存期较差,ULK1可能是ESCC潜在的分子标志物。 展开更多

关键词 食管癌 unc-51样激酶1 生物标志物

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自噬启动因子ULK1的生物学功能与靶向治疗研究进展 被引量：14

2

作者 张岚 欧阳亮 刘博 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期787-801,共15页

UNC-51样激酶1(ULK1)作为一种丝氨酸/苏氨酸激酶是哺乳动物中的自噬启动因子,也是酵母中Atg1的同源蛋白.近年来,大量研究揭示了ULK1的结构特征及其生物学功能,并阐明了其调控自噬的途径及其与多种疾病的关系.最新研究还发现了一系列直... UNC-51样激酶1(ULK1)作为一种丝氨酸/苏氨酸激酶是哺乳动物中的自噬启动因子,也是酵母中Atg1的同源蛋白.近年来,大量研究揭示了ULK1的结构特征及其生物学功能,并阐明了其调控自噬的途径及其与多种疾病的关系.最新研究还发现了一系列直接或间接靶向ULK1调节自噬的小分子化合物,为开发靶向自噬的新候选药物提供了线索.该文综述了ULK1作为自噬启动因子的复杂生物学功能、与多种疾病的关系及其潜在的靶向治疗应用. 展开更多

关键词 unc-51样激酶1(ULK1) 自噬 自噬通路 疾病 小分子化合物 靶向治疗

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基于AMPK/mTOR/ULK1自噬相关通路探讨左归降糖通脉方对AGEs合并缺糖缺氧星形胶质细胞炎性损伤的影响 被引量：9

3

作者 李钰佳 李定祥 +1 位作者 彭珣 邓奕辉 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第16期90-99,共10页

目的:探讨左归降糖通脉方对糖基化终末产物(AGEs)合并缺糖缺氧(OGD)损伤后星形胶质细胞(AS)的影响及干预机制。方法:使用细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK-8)确定AGEs作用浓度及OGD时间,选择左归降糖通脉方(ZGJTTMP)含药血浆的作用浓度;将... 目的:探讨左归降糖通脉方对糖基化终末产物(AGEs)合并缺糖缺氧(OGD)损伤后星形胶质细胞(AS)的影响及干预机制。方法:使用细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK-8)确定AGEs作用浓度及OGD时间,选择左归降糖通脉方(ZGJTTMP)含药血浆的作用浓度;将星形胶质细胞随机分为空白组、模型(AGEs+OGD)组、ZGJTTMP组、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂(Compound C)组、AMPK激动剂(AICAR)组、ZGJTTMP+AICAR组,倒置显微镜下观察各组细胞形态结构,CCK-8法检测各组细胞存活率,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组细胞中白细胞介素^(-1)β(IL^(-1)β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;电镜下观察各组细胞内自噬小体的数目,免疫荧光染色法观察各组细胞中微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞LC3、p62、磷酸化(p)-AMPK、AMPK、磷酸化(p)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、mTOR、磷酸化(p)-UNC-51样激酶1(ULK1)、ULK1蛋白的表达情况。结果:选择AGEs 200 mg·L^(-1)合并OGD 6 h作为最适造模条件,5%作为ZGJTTMP含药血浆的最佳作用体积分数。倒置显微镜下见造模后细胞受损严重,ZGJTTMP组与Compound C组细胞损伤得到明显改善;ELISA结果示模型组IL^(-1)β、IL-6、TNF-α的含量显著增加(P<0.01),ZGJTTMP组与Compound C组炎症因子含量显著下降(P<0.01);电镜下可见模型组细胞内自噬小体数目明显增多,免疫荧光结果示LC3荧光表达面积显著增加(P<0.01),ZGJTTMP组与Compound C组细胞内自噬小体数目明显减少,LC3表达面积显著减少(P<0.01);Western blot结果显示,与空白组比较,模型组细胞LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著升高(P<0.01),p62、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK1显著下降(P<0.01),与模型组比较,ZGJTTMP组与Compound C组细胞内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著下降(P<0.01),p62、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK1显著升高(P<0.01)。结论:ZGJTTMP对AG 展开更多

关键词 星形胶质细胞 自噬 左归降糖通脉方 腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK) 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) unc-51样激酶1(ULK1)

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细胞自噬与ULK1蛋白关系的研究进展 被引量：8

4

作者 杨龙灿 张莹 +4 位作者 余曦 孙家维 李继伟 张旭阳 潘宁波 《医学综述》 2018年第23期4635-4639,4646,共6页

细胞自噬是生物体重要的代谢过程,在各个生理、病理过程中扮演重要角色。它由自噬相关蛋白控制,受多条信号通路调控。细胞自噬在神经退行性病变、肿瘤发生、缺血/再灌注损伤、糖尿病、循环系统疾病等方面有重要作用,其可以清除细胞内受... 细胞自噬是生物体重要的代谢过程,在各个生理、病理过程中扮演重要角色。它由自噬相关蛋白控制,受多条信号通路调控。细胞自噬在神经退行性病变、肿瘤发生、缺血/再灌注损伤、糖尿病、循环系统疾病等方面有重要作用,其可以清除细胞内受损的物质或细胞器,为细胞提供原料和良好的细胞环境。而在细胞自噬的形成过程中,unc-51样激酶1(ULK1)蛋白发挥重要作用,它是细胞自噬的起始开关。因此,通过对ULK1蛋白上下游信号的深入研究,以ULK1蛋白为治疗靶点,干预和调控细胞自噬,将为疾病的治疗提供新的方向。 展开更多

关键词 细胞自噬 unc-51样激酶1蛋白 缺血/再灌注

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当归芍药散对MAFLD大鼠AMPK/mTOR/ULK1自噬信号通路的调节作用 被引量：1

5

作者 彪雅宁 刘晨旭 +4 位作者 张一昕 肖依 魏子恒 于泽鹤 曹然 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期9-16,共8页

目的:观察当归芍药散对代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)大鼠腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/Unc-51样激酶1(AMPK/mTOR/ULK1)信号通路的调控作用,探讨其对MAFLD大鼠的治疗作用及机制。方法:60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、西... 目的:观察当归芍药散对代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)大鼠腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/Unc-51样激酶1(AMPK/mTOR/ULK1)信号通路的调控作用,探讨其对MAFLD大鼠的治疗作用及机制。方法:60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、西药组(多烯磷脂酰胆碱胶囊,0.144 g·kg^(-1))及当归芍药散低、中、高剂量组(2.44、4.88、9.76 g·kg^(-1))。采用高脂饲料连续喂养8周后,各用药组给予相应药物治疗4周。给药结束后,收集血清和肝组织用于后续实验检测。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)和肝组织TC、TG、游离脂肪酸(FFA)的含量或活性均显著升高(P<0.01),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量显著降低(P<0.01),肝组织磷酸化(p)-AMPK、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)Ⅱ、Beclin1和ULK1蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),p-mTOR和泛素结合蛋白p62蛋白表达水平显著升高(P<0.01),肝细胞出现脂肪性变,NAFLD活动度评分(NAS)和油红O染色面积均明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,当归芍药散可降低血清TC、TG、ALT、AST和肝组织TC、TG、FFA的含量或活性及p-mTOR和p62蛋白表达水平(P<0.01),升高血清HDL-C含量及肝组织p-AMPK、LCBⅡ、Beclin1和ULK1蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),改善肝组织脂肪性变,降低NAS和油红O染色面积(P<0.05,P<0.01)。结论:当归芍药散对MAFLD大鼠有治疗作用,其机制可能与调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路,增强自噬有关。 展开更多

关键词 当归芍药散 代谢相关脂肪性肝病 腺苷酸活化蛋白激酶 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 unc-51样激酶1 自噬

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白桦脂酸调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路对冠心病大鼠血管平滑肌细胞自噬和凋亡的影响 被引量：2

6

作者 毛治尉 王东伟 +1 位作者 武永新 张涛 《实用药物与临床》 CAS 2023年第8期679-686,共8页

目的探究白桦脂酸通过调节腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/Unc-51样自噬激活激酶1(ULK1)信号通路对冠心病大鼠血管平滑肌细胞自噬和凋亡的影响。方法原代培养冠心病大鼠血管平滑肌细胞,将其随机分为正常组(Cont... 目的探究白桦脂酸通过调节腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/Unc-51样自噬激活激酶1(ULK1)信号通路对冠心病大鼠血管平滑肌细胞自噬和凋亡的影响。方法原代培养冠心病大鼠血管平滑肌细胞,将其随机分为正常组(Control组)、模型组(Model组)、低浓度(20μmol/L)白桦脂酸组(BA-L组)、高浓度(40μmol/L)白桦脂酸组(BA-H组)和高浓度(40μmol/L)白桦脂酸+AMPK抑制剂(10μmol/L)Compound C组(BA-H+CC组)。CCK-8法检测大鼠血管平滑肌细胞的细胞活力。流式细胞术检测细胞凋亡。mRFP-GFP-LC3双荧光体系示踪大鼠血管平滑肌细胞的自噬小体。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测大鼠血管平滑肌细胞中AMPK、mTOR、ULK1 mRNA的表达。Western blot实验检测大鼠血管平滑肌细胞中AMPK、mTOR、ULK1、LC3、Bax、Bcl-2、Beclin-1蛋白表达水平。结果与Control组相比,Model组血管平滑肌细胞的细胞活力(48 h、72 h)、Bcl-2蛋白表达、mTOR mRNA和蛋白表达显著上升(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1蛋白表达、AMPK及ULK1 mRNA和蛋白表达显著下降(P<0.05)。与Model组相比,BA-H组血管平滑肌细胞的细胞活力(48 h、72 h)、Bcl-2蛋白表达、mTOR mRNA和蛋白表达显著下降(P<0.05),细胞凋亡率、Bax、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1蛋白表达、AMPK及ULK1 mRNA和蛋白表达显著上升(P<0.05)。Compound C减弱了白桦脂酸对血管平滑肌细胞自噬和凋亡的促进作用(P<0.05)。结论白桦脂酸可能通过激活AMPK/mTOR/ULK1信号通路促进冠心病大鼠血管平滑肌细胞的自噬和凋亡。 展开更多

关键词 白桦脂酸 腺苷酸活化蛋白激酶 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 unc-51样自噬激活激酶1 血管平滑肌细胞 自噬 凋亡 冠心病

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黄芪甲苷通过调控AMPK/ULK1信号通路减轻高糖诱导的大鼠H9c2细胞损伤 被引量：5

7

作者 秦依然 申程 +1 位作者 尉希清 张金国 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期1304-1310,共7页

目的:探讨黄芪甲苷(Astragaloside IV,ASIV)对高糖(high glucose,HG)环境下大鼠心肌H9c2细胞系自噬水平的调控作用及相关机制。方法:高浓度(33.3 mmol/L)葡萄糖对H9c2细胞进行干预,建立HG体外损伤模型。将细胞分为低糖(5.5 mmol/L葡萄糖... 目的:探讨黄芪甲苷(Astragaloside IV,ASIV)对高糖(high glucose,HG)环境下大鼠心肌H9c2细胞系自噬水平的调控作用及相关机制。方法:高浓度(33.3 mmol/L)葡萄糖对H9c2细胞进行干预,建立HG体外损伤模型。将细胞分为低糖(5.5 mmol/L葡萄糖)对照(control)组、HG组、HG+ASIV(100μmol/L)组和HG+ASIV(100μmol/L)+Compound C(5μmol/L)组。CCK-8法检测H9c2细胞活力;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测细胞损伤;Western blot检测微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)-I、LC3-II、beclin-1、p62及AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/Unc-51样激酶1(Unc-51-like kinase 1,ULK1)信号通路相关蛋白的表达变化;免疫荧光法检测LC3B表达。结果:100μmol/L ASIV可显著抑制HG诱导的心肌细胞活力下降(P<0.05),减少HG条件下LDH释放(P<0.05);ASIV可显著逆转HG诱导的心肌细胞LC3-II/LC3-I比值、beclin-1蛋白表达水平及AMPK和ULK1磷酸化水平的下降,以及p62蛋白的高表达(P<0.05),使HG条件下受到抑制的LC3B荧光强度增加。ASIV促进自噬以及增加AMPK和ULK1磷酸化的作用可被AMPK抑制剂Compound C阻断。结论:ASIV可能通过调节AMPK/ULK1信号通路提高大鼠心肌H9c2细胞自噬水平,从而减轻心肌细胞的HG损伤。 展开更多

关键词 黄芪甲苷 高糖 心肌细胞 自噬 AMP活化蛋白激酶 unc-51样激酶1

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巴佛洛霉素A1介导AMPK/mTOR/ULK1信号通路对脑缺血再灌注损伤小鼠的神经保护机制研究

8

作者 周超瑞 顾健坤 +1 位作者 陈娜 李明娟 《中华全科医学》 2024年第2期225-229,共5页

目的探讨巴佛洛霉素A1(BAF-A1)抗小鼠脑缺血再灌注(IR)损伤的腺苷一磷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/Unc-51样激酶1(ULK1)自噬信号通路的机制。方法选择SPF级雄性小鼠40只,采用随机数表法分成假手术组(S组)、IR模... 目的探讨巴佛洛霉素A1(BAF-A1)抗小鼠脑缺血再灌注(IR)损伤的腺苷一磷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/Unc-51样激酶1(ULK1)自噬信号通路的机制。方法选择SPF级雄性小鼠40只,采用随机数表法分成假手术组(S组)、IR模型组(M组)、BAF-A1组(B组)、BAF-A1+AMPK激动剂组(B+M组),每组10只。以线栓法制备IR模型,以缺血1.5 h再灌注24 h后为评价点进行评价。结果神经功能缺失评分显示,S组无神经功能缺失,B组为(1.47±0.28)分、B+M组为(2.05±0.16)分、M组为(2.45±0.31)分,B组及B+M组均低于M组(P<0.05)。与M组比较,B组脑梗死体积比率下降(P<0.05)。与S组比较,M组CA1、CA3区有少量的核固缩核裂变、坏死的现象;与M组比较,B组CA1、CA3区的核固缩,核裂变空泡及坏死的症状改善,但B+M组拮抗了这一作用。与S组比较,M组LC3Ⅱ/Ⅰ、p-AMPK/AMPK蛋白均升高(P<0.05);与M组比较,B组LC3Ⅱ/Ⅰ、p-AMPK/AMPK蛋白均下降(P<0.05)。与S组比较,M组p-mTOR/mTOR、Ps757-ULK1/ULK1蛋白降低;与M组比较,B组p-mTOR/mTOR、Ps757-ULK1/ULK1蛋白均升高(P<0.05)。结论BAF-A1可能通过抑制AMPK/mTOR/ULK1信号通路,抑制小鼠脑海马区的过度自噬,从而发挥神经功能的保护性作用。 展开更多

关键词 巴佛洛霉素A1 脑缺血再灌注损伤 腺苷一磷酸活化蛋白激酶 雷帕霉素靶蛋白 unc-51样激酶1 神经保护

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益气活血养阴清热方对糖尿病肾病大鼠肾组织自噬信号通路AMPK/mTOR/ULK1的影响

9

作者 申宇航 顾悦 +3 位作者 丁鑫 王逸凡 吕哲 郭登洲 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期34-40,共7页

目的:观察益气活血养阴清热方对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织损伤及单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/UNC-51样激酶1(ULK1)(AMPK/mTOR/ULK1)信号通路的影响,探讨其治疗DN的可能作用机制,为临床应用益气活血养阴... 目的:观察益气活血养阴清热方对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织损伤及单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/UNC-51样激酶1(ULK1)(AMPK/mTOR/ULK1)信号通路的影响,探讨其治疗DN的可能作用机制,为临床应用益气活血养阴清热方治疗DN提供客观的理论依据。方法:将90只SPF级雄性SD大鼠采用随机数字表法分为正常对照组和造模组,分别给予普通饲料、高糖高脂饲料喂养。6 w后造模组大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立DN模型,模型制备成功后随机分为模型对照组、益气活血养阴清热方7.7、15.3、30.6 g/kg组、厄贝沙坦0.017 g/kg组。给药后检测大鼠空腹血糖(FBG)、24 h尿蛋白(24 h-UTP)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)含量;HE染色、Masson染色、碘酸六胺银(PASM)染色观察肾组织病理变化;透射电镜观察肾组织超微结构变化;免疫组化法(IHC)检测大鼠肾组织自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、肌球蛋白样BCL2结合蛋白(Beclin 1)表达水平;Western blot法检测大鼠肾组织AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、ULK1、p-ULK1蛋白表达;Real-time PCR法检测大鼠肾组织Ampk、Mtor、Ulk1 mRNA表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠FBG、Scr、BUN、24 h-UTP含量显著升高(P<0.01),肾小球增大,基底膜增厚,系膜基质增生,毛细血管扩张明显,足突融合,LC3Ⅱ、Beclin 1蛋白表达水平显著降低(P<0.01);AMPK、p-AMPK、ULK1、p-ULK1蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01),p-mTOR、mTOR蛋白表达显著上调(P<0.01);Ampk、Ulk1 mRNA表达显著下调(P<0.01),Mtor mRNA表达显著上调(P<0.01);与模型对照组比较,益气活血养阴清热方30.6 g/kg组大鼠FBG、Scr、BUN、24 h-UTP含量显著降低(P<0.01);肾小球增大减轻,肾组织病理变化改善,同时可见明显的自噬溶酶体,LC3Ⅱ、Beclin 1蛋白表达显著升高(P<0.01);AMPK、p-AMPK、ULK1、p-ULK1表达显著上调(P<0.01),mTOR、p-mTOR表达显著下调(P<0.0 展开更多

关键词 益气活血养阴清热方 糖尿病肾病 单磷酸腺苷活化蛋白激酶 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 unc-51样激酶1

原文传递

ULK1对肝癌细胞生长的调节及其抑制剂对细胞增殖的影响

10

作者 毛雅珍 陈勇 +2 位作者 林赵栋 沈玲英 林伟 《中国医药科学》 2024年第17期4-7,17,共5页

目的探讨UNC-51样激酶1(ULK1)在肝细胞癌(HCC)中的表达及预后,敲减ULK1或抑制ULK1激酶的活性是否可以抑制肝癌细胞增殖、诱导凋亡并增强奥沙利铂的敏感性。方法在在线数据库中分析ULK1在泛癌和HCC中的表达和预后;定量实时聚合酶链反应... 目的探讨UNC-51样激酶1(ULK1)在肝细胞癌(HCC)中的表达及预后,敲减ULK1或抑制ULK1激酶的活性是否可以抑制肝癌细胞增殖、诱导凋亡并增强奥沙利铂的敏感性。方法在在线数据库中分析ULK1在泛癌和HCC中的表达和预后;定量实时聚合酶链反应验证不同ULK1敲减序列的敲减效率;CCK8法检测敲减ULK1对肝癌细胞系HepG2增殖能力的影响;CCK8法检测ULK1抑制剂和奥沙利铂对HepG2细胞增殖的影响;流式细胞术探讨奥沙利铂与ULK1抑制剂联合对HepG2细胞凋亡的影响;免疫印记法实验检测奥沙利铂与ULK1抑制剂联合对HepG2细胞自噬的影响。结果ULK1在HCC中高表达且与患者预后呈负相关;在HepG2细胞中成功敲减ULK1基因;敲低ULK1可降低HepG2细胞增殖能力;ULK1抑制剂和奥沙利铂联合可抑制HepG2细胞增殖,同时增加HepG2细胞凋亡数量;其机制可能与增强HepG2细胞自噬有关。结论敲低ULK1或使用ULK1抑制剂,可抑制HepG2细胞增殖并诱导凋亡,或有可能增强化疗药物毒性作用,其机制可能与细胞自噬的调控有关。 展开更多

关键词 unc-51样激酶1 肝细胞癌 细胞自噬 奥沙利铂

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胎盘ULK1表达与自噬及子痫前期的相关性研究

11

作者 葛榕 陈品玲 +5 位作者 郑琳 杨茵 林靓 辛长征 李蕊 许昌声 《海南医学》 CAS 2024年第9期1283-1286,共4页

目的比较子痫前期与正常产妇胎盘组织中Unc-51样激酶1(ULK1)表达和自噬水平,分析胎盘ULK1表达与自噬水平及子痫前期病情的相关性。方法选择2021年3月至2023年5月于福建省立医院分娩的25例子痫前期患者作为子痫前期组,同期住院且年龄、... 目的比较子痫前期与正常产妇胎盘组织中Unc-51样激酶1(ULK1)表达和自噬水平,分析胎盘ULK1表达与自噬水平及子痫前期病情的相关性。方法选择2021年3月至2023年5月于福建省立医院分娩的25例子痫前期患者作为子痫前期组,同期住院且年龄、产次与分娩方式相配对的25例正常产妇作为对照组。免疫组织化学检测两组产妇胎盘组织中自噬标志蛋白微管相关蛋白1A/1B-轻链3B(LC3B)、苄氯素1(Beclin1)、螯合体1(SQSTM1/p62)和ULK1蛋白的表达水平,实时荧光定量PCR检测胎盘组织ULK1的mRNA表达,电化学发光法检测子痫前期患者外周血可溶性类fms酪氨酸激酶-1(sFlt-1)和胎盘生长因子(PlGF),采用Pearson法分析ULK1表达与sFlt-1/PlGF比值的相关性。结果免疫组织化学检测结果显示,对照组与子痫前期组胎盘均可见LC3B、Beclin1和p62表达,经半定量分析结果显示,子痫前期组产妇胎盘组织的LC3B和Beclin1表达相对量分别为695.32±77.82、534.19±77.60,明显高于对照组的630.11±64.14和438.66±91.71,p62表达相对量为529.66±85.62,明显低于对照组的638.37±127.62,差异均有统计学意义(P<0.05);经实时荧光定量PCR检测结果显示,子痫前期组产妇胎盘组织ULK1的mRNA表达水平1.01±0.13,明显高于对照组的0.86±0.08,差异有统计学意义(P<0.01);子痫前期组外周血PlGF和sFlt-1水平分别为(114.12±21.71)pg/mL和(8274.126±3453.49)pg/mL,sFlt-1/PlGF比值平均为81.94±57.84,经Pearson相关性分析表明,子痫前期组胎盘组织ULK1的mRNA表达水平与外周血sFlt-1/PlGF比值呈正相关(r=0.701,P<0.05)。结论子痫前期患者胎盘组织ULK1的表达水平明显上升,与自噬水平一致,并与子痫前期严重程度密切相关,有望作为子痫前期防治的新靶点。 展开更多

关键词 子痫前期 自噬 unc-51样激酶1 胎盘

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肝豆扶木汤通过调控miR-29b-3p/ULK1表达对Wilson病肝纤维化小鼠自噬的影响

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作者 钱南南 杨文明 +6 位作者 魏涛华 唐露露 江海林 郝文杰 杨玉龙 张帅帅 胡胜 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期17-25,共9页

目的:探讨肝豆扶木汤(GDFMD)在Wilson病肝纤维化发展过程中的作用机制及途径。方法:将30只毒性乳突变小鼠(TX-j)随机分为模型组、GDFMD高、中、低剂量组、青霉胺组,每组6只,另随机选取6只野生型小鼠作为正常组,GDFMD高、中、低剂量组予1... 目的:探讨肝豆扶木汤(GDFMD)在Wilson病肝纤维化发展过程中的作用机制及途径。方法:将30只毒性乳突变小鼠(TX-j)随机分为模型组、GDFMD高、中、低剂量组、青霉胺组,每组6只,另随机选取6只野生型小鼠作为正常组,GDFMD高、中、低剂量组予13.92、6.96、3.48 g·kg^(-1)药物进行灌胃。青霉胺组予0.1 g·kg^(-1)青霉胺药物进行灌胃。模型组和正常组用等容积的生理盐水,每天1次,连续灌胃4周。灌胃4周后收集样本,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测Ⅲ型前胶原肽(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN);苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)及苦味酸-天狼星红胶原(Sirus Red)染色观察肝纤维化组织病理学改变。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)、免疫组化和蛋白免疫印迹法(Western blot)观察肝星状细胞(HSCs)活化相关指标α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)表达。采用Real-time PCR观察miR-29b-3p表达;Western blot观察Unc-51样自噬激活激酶1(ULK1)及其下游相关因子的表达。应用双荧光素酶报告基因检测方法对miR-29b-3p下游基因进行了验证。结果:与正常组比较,模型组肝纤维化4项(PCⅢ、ColⅣ、HA、LN)显著异常(P<0.01),病理明显异常,HSCs活化相关指标α-SMA、ColⅠ及α-SMA、ColⅠmRNA表达上调(P<0.05,P<0.01),miR-29b-3p表达下调(P<0.01),ULK1、磷酸化(p)-ULK1、自噬相关基因13(Atg13)、p-Atg13、Beclin-1、FAK家族激酶200 kDa相互作用蛋白(FIP200)、激活分子BECN1调节的自噬蛋白1(AMBRA1)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ(LC3Ⅱ/Ⅰ)上调(P<0.05,P<0.01),p62蛋白表达下调(P<0.01)。与模型组比较,GDFMD高、中、低剂量组及青霉胺组肝纤维化4项显著改善(P<0.01),病理状况改善,HSCs活化相关指标α-SMA、ColⅠ及α-SMA、ColⅠmRNA表达下调(P<0.05,P<0.01),miR-29b-3p表达上调(P<0.01),ULK1、p-ULK1、Atg13、p-Atg13、Beclin-1、FIP200、AMBRA1、LC3Ⅱ 展开更多

关键词 WILSON病 肝纤维化 肝豆扶木汤 miR-29b-3p unc-51样自噬激活激酶1(ULK1) 细胞自噬

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激酶ULK1对急性T淋巴细胞白血病细胞凋亡作用的研究

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作者 曹秀丽 黄佩 +4 位作者 马金花 黄茂林 官亚宁 陈艳 何志旭 《遵义医科大学学报》 2024年第4期376-383,共8页

目的 探讨ULK1对急性T淋巴细胞白血病细胞株CEM-C7凋亡的影响及与AMPKα/ULK1轴之间的关系。方法 通过予不同浓度ULK1激活剂LYN-1604(0、1.2、2μmol/L)、ULK1抑制剂MRT68921(0、1.2、2μmol/L)干预CEM-C7细胞24 h,流式细胞术检测各药... 目的 探讨ULK1对急性T淋巴细胞白血病细胞株CEM-C7凋亡的影响及与AMPKα/ULK1轴之间的关系。方法 通过予不同浓度ULK1激活剂LYN-1604(0、1.2、2μmol/L)、ULK1抑制剂MRT68921(0、1.2、2μmol/L)干预CEM-C7细胞24 h,流式细胞术检测各药物浓度对CEM-C7细胞株凋亡率的影响,筛选凋亡最明显的药物浓度进行后续实验,Edu及Soft agar实验检测其对CEM-C7细胞株增殖的影响,流式细胞术检测其对CEM-C7细胞株线粒体膜电位的影响,透射电镜观察其对CEM-C7细胞细胞核及线粒体超微结构变化的影响,Western blot检测激活和抑制ULK1后ULK1、p-ULK1(Ser317)、Caspase3、Cleaved-caspase3、Bcl-2、Bax、PCNA、AMPKα、p-AMPKα(Ser172)的表达情况。结果 ULK1抑制剂及激活剂分别干预CEM-C7细胞24 h以后,与对照组相比,ULK1抑制剂可明显促进CEM-C7细胞发生凋亡,抑制CEM-C7细胞增殖,使细胞线粒体的膜电位明显下降,差异均具有统计学意义(P<0.05);透射电镜可观察到明显的细胞凋亡现象;p-ULK1(Ser317)、p-AMPKα(Ser172)的蛋白水平表达下降,而ULK1激活剂对CEM-C7细胞株无明显影响。结论 ULK1可能通过AMPKα/ULK1轴影响其对CEM-C7细胞的凋亡功能。 展开更多

关键词 unc-51样激酶1 急性T淋巴细胞白血病 CEM-C7细胞 凋亡

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氟暴露对NG108-15细胞自噬及AMPK/mTOR/ULK1通路的影响

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作者 张露文 张露 +1 位作者 石小雪 谢春 《中华地方病学杂志》 CAS 北大核心 2023年第2期99-105,共7页

目的探讨氟暴露对小鼠神经母细胞瘤与大鼠神经胶质瘤融合细胞(NG108-15细胞)自噬及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、Unc-51样激酶1(ULK1)表达的影响。方法体外培养NG108-15细胞,按照氟化钠终浓度分为对照组(0 ... 目的探讨氟暴露对小鼠神经母细胞瘤与大鼠神经胶质瘤融合细胞(NG108-15细胞)自噬及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、Unc-51样激酶1(ULK1)表达的影响。方法体外培养NG108-15细胞,按照氟化钠终浓度分为对照组(0 mg/L)、低氟组(20 mg/L)、中氟组(40 mg/L)、高氟组(80 mg/L),处理24 h后收集细胞备用。采用免疫荧光(IF)/免疫细胞化学(ICC)法检测细胞自噬情况(以磷酸氯喹处理为自噬阳性对照);实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞AMPK、mTOR、ULK1 mRNA表达水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、AMPK、mTOR、ULK1、磷酸化(p)-AMPK、p-mTOR、p-ULK1表达水平。结果对照组未检出自噬体,各染氟组均检出自噬体;且低、中、高氟组LC3B蛋白表达水平(1.80±0.59、2.16±0.60、2.30±0.57)均明显高于对照组(1.00±0.29,均P<0.05)。qRT-PCR检测结果显示,与对照组比较,中、高氟组AMPK mRNA表达水平均较高(2.30±0.57、4.41±1.05比1.00±0.01,均P<0.05);低、中、高氟组mTOR mRNA表达水平均较低(0.79±0.04、0.76±0.09、0.64±0.10比1.00±0.01,均P<0.05),ULK1 mRNA表达水平均较高(1.81±0.39、1.96±0.35、4.22±1.03比1.00±0.01,均P<0.05)。Western blot检测结果显示,与对照组比较,低、中、高氟组AMPK(1.21±0.05、1.20±0.04、1.30±0.07比1.00±0.03),p-AMPK(1.12±0.05、1.20±0.06、1.49±0.07比1.00±0.02),ULK1(1.16±0.05、1.26±0.05、1.15±0.05比1.00±0.04)及p-ULK1蛋白表达水平均较高(1.19±0.04、1.17±0.02,1.24±0.05比1.00±0.05,均P<0.05),mTOR蛋白表达水平均较低(0.77±0.03、0.60±0.03、0.55±0.04比1.00±0.04,均P<0.05);中、高氟组p-mTOR蛋白表达水平均较低(0.93±0.05、0.48±0.02比1.00±0.02,均P<0.05)。结论氟暴露可致NG108-15细胞发生自噬,AMPK、ULK1表达上调,而mTOR表达下调。 展开更多

关键词 氟 NG108-15细胞 自噬 腺苷酸活化蛋白激酶 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 unc-51样激酶1

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氧化应激诱导AMPK/ULK1通路激活及溶酶体功能障碍在砷致大鼠肝损伤中的作用 被引量：4

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作者 毕顶念 时明阳 +5 位作者 胡倩 汪红玲 田旭娇 游安波 林秀宪 胡勇 《环境与职业医学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1376-1382,共7页

[背景]地方性砷中毒较为突出的特点为肝损伤严重。研究发现肝损伤与氧化应激、溶酶体及自噬密切相关。[目的]通过建立亚砷酸钠(NaAsO_(2))致大鼠肝损伤模型,观察氧化应激、溶酶体功能以及AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)/自噬启动激酶1(ULK1)... [背景]地方性砷中毒较为突出的特点为肝损伤严重。研究发现肝损伤与氧化应激、溶酶体及自噬密切相关。[目的]通过建立亚砷酸钠(NaAsO_(2))致大鼠肝损伤模型,观察氧化应激、溶酶体功能以及AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)/自噬启动激酶1(ULK1)通路在NaAsO_(2)致大鼠肝损伤中的作用。[方法]SPF级Wistar大鼠24只,雌雄各半,随机分为4组,每组6只:对照组以及25、50、100 mg·L^(-1) NaAsO_(2)组。自由饮用不同剂量的NaAsO_(2)水溶液24周建立砷中毒大鼠肝损伤模型。染毒24周后解剖大鼠取肝脏,采用试剂盒检测肝组织丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆汁酸(TBA)、过氧化氢酶(CAT)、脂质过氧化物(LPO)、总抗氧化能力(T-AOC)水平;酶联免疫吸附法检测肝组织溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)、组织蛋白酶B(CTSB)以及酸性磷酸酶2(ACP2)的水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肝组织AMPK、ULK1、自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)、泛素结合蛋白(p62)mRNA转录水平;免疫组化法检测肝组织p-AMPK、p-ULK1、LC3和p62蛋白表达。[结果]NaAsO_(2)染毒后,各组间ALT、ALP、TBA水平差异均具有统计学意义(F=12.09、72.11和23.58,P<0.05)。与对照组相比,50、100 mg·L^(-1) NaAsO_(2)组大鼠肝组织ALT水平升高(P<0.05);25、50、100 mg·L^(-1) NaAsO_(2)组ALP、TBA水平升高(P<0.05);100 mg·L^(-1) NaAsO_(2)组大鼠肝组织LPO水平升高(P<0.05);25、50、100 mg·L^(-1) NaAsO_(2)组大鼠肝组织CAT、TAOC水平降低(P<0.05)。酶联免疫吸附检测结果显示,25、50、100 mg·L^(-1)􀀁NaAsO_(2)组ACP2,100 mg·L^(-1) NaAsO_(2)组CTSB,以及50、100 mg·L^(-1) NaAsO_(2)组LAMP2质量浓度与对照组相比均下降(P<0.05)。RT-qPCR与免疫组化结果显示,部分染砷组AMPK、ULK1、LC3 mRNA转录和蛋白表达水平较对照组有不同程度的升高,且100 mg·L^(-1) NaAsO_(2)组的升高均具有统计学意义(P<0.05);25、50、100 mg·L^(-1) NaAsO_(2)组大鼠肝组织p62 mRNA转录表达 展开更多

关键词 砷 氧化应激 溶酶体 AMP活化的蛋白激酶 unc51样激酶1 自噬 肝损伤

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pSicoR/miR-17-5p靶向调控UNC-51样激酶1(ULK1)及其对细胞自噬的影响 被引量：4

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作者 汤建中 张涛 +3 位作者 丁淑琴 张爱君 刘学英 徐广贤 《临床检验杂志（电子版）》 2014年第3期698-704,共7页

目的为了探讨miR-17-5p对自噬相关基因ULK1的调控作用及其对细胞自噬的影响,为更深入研究miR-17-5p调控细胞自噬机制建立理论依据。方法构建p Sico R-miR-17-5p过表达重组质粒,包装miR-17-5p过表达慢病毒,构建ULK1及其突变体ULK1-mut的p... 目的为了探讨miR-17-5p对自噬相关基因ULK1的调控作用及其对细胞自噬的影响,为更深入研究miR-17-5p调控细胞自噬机制建立理论依据。方法构建p Sico R-miR-17-5p过表达重组质粒,包装miR-17-5p过表达慢病毒,构建ULK1及其突变体ULK1-mut的pmiR-report载体,通过双荧光素酶报告系统验证miR-17-5p对ULK1的靶向关系,利用Western blot检测ULK1与LC3B蛋白的表达量。结果成功构建p Sico R-miR-17-5p过表达重组质粒并且成功将ULK1及其突变体ULK1-mut的3′-UTR插入到pmiR-report载体中;双荧光素酶报告系统结果表明转染miR-17-5p及ULK1-3′-UTR,miR-17-5p过表达组相比对照组相对荧光强度降低1.9倍(P<0.05),说明miR-17-5p对ULK1的表达有抑制作用,而转染miR-17-5p及mut-ULK1-3′-UTR之后检测显示相对荧光强度并没有降低,说明miR-17-5p是靶向作用于ULK1,并对其进行负调控;Western blot显示miR-17-5p抑制ULK1蛋白的表达,并且抑制LC3II/I蛋白的表达。结论 miR-17-5p直接靶向作用于自噬相关基因ULK1,并且对其负调控,抑制细胞自噬的发生。 展开更多

关键词 miR-17-5p unc-51样激酶1(ULK1) LC3B 细胞自噬

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过表达ULK3介导GLi1对人膀胱癌细增殖、迁移、侵袭的影响及机制

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作者 郑旭 汪中琪 +5 位作者 孙甲乐 王金行 陈守峰 程琪 郭园园 刘贝贝 《中华解剖与临床杂志》 2023年第12期812-818,共7页

目的探讨过表达Un51样激酶3(ULK3)介导胶质瘤相关癌基因同源基因1(Gli1)对膀胱癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响及其机制。方法培养人膀胱癌T24细胞分为对照组、ULK3过表达组(ULK3+组)、Gli1过表达组(Gli1+组)、ULK3和Gli1过表达组(ULK3+/G... 目的探讨过表达Un51样激酶3(ULK3)介导胶质瘤相关癌基因同源基因1(Gli1)对膀胱癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响及其机制。方法培养人膀胱癌T24细胞分为对照组、ULK3过表达组(ULK3+组)、Gli1过表达组(Gli1+组)、ULK3和Gli1过表达组(ULK3+/Gli1+组)、ULK3过表达和Gli1敲低组(ULK3+/Gli1-组),分别使用阴性对照试剂、过表达ULK3质粒、过表达Gli1质粒、shRNA敲低Gli1质粒对相应各组进行细胞转染。收集转染后的各组细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK)8检测细胞的增殖能力,划痕实验检测细胞运动能力,Transwell实验检测细胞的迁移、侵袭能力,Western blotting检测LC3A/B、P62蛋白表达情况,荧光蛋白标记技术检测自噬小体LC3B蛋白表达情况。结果(1)对照组、ULK3+组、Gli1+组、ULK3+/Gli1+组、ULK3+/Gli1-组细胞培养0 h时OD值差异无统计学意义(P=1.000),培养24、48、72 h时,ULK3+组、Gli1+组、ULK3+/Gli1+组、ULK3+/Gli1-组的OD值均大于对照组,差异均有统计学意义(F=60.98、56.53、112.70,P值均<0.001)。(2)对照组、Gli1+组、ULK3+组、ULK3+/Gli1+组、ULK3+/Gli1-组细胞迁移数分别为(292.3±28.5)、(376.7±8.1)、(365.7±8.1)、(505.7±22.4)、(301.3±26.7)个,细胞侵袭数分别为(127.7±10.0、(185.0±11.5)、(191.3±8.0)、(278.3±11.0)、(128.7±4.0)个,24 h细胞迁移率分别为8.8%±0.2%、18.8%±0.3%、18.8%±0.4%、24.6%±0.4%、13.8%±0.3%,48 h细胞迁移率分别为14.9%±0.3%、30.3%±2.1%、29.8%±1.6%、50.1%±3.7%、24.9%±1.7%。ULK3+组、Gli1+组、ULK3+/Gli1+组、ULK3+/Gli1-组细胞迁移、侵袭数目,以及24、48 h细胞迁移率均大于对照组,差异均有统计学意义(F=50.82、126.80、112.20、106.70,P值均<0.001)。(3)对照组、Gli1+组、ULK3+组、ULK3+/Gli1+组、ULK3+/Gli1-组细胞LC3A/B蛋白相对表达量分别是0.18±0.01、0.41±0.02、0.41±0.03、0.63±0.03、0.25±0.03,P62蛋白相对表达量分别为1.06±0.07、0.88±0.01、0.87±0.02、0.53±0.02、0.98±0.04;ULK3+组� 展开更多

关键词 膀胱肿瘤 Un51样激酶3 胶质瘤相关癌基因同源基因1 自噬

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NEDD4L和ULK1在非小细胞肺癌中的表达及预后价值 被引量：1

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作者 吴松 郝小康 +2 位作者 张振华 高晓 杜伟平 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第14期7-13,共7页

目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)组织中NEDD4样E3泛素蛋白连接酶(NEDD4L)、UNC-51样激酶1(ULK1)的表达及临床意义。方法选取2017年1月—2018年1月三二〇一医院收治的88例NSCLC患者作为研究对象。应用R语言分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中... 目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)组织中NEDD4样E3泛素蛋白连接酶(NEDD4L)、UNC-51样激酶1(ULK1)的表达及临床意义。方法选取2017年1月—2018年1月三二〇一医院收治的88例NSCLC患者作为研究对象。应用R语言分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中NSCLC及癌旁组织中NEDD4L和ULK1 mRNA的表达差异,免疫组织化学法分析癌组织和癌旁组织中NEDD4L和ULK1蛋白的表达,Kaplan-Meier法分析NEDD4L、ULK1表达与患者生存预后的关系,单因素及多因素Cox回归分析影响NSCLC患者生存预后的危险因素。结果癌组织NEDD4L mRNA相对表达量低于癌旁组织(P<0.05),ULK1 mRNA相对表达量高于癌旁组织(P<0.05)。癌组织NEDD4L的阳性表达率低于癌旁组织(P<0.05),ULK1的阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05)。有无淋巴结转移、不同TNM分期患者的癌组织NEDD4L、ULK1阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,NSCLC患者癌组织中NEDD4L与ULK1的表达呈负相关(r_(s)=-0.587,P<0.05)。NEDD4L阴性表达患者3年总体生存率较阳性表达患者低(P<0.05),NEDD4L阳性表达患者平均生存时间较阴性表达患者长(P<0.05)。ULK1阳性表达患者3年总体生存率较阴性表达患者低(P<0.05),LK1阳性表达患者平均生存时间较阴性表达患者长(P<0.05)。单因素Cox回归分析结果显示,肿瘤TNM分期Ⅲ期[HR^(^)=1.898(95%CI:1.320,2.729)]、NEDD4L阴性表达[HR^(^)=1.654(95%CI:0.921,2.588)]和ULK1阳性表达[HR^(^)=1.692(95%CI:0.860,2.650)]是NSCLC患者预后的影响因素(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,NEDD4L阴性表达[HR^(^)=1.878(95%CI:0.961,2.995)]、ULK1阳性表达[HR^(^)=1.679(95%CI:0.785,2.884)]及肿瘤TNM分期Ⅲ期[HR^(^)=1.937(95%CI:1.131,3.317)]是NSCLC患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论NSCLC中NEDD4L表达降低,ULK1表达升高,NEDD4L、ULK1的表达与肿瘤TNM分期、淋巴结转移有关,NEDD4L阴性表达、ULK1阳性表达是NSCLC患者不良预后的� 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 NEDD4样E3泛素蛋白连接酶 unc-51样激酶1 预后 临床意义

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ULK1启动子区含有抑制ULK1转录的G4结构

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作者 刘雪萍 黄伟伟 李晓梅 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1270-1276,共7页

目的:研究G四联体(G-quadruplex,G4)结构对UNC-51样激酶1(UNC-51-like kinase 1,ULK1)基因的转录调控作用。方法:分析ULK1转录起始点上游1000 bp启动子序列的G/C含量;预测ULK1启动子区G4形成序列,利用圆二色谱、非变性聚丙烯酰胺凝胶电... 目的:研究G四联体(G-quadruplex,G4)结构对UNC-51样激酶1(UNC-51-like kinase 1,ULK1)基因的转录调控作用。方法:分析ULK1转录起始点上游1000 bp启动子序列的G/C含量;预测ULK1启动子区G4形成序列,利用圆二色谱、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和DNA银染鉴定G4;通过构建ULK1启动子报告基因质粒和用G4配体处理人前列腺癌DU-145细胞,结合报告基因检测、RT-qPCR和Western blot实验检测G4对ULK1转录的调控作用。结果:ULK1启动子区G/C含量丰富;预测发现10条G4形成序列;体外实验表明G4形成序列可以形成G4结构;细胞实验表明ULK1启动子区的G4结构负调控ULK1的转录。结论:ULK1启动子区可形成抑制ULK1转录的G4结构。这为揭示ULK1的转录调控机制提供了新的线索。 展开更多

关键词 unc-51样激酶1 G四联体 圆二色谱 转录调控

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益肾通络方对膜性肾病大鼠的肾保护作用及对AMPK/mTOR/ULK1信号通路的影响 被引量：18

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作者 张欣欣 高飞 +3 位作者 陈素枝 杨凤文 檀淼 檀金川 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期57-66,共10页

目的:通过观察益肾通络方对膜性肾病大鼠自噬相关蛋白的影响,探讨其对膜性肾病大鼠肾脏保护作用的可能分子机制。方法:80只SD大鼠随机抽取20只设为正常组,其余大鼠均采用预免疫和尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)的方法制作膜性... 目的:通过观察益肾通络方对膜性肾病大鼠自噬相关蛋白的影响,探讨其对膜性肾病大鼠肾脏保护作用的可能分子机制。方法:80只SD大鼠随机抽取20只设为正常组,其余大鼠均采用预免疫和尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)的方法制作膜性肾病大鼠模型。将模型复制成功的SD大鼠随机分为模型组,盐酸贝那普利组(10 mg·kg-1)及益肾通络方低、中、高剂量组(6.61,13.22,26.44 g·kg-1),给予相应剂量的药物灌胃,每天1次,连续灌胃4周。灌胃结束后,检测大鼠血浆白蛋白(ALB),甘油三酯(TG),胆固醇(TC),血肌酐(SCr),尿素氮(BUN),24 h尿蛋白(UTP)定量指标的变化;苏木素-伊红(HE)染色、马松(Masson)染色、碘酸六胺银(PASM)染色及透射电镜下观测肾脏病理形态改变;免疫荧光法检测肾小球中免疫球蛋白(Ig)G和补体C3的沉积;免疫组化(IHC)法观察自噬标志蛋白Beclin-1,微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ),p62蛋白的表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测腺苷酸活化蛋白激酶/雷帕霉素靶蛋白/Unc-51样激酶1(AMPK/mTOR/ULK1)信号通路相关蛋白的表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠UTP水平显著升高(P<0.01),血清中TG,TC水平显著升高(P<0.01),ALB水平显著下降(P<0.01);肾小球结构紊乱,体积增大,基底膜可见不同程度增厚和部分肾小管空泡样变性,大量胶原纤维和嗜复红蛋白沉积,足细胞足突广泛融合,肾小球毛细血管襻IgG和补体C3弥漫性沉积;自噬标志蛋白Beclin-1,LC3Ⅱ表达显著降低(P<0.01),p62蛋白表达显著升高(P<0.01);磷酸化-腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)蛋白表达显著降低(P<0.01),磷酸化-雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR),磷酸化-Unc-51样激酶1(p-ULK1)蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,益肾通络方各剂量组、盐酸贝那普利组大鼠TG,TC,UTP水平均有不同程度降低(P<0.05,P<0.01),ALB水平显著升高(P<0.01),血清SCr,BUN水平均差异无统计学意义;� 展开更多

关键词 益肾通络方 膜性肾病(MN) 自噬 腺苷酸活化蛋白激酶/雷帕霉素靶蛋白/unc-51样激酶1(AMPK/mTOR/ULK1)信号通路

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