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泛素结合酶UFC1基因的荧光表达载体构建 被引量：1
1
作者 贺爱兰 彭东海 +1 位作者 吴小玲 廖艳阳 《现代农业科技》 2011年第8期23-24,28,共3页
利用pEGFP-C3作为载体,构建与绿色荧光蛋白基因相连的泛素结合酶UFC1(ubiquitin-fold modifier conjugating enzyme 1)序列的真核表达质粒,观察其在真核细胞中的表达和定位,为进一步研究UFC1基因功能打下了基础。采用RT-PCR方法从宫颈癌... 利用pEGFP-C3作为载体,构建与绿色荧光蛋白基因相连的泛素结合酶UFC1(ubiquitin-fold modifier conjugating enzyme 1)序列的真核表达质粒,观察其在真核细胞中的表达和定位,为进一步研究UFC1基因功能打下了基础。采用RT-PCR方法从宫颈癌Hela细胞中扩增UFC1基因全长cDNA,双酶切后克隆到真核表达载体pEGFP-C3中,构建并鉴定pEGFP-C3-UFC1质粒。经脂质体介导转染Hela细胞后,在荧光显微镜下观察目的蛋白在真核细胞内的表达情况。双酶切鉴定和测序分析均证实,已成功构建pEGFP-C3-UFC1重组载体。重组载体转染Hela细胞,观察到绿色荧光蛋白表达,还可见绿色荧光呈点状分布于细胞质中;而对照pEGFP-C3质粒转染Hela细胞,绿色荧光蛋白则呈弥散状分布。成功克隆了UFC1基因,构建了pEGFP-C3-UFC1重组质粒。 展开更多
关键词 ufc1基因 克隆 真核表达载体
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泛素结合酶UFC1基因的原核表达载体构建
2
作者 周后兵 黄文雄 +4 位作者 颜斌 阳晨希 刘姝梅 吴娟 贺爱兰 《中国市场》 2012年第18期113-114,共2页
克隆人的泛素结合酶UFC1(ubiquitin-fold modifier conjugating enzyme 1)基因,并为实现UFC1基因的原核表达、纯化及多克隆抗体制备做准备。方法:采用RT-PCR方法从宫颈癌Hela细胞中扩增UFC1基因全长cDNA,双酶切后克隆到原核表达载体pGEX... 克隆人的泛素结合酶UFC1(ubiquitin-fold modifier conjugating enzyme 1)基因,并为实现UFC1基因的原核表达、纯化及多克隆抗体制备做准备。方法:采用RT-PCR方法从宫颈癌Hela细胞中扩增UFC1基因全长cDNA,双酶切后克隆到原核表达载体pGEX-4T-2中,构建并鉴定pGEX-4T-2-UFC1质粒。结果:双酶切鉴定和测序分析均证实,已成功构建pGEX-4T-2-UFC1重组载体。结论:成功构建泛素结合酶UFC1基因的原核表达载体,为在原核系统中表达UFC1重组蛋白,并制备多克隆抗体奠定了基础,也为进一步研究UFC1基因功能提供了工具。 展开更多
关键词 ufc1基因 克隆 原核表达载体
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