基于ERK1/2通路探讨八宝丹抑制骨肉瘤生长的机制

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作者 陈鹏 张冬龙 +3 位作者 刘宇 林庆宾 刘俊宁 洪振强 《福建中医药》 2023年第6期18-21,51,共5页

目的通过观察八宝丹(BBD)对U2OS细胞生长的抑制作用以及对细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)通路的影响,以期揭示八宝丹抑制骨肉瘤生长的机制。方法选用U2OS细胞株作为研究对象,实验分为对照组和八宝丹高、中、低剂量组,高剂量组药物浓度为1.5... 目的通过观察八宝丹(BBD)对U2OS细胞生长的抑制作用以及对细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)通路的影响,以期揭示八宝丹抑制骨肉瘤生长的机制。方法选用U2OS细胞株作为研究对象,实验分为对照组和八宝丹高、中、低剂量组,高剂量组药物浓度为1.5 mg/mL;中剂量组药物浓度为1.0 mg/mL、低剂量组药物浓度为0.5 mg/mL,干预结束后采用CCK8法检测八宝丹对U2OS细胞增殖的影响;流式细胞术检测八宝丹对细胞凋亡的影响;qPCR检测八宝丹对ERK1/2通路上游Ras、Raf基因表达水平的影响;Western blot检测八宝丹对Cy⁃clinD1、MEK1/2、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达量的影响。结果与对照组比较,不同浓度的八宝丹在干预24 h和48 h对U2OS细胞均有不同程度的生长抑制作用(P均<0.05);不同浓度八宝丹干预48 h均能明显降低Ras、Raf基因的表达,同时下调CyclinD1、MEK1/2蛋白的表达,下调ERK1/2与p-ERK1/2蛋白比率(P均<0.05)。结论八宝丹可抑制U2OS骨肉瘤细胞增殖,促进其凋亡,可能是通过抑制ERK1/2信号通路实现的。 展开更多

关键词 骨肉瘤 八宝丹 u2os细胞 增殖 凋亡 ERK1/2信号通路

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FHL2沉默对骨肉瘤U2OS细胞增殖与凋亡的影响 被引量：2

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作者 卢文婷 刘爽 +4 位作者 李赛赛 刘佳 徐颖茜 王建祥 王敏 《临床肿瘤学杂志》 CAS 北大核心 2018年第1期1-6,共6页

目的探讨沉默FHL2表达对骨肉瘤U2OS细胞的增殖和凋亡的影响及其相关机制的研究。方法通过构建FHL2的shRNA干扰载体p LKO.1,制备慢病毒并感染U2OS细胞,分为sh FHL2目的基因干扰组(sh FHL2)和无关序列对照组(SCR);感染96 h后采用实时定量P... 目的探讨沉默FHL2表达对骨肉瘤U2OS细胞的增殖和凋亡的影响及其相关机制的研究。方法通过构建FHL2的shRNA干扰载体p LKO.1,制备慢病毒并感染U2OS细胞,分为sh FHL2目的基因干扰组(sh FHL2)和无关序列对照组(SCR);感染96 h后采用实时定量PCR(QPCR)和Western blotting检测两组FHL2 mRNA和蛋白水平。采用MTT方法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期的变化,Western blotting检测FHL2干扰后U2OS细胞相关信号通路的蛋白表达变化。利用双荧光素酶报告基因系统检测FHL2对p53下游基因转录调控的影响。结果与SCR组比较,sh FHL2组感染96 h后FHL2 mRNA和蛋白水平均降低(P<0.05)。sh FHL2组感染24、48、72、96 h的细胞增殖比分别为1.73±0.08、2.49±0.38、3.26±0.45和4.28±0.29,其中96 h的细胞增殖比低于SCR组(P<0.05);sh FHL2组感染96 h的细胞凋亡率为(17.55±1.05)%,高于SCR组的(7.73±1.12)%,差异有统计学意义(P<0.05);sh FHL2组感染96 h的G_0/G_1期细胞为(68.18±0.78)%,高于SCR组的(59.73±2.28)%,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰FHL2表达能够显著上调p53、p21和Bax的表达水平并能增强p53对Bax启动子的促转录活性。结论沉默FHL2表达可明显抑制骨肉瘤U2OS细胞增殖并促进细胞凋亡,使细胞阻滞于G_0/G_1期;FHL2介导了p53对Bax启动子的转录调节作用。FHL2可能会成为新的肿瘤治疗靶点,其机制与p53/Bax和p53/p21通路相关。 展开更多

关键词 骨肉瘤 FHL2 u2os细胞株 增殖 凋亡

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黄芩素与黄芩苷的体外抗骨肉瘤作用的比较 被引量：4

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作者 尹军强 陈会明 +3 位作者 罗文敏 沈靖南 郑先玉 贾强 《华西药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期133-135,共3页

目的探讨黄芩素与黄芩苷对骨肉瘤细胞系U2OS和U2OS/MTX300生长抑制和诱导凋亡的作用,并比较两者间的差别。方法应用MTT比色法,测定黄芩素与黄芩苷对U2OS和U2OS/MTX300细胞株增殖的影响,检测其抑制骨肉瘤细胞的时间、剂量效应;应用形态... 目的探讨黄芩素与黄芩苷对骨肉瘤细胞系U2OS和U2OS/MTX300生长抑制和诱导凋亡的作用,并比较两者间的差别。方法应用MTT比色法,测定黄芩素与黄芩苷对U2OS和U2OS/MTX300细胞株增殖的影响,检测其抑制骨肉瘤细胞的时间、剂量效应;应用形态学观察,测定黄芩素对U2OS和U2OS/MTX300细胞的凋亡作用,并进行细胞周期的分析。结果黄芩素对U2OS和U2OS/MTX300细胞的生长抑制及诱导凋亡的作用明显比黄芩苷强,且呈时间依赖和剂量依赖性。结论黄芩素在体外对骨肉瘤U2OS和U2OS/MTX300的抑制作用明显比黄芩苷强。 展开更多

关键词 黄芩素 黄芩苷 骨肉瘤细胞系u2os 凋亡

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GFP荧光标记GLP-1受体细胞系的建立

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作者 李明瑞 季秀玲 +3 位作者 张敏 张宽仁 刘东波 魏云林 《生命科学研究》 CAS CSCD 2015年第6期501-504,共4页

为建立胰高血糖素样肽1受体(glucagon-like peptide 1 receptor,GLP-1R)药物筛选模型,真核表达载体pCMV6/GFP/GLP-1R构建好后,转染至U2OS细胞,转染后的细胞经G418筛选获得单克隆细胞株。该细胞株经Western-blot和GLP-1类似物检测,结果表... 为建立胰高血糖素样肽1受体(glucagon-like peptide 1 receptor,GLP-1R)药物筛选模型,真核表达载体pCMV6/GFP/GLP-1R构建好后,转染至U2OS细胞,转染后的细胞经G418筛选获得单克隆细胞株。该细胞株经Western-blot和GLP-1类似物检测,结果表明GLP-1R在该细胞株高表达并对GLP-1类似物有着高灵敏度与特异性的反应,可以用于GLP-1受体激动剂的筛选。 展开更多

关键词 胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R) GLP-1-GFP/u2os细胞株 Ⅱ型糖尿病

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薯蓣皂苷元对U-2OS细胞MMP-9／TIMP-1 mRNA的影响 被引量：2

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作者 洪振强 林建华 《福建中医学院学报》 2006年第3期21-24,共4页

为探讨薯蓣皂苷元抗肿瘤作用,采用四氮唑盐还原法(MTT法)观察薯蓣皂苷元对人骨肉瘸U-2OS 细胞体外生长的作用,运用RT-PCR方法探讨人骨肉瘤U-2OS细胞在薯蓣皂苷元作用后,其基质金属蛋白酶- 9(MMP-9)和基质金属酶组织抑制剂-1(TIMP-1)mRN... 为探讨薯蓣皂苷元抗肿瘤作用,采用四氮唑盐还原法(MTT法)观察薯蓣皂苷元对人骨肉瘸U-2OS 细胞体外生长的作用,运用RT-PCR方法探讨人骨肉瘤U-2OS细胞在薯蓣皂苷元作用后,其基质金属蛋白酶- 9(MMP-9)和基质金属酶组织抑制剂-1(TIMP-1)mRNA所发生的变化,结果薯蓣皂苷元对U-2OS细胞的生长具有明显的抑制作用,IC50(24h)为45 μmol／L:薯蓣皂苷元抑制U-2OS细胞MMP-9基因转录,而TIMP-1基因转录不受影响。说明薯蓣皂苷元明显抑制U-2OS细胞生长,抑制其MMP-9基因转录,对骨肉瘤侵袭和转移有一定抑制作用。 展开更多

关键词 薯蓣皂苷元 u-2os细胞 MMP-9/TIMP-1 MTT RT-PCR

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薯蓣皂苷元诱导人骨肉瘤U-2OS细胞凋亡的发生机制 被引量：1

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作者 洪振强 张俐 +1 位作者 王和鸣 洪海森 《福建中医学院学报》 2009年第5期52-54,60,共4页

目的探讨薯蓣皂苷元诱导人骨肉瘤U-2OS细胞凋亡的发生机制。方法用透射电镜、AO/EB染色法观察U-2OS细胞的形态学变化,用蛋白印迹法检测Caspase-8表达水平。结果经薯蓣皂苷元处理的U-2OS细胞呈典型的凋亡形态学改变,其Caspase-8蛋白表达... 目的探讨薯蓣皂苷元诱导人骨肉瘤U-2OS细胞凋亡的发生机制。方法用透射电镜、AO/EB染色法观察U-2OS细胞的形态学变化,用蛋白印迹法检测Caspase-8表达水平。结果经薯蓣皂苷元处理的U-2OS细胞呈典型的凋亡形态学改变,其Caspase-8蛋白表达增强。结论薯蓣皂苷元通过Caspase-8途径诱导U-2OS细胞凋亡而抑制其增殖。 展开更多

关键词 薯蓣皂苷元 u-2os细胞凋亡 CASPASE-8

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抑制survivin基因的表达对骨肉瘤细胞株U-2OS凋亡的影响 被引量：1

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作者 张文韬 段宁 +3 位作者 程辉光 宋涛 杨团民 同志超 《临床与病理杂志》 CAS 2015年第5期834-839,共6页

目的:观察抑制survivin基因表达后对骨肉瘤细胞株U-2OS凋亡的影响。方法:下调骨肉瘤细胞株U-2OS中survivin的表达,并采用免疫印迹法(western blot)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测U-2OS细胞株中survivin的蛋白和m RNA表达;同时采用甲... 目的:观察抑制survivin基因表达后对骨肉瘤细胞株U-2OS凋亡的影响。方法:下调骨肉瘤细胞株U-2OS中survivin的表达,并采用免疫印迹法(western blot)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测U-2OS细胞株中survivin的蛋白和m RNA表达;同时采用甲基偶氮哇盐(MTT)法、流式细胞术和western blot检测下调sur v inin对化疗药物顺铂增加细胞凋亡和减少存活率作用的影响,并探讨其对抗凋亡分子Bcl-2以及促凋亡分子Bax的蛋白表达的作用。结果:survivin-si RNA成功转染U-2OS细胞株后,western blot和RT-PCR检测结果均显示U-2OS细胞株中survivin的蛋白和m RNA表达水平显著低于空白对照组(P<0.05);MTT比色法结果显示下调survivin可促进化疗药物顺铂对U-2OS细胞株存活率降低及生长抑制率增加的作用;western blotting检测结果表明,与空白对照组相比,Bcl-2的蛋白表达显著减少(P<0.05),而Bax的蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论:下调survivin基因表达可促进骨肉瘤U-2OS细胞株的凋亡,并增加其对化疗药物顺铂的敏感性,为以survivin作为靶基因治疗骨肉瘤提供实验依据。 展开更多

关键词 SuRVIVIN SIRNA 肉骨瘤细胞株u-2os 化疗敏感性

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miR-194慢病毒表达质粒的构建及对人骨肉瘤细胞系U2-OS转移的相关研究

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作者 韩康 赵廷宝 +9 位作者 卞娜 蔡成魁 颜世举 王鑫 马琼 沙浩 董川 杨彤涛 周勇 马保安 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期753-757,共5页

目的:通过构建携带针对miR-194的慢病毒沉默及过表达载体,研究miR-194对骨肉瘤细胞转移的影响。方法:以miR-194前体及成熟体序列为模板,设计引物,进行PCR扩增,酶切后克隆于慢病毒载体plent-i GFP中,转染293T细胞,包装慢病毒颗粒,检测滴... 目的:通过构建携带针对miR-194的慢病毒沉默及过表达载体,研究miR-194对骨肉瘤细胞转移的影响。方法:以miR-194前体及成熟体序列为模板,设计引物,进行PCR扩增,酶切后克隆于慢病毒载体plent-i GFP中,转染293T细胞,包装慢病毒颗粒,检测滴度,最终对人骨肉瘤细胞系U2-OS进行感染。获取稳定感染细胞后,进行Transwell、划痕等实验。结果:1)慢病毒表达质粒构建成功,沉默表达及过表达重组慢病毒的滴度分别为4×108TU/mL及1.5×108TU/mL;2)稳定过表达miR-194的人骨肉瘤细胞系U2-OS的转移能力较其他组有明显降低(P<0.01)。结论:成功构建了miR-194慢病毒表达载体,miR-194的表达水平对U2-OS细胞的转移能力具有显著影响,miR-194可能成为骨肉瘤治疗的潜在新靶点。 展开更多

关键词 骨肉瘤 miR-194 慢病毒 成骨肉瘤细胞系u2-os 转移

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bFGF对骨肉瘤细胞系U2-os细胞的促凋亡作用

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作者 彭博 吴哲 张朝东 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期526-528,共3页

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对骨肉瘤细胞系U2-os细胞增殖及生存的影响,探讨bFGF在肿瘤细胞发生发展中的作用。方法:以bFGF处理U2-os细胞,采用台盼蓝排除检测法及MTT法检测细胞存活及增殖情况;用Annexin V-EGFP/PI双染流式... 目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对骨肉瘤细胞系U2-os细胞增殖及生存的影响,探讨bFGF在肿瘤细胞发生发展中的作用。方法:以bFGF处理U2-os细胞,采用台盼蓝排除检测法及MTT法检测细胞存活及增殖情况;用Annexin V-EGFP/PI双染流式细胞术及DNA梯状带检测细胞凋亡情况。结果:bFGF呈浓度、时间依赖性降低U2-os细胞活力并诱导细胞凋亡。结论:bFGF可以诱导U2-os细胞发生凋亡,生长因子在细胞的生长调控方面具有双重作用。 展开更多

关键词 骨肉瘤细胞系u2-os细胞 碱性成纤维细胞生长因子 凋亡

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Notch-1下调对双氢青蒿素抗人骨肉瘤细胞株U-2OS存活率的影响 被引量：3

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作者 齐磊 段永刚 +4 位作者 丁英奇 张龙 刘玉章 唐晓龙 伍骥 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2120-2125,共6页

目的:探讨Notch-1下调对双氢青蒿素抗人骨肉瘤细胞株U-2OS细胞存活率的影响及其作用机制。方法:双氢青蒿素(5、10、15和20μmol/L)孵育U-2OS细胞后,采用免疫印迹和实时荧光定量聚合酶链反应检测骨肉瘤细胞中Notch-1、基质金属蛋白酶(MMP... 目的:探讨Notch-1下调对双氢青蒿素抗人骨肉瘤细胞株U-2OS细胞存活率的影响及其作用机制。方法:双氢青蒿素(5、10、15和20μmol/L)孵育U-2OS细胞后,采用免疫印迹和实时荧光定量聚合酶链反应检测骨肉瘤细胞中Notch-1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和Notch-1通路下游基因Hes-1的蛋白和mRNA的表达水平。下调Notch-1表达后,采用MTT法、免疫印迹法和细胞迁移实验检测在双氢青蒿素作用下U-2OS细胞的存活率,MMP-2、MMP-9和Hes-1的蛋白表达以及U-2OS细胞的迁移能力。结果:免疫印迹法与逆转录聚合酶链反应结果显示双氢青蒿素呈剂量依赖性降低U-2OS细胞中Notch-1、MMP-2、MMP-9和Hes-1的蛋白和mRNA的表达水平(P<0.05);下调Notch-1表达后,增强了双氢青蒿素抑制U-2OS细胞生长的作用,MMP-2、MMP-9和Hes-1的蛋白表达及细胞迁移能力进一步降低,显著低于加药组(P<0.05)。结论:双氢青蒿素可抑制U-2OS细胞中Notch-1通路的活性;下调Notch-1的表达可增强双氢青蒿素抗骨肉瘤的作用。 展开更多

关键词 NOTCH-1 双氢青蒿素 人骨肉瘤细胞株u-2os 细胞存活率

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Aurora-B激酶特异性抑制剂AZD1152-HQPA对人骨肉瘤细胞株U2-OS细胞的抑制作用 被引量：2

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作者 刘志礼 王高 +3 位作者 舒勇 邹平安 周扬 黄山虎 《南昌大学学报（医学版）》 CAS 2010年第10期30-32,36,共4页

目的探讨激光(Aurora)-B激酶特异性抑制剂AZD1152-HQPA对人骨肉瘤细胞株U2-OS细胞的抑制作用。方法用不同浓度的AZD1152-HQPA(0、10、50、100、500 nmol.L-1)体外作用于人骨肉瘤细胞株U2-OS24、48、72 h,采用噻唑蓝(MTT)检测AZD1152-HQP... 目的探讨激光(Aurora)-B激酶特异性抑制剂AZD1152-HQPA对人骨肉瘤细胞株U2-OS细胞的抑制作用。方法用不同浓度的AZD1152-HQPA(0、10、50、100、500 nmol.L-1)体外作用于人骨肉瘤细胞株U2-OS24、48、72 h,采用噻唑蓝(MTT)检测AZD1152-HQPA对人骨肉瘤细胞株U2-OS细胞的抑制作用;采用Western Blotting检测AZD1152-HQPA作用于人骨肉瘤细胞株U2-OS细胞前后Aurora-B激酶的表达情况。结果 AZD1152-HQPA对人骨肉瘤细胞株U2-OS细胞生长抑制作用明显,且抑制呈时间-浓度依赖性。50 nmol.L-1AZD1152-HQPA作用24、48、72 h,人骨肉瘤细胞株U2-OS细胞中Aurora-B激酶的表达随作用时间的延长而降低。结论 AZD1152-HQ-PA能抑制U2-OS细胞生长,并且抑制作用呈时间-浓度依赖性。 展开更多

关键词 人骨肉瘤细胞株u2-os AZD1152-HQPA Aurora-B激酶 细胞增殖抑制率

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NALP1基因与骨肉瘤细胞的相关研究

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作者 刘浩 郭猛 +3 位作者 章浩 王洋 程平 纪方 《现代生物医学进展》 CAS 2012年第6期1040-1043,共4页

目的:探讨NALP1基因在骨肉瘤细胞株MG-63、U-2OS中的表达,以及高表达NALP1基因对于骨肉瘤细胞体外凋亡的影响。方法:使用RT-PCR、Western-blot法检测骨肉瘤细胞株MG-63、U-2OS中的mRNA及蛋白表达水平并与人成骨细胞株hFOB1.19比较。将NA... 目的:探讨NALP1基因在骨肉瘤细胞株MG-63、U-2OS中的表达,以及高表达NALP1基因对于骨肉瘤细胞体外凋亡的影响。方法:使用RT-PCR、Western-blot法检测骨肉瘤细胞株MG-63、U-2OS中的mRNA及蛋白表达水平并与人成骨细胞株hFOB1.19比较。将NALP1基因转染质粒PcDNA3.1,将重组质粒转染骨肉瘤细胞,分成高表达基因组、空质粒组及对照组,加入抗肿瘤药物顺铂及甲氨蝶呤促使肿瘤细胞凋亡,使用流式细胞仪测定各组肿瘤细胞凋亡率。结果:通过统计分析,骨肉瘤细胞株MG-63、U-2OS中的mRNA及蛋白表达水平均低于人成骨细胞株hFOB1.19(P<0.05),NALP1高表达组的肿瘤细胞凋亡率明显高于空白质粒组及对照组。结论:上调骨肉瘤细胞株MG-63、U-2OS中的NALP1的表达量可以促进肿瘤细胞凋亡。 展开更多

关键词 人成骨肉瘤细胞株MG-63、u-2os NALP1基因 细胞凋亡

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